一种氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种基质固相分散剂及其应用，尤其是一种以氧化石墨烯的混合材料作为基质固相分散剂及其应用，属于化学【技术领域】。本发明利用一种氧化石墨烯和弗罗里硅土的混合材料作为基质固相分散剂，以HPLC-MS/MS法的正离子模式MRM的检测方式测定小麦粉样品中的18种真菌毒素，其优点是提高真菌毒素检测方法的回收率和增强了方法的通用性，使不具正负离子切换模式的质谱也可实现检测要求，并且灵敏度和检出限能满足各项标准的要求。
【专利说明】一种氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基质固相分散剂及其应用，尤其是一种以氧化石墨烯的混合材料 作为基质固相分散剂及其应用，属于化学【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 真菌毒素（mycotoxin)是真菌在生长繁殖过程中产生的次生有毒代谢产物。目前 常见的真菌毒素有：黄曲霉毒素类（AFs)、赭曲霉毒素类（OTs)、伏马毒素类（FBs)和脱氧雪 腐镰刀菌烯醇（DON)等毒素。真菌毒素广泛污染农作物、食品及饲料等植物源性食品，研究 证实，部分真菌毒素可引起人类和动物急性或慢性中毒，损害机体的肝脏、肾脏、神经组织、 造血组织及皮肤组织等，因而国内外对真菌毒素有严格的限量规定。
[0003] 由于食品中真菌毒素含量较低，样品基质复杂，因而目标分析物的分离富集方法 成为制约检测时间和回收率的瓶颈技术。目前，常见的样品前处理技术有免疫亲和柱、固 相萃取（SPE)、QuEChERS、液液萃取和基质固相分散法（MSPD)等。其中，免疫亲和柱采用特 异性免疫反应作为分离手段，但由于各种毒素的分子结构和性质差异很大，免疫亲和柱只 能针对某种或某类结构的毒素，而不适用于多种真菌毒素的分离富集。QuEChERS有操作简 单、快速和经济的优势，但对于基质中含有较多淀粉、蛋白和脂肪的样品的净化效果不是非 常理想。液液萃取是利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或的不同，使 化合物从一种溶剂转到另一种溶剂。例如 申请人:检索到的一篇公开的中国发明专利申请就 采用了液液萃取，申请号为201410005346. 0,名称为"一种同时检测多种真菌毒素的方法"， 公开了利用高效液相色谱-串联三重四级杆法达到同时检测33种真菌毒素的方法。该专 利先用水萃取，再用相同体积的酸性乙腈萃取，以无水氯化钠和硫酸镁进行盐析，取上层的 乙腈层。由于伏马毒素 Bl、B2等毒素在水和乙腈中的溶解度都比较大，仅收集乙腈层会造 成这些毒素的大量损失。研究表明，提取大多数真菌毒素时，采用体积比为80?90%的乙 腈和20?10%的水，提取效率均达到较高水平，1 :1的乙腈水对大多数真菌毒素并不适合。 因而，采用该液液提取方法，没有进行净化，直接进样，样品基质效应明显，容易造成回收率 低，出现假阴性的结果。
[0004] 由此可见，目前真菌毒素的提取方法虽然较多，存在提取方法通用性不强，样品 的基质效应影响较大，结果回收率较低，存在假阴性问题，采用了纳米材料作吸附剂的Msro 技术有助于显著改善样品的萃取效率，非常适合固体小麦粉中真菌毒素的快检和确证工 作。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有真菌毒素提取技术存在的缺陷，提出一种以氧化石墨烯 和弗罗里硅土作为基质固相分散剂，快速准确检测小麦粉中真菌毒素的方法。
[0006] 本发明通过以下技术方案解决技术问题：一种氧化石墨烯混合材料的基质固相分 散剂，由氧化石墨烯和弗罗里硅土组成，所述弗罗里硅土的质量为氧化石墨烯的8-40倍。
[0007] 氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂的应用，包括以下步骤：
[0008] 步骤一、制备样品，将氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂和小麦粉按比例用 漩涡混匀器混合3-5min，其中小麦粉的质量为氧化石墨烯的2-10倍；混合物转移于研钵 中，研磨5-10min ;
[0009] 步骤二、小麦粉样品的提取净化，混合物用甲醇溶液淋洗样品，再用含1% -3%浓 盐酸的甲醇溶液洗脱目标分析物，收集洗脱液，30°C -50°C下氮气吹近干，加入乙腈，过滤 后待测；
[0010] 步骤三、以高效液相色谱-串联三重四级杆法的正离子模式测定小麦粉样品中的 18种真菌毒素。
[0011] 18种真菌毒素分别为青霉酸、黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲 霉毒素 G2、杂色曲霉毒素、伏马毒素 B1、伏马毒素 B2、二乙酰镳草镰刀菌烯醇、桔青霉毒素、 赭曲霉毒素、烟曲霉素、玉米赤霉烯酮、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰 刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇和展青霉毒素。
[0012] 色谱条件：色谱柱：美国 Thermo 公司 Hypersil ODS C18 柱（150mmX 2. 1mm， 3. 5 μ m);柱温25°C;进样量1 μ L ;流速0. 3mL/min ;流动相：采用梯度洗脱程序：A :10mmol/ L醋酸铵+0. 1%甲酸水溶液，B甲醇作流动相进行梯度洗脱：0-3min，90% B ;3-6min， 60-55% B ；6-12min,55-5% B ；12-14min,5% B ；14-15min,90% B〇
[0013] 质谱条件：离子源：电喷雾离子源；电离方式：ESI+;检测方式：多反应监测 (MRM);毛细管电压：3. 5kV;雾化气压力：40psi ;干燥气流速：10L/min ;干燥气温度： 350°C。MRM参数见表1。
[0014] 表1 18种真菌毒素的串联质谱检测参数
[0015]
【权利要求】
1. 一种氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂，由氧化石墨烯和弗罗里硅土组成，所 述弗罗里硅土的质量为氧化石墨烯的8-40倍。
2. 根据权利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂的应用，包括以下步 骤： 步骤一、制备样品，将氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂和小麦粉按比例用漩涡 混匀器混合3-5min，其中小麦粉的质量为氧化石墨烯的2-10倍；混合物转移于研钵中，研 磨 5-lOmin ; 步骤二、小麦粉样品的提取净化，混合物用甲醇溶液淋洗样品，再用含1% -3%浓盐酸 的甲醇溶液洗脱目标分析物，收集洗脱液，30°C -50°C下氮气吹近干，加入乙腈，过滤后待 测； 步骤三、用高效液相色谱-串联三重四级杆法，以正离子模式的MRM方法测定小麦 粉样品中的真菌毒素，色谱条件如下，色谱柱是美国Thermo公司Hypersil ODS C18柱 150mmX2. 1mm，3. 5 μ m ;柱温25 °C ;进样量1 μ L ;流速0· 3mL/min ;梯度洗脱程序是A : 10mm〇l/L醋酸铵+0. 1%甲酸水溶液，B :甲醇作流动相进行梯度洗脱，0-3min，90% B ; 3-6min，60-55% B ;6-12min，55-5% B ;12-14min，5% B ;14-15min，90% B ;质谱条件如下， 离子源是电喷雾离子源；电离方式是ESI+;检测方式是多反应监测（MRM);毛细管电压是 3. 5kV ;雾化气压力是40psi ;干燥气流速是10L/min ;干燥气温度是350°C ; 步骤四、绘制标准曲线，计算样品中各种真菌毒素的含量，计算公式为，
式中，Xi-样品中各真菌毒素的含量，单位μ g/kg; (^一从标准工作曲线上得到被测组分溶液浓度，单位纳克每毫升ng/mL ; V一样品定容体积，单位毫升mL ; m一样品的质量，单位克g。
3. 根据权利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂的应用，其特征在于： 所述步骤一中，称取0. 5g小麦粉、0. lg氧化石墨烯和2g弗罗里娃土于150mL三角瓶中，混 合物用漩涡混匀器混合3-5min，混匀后转移于研钵中，研磨5min，在5ml玻璃注射器的底层 放置一块筛板，将研磨后的混合物转移到注射器中，样品上方再放置一筛板，压实。
4. 根据权利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基质固相分散剂的应用，其特征在于： 所述步骤二中，甲醇溶液用量为5ml，淋洗的流速为lml/min，弃去淋洗液，再用含2%盐酸 的甲醇溶液洗脱目标分析物，收集洗脱液；乙腈的加入量为200 μ L，过滤用0. 22 μ m的四氟 乙烯滤膜。
【文档编号】G01N30/06GK104090057SQ201410329163
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】王峰, 张征, 张红娟, 仓义鹏 申请人:江苏省产品质量监督检验研究院