一种蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法
【专利摘要】本发明涉及一种蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法，适用于蛋白质粉中蛋白质的快速检测。蛋白质的快速检测试剂盒包括如下成分：溶剂、滤纸、缓冲剂、显色剂、展开剂、标准蛋白质甲醇溶液、定量1g蛋白质粉勺子、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。本发明通过丁二酮单肟/氯化镍的反应过滤液与蛋白质的显色反应简单快速的检测样品中是否含有蛋白质，本发明提供的蛋白质的快速检测试剂盒，简单易操作，速度快，检测效果明显、检出率高，为蛋白质检测提供新的标准。
【专利说明】一种蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于快速检测领域，具体涉及一种蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方 法。
【背景技术】
[0002] 蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活 动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命 及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部 分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋 白质9. 6~12kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid)按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。蛋白质是一种复杂的有机化 合物，旧称朊。氨基酸是组成蛋白质的基本单位，氨基酸通过脱水缩合连成肽链。蛋白质是 由一条或多条多肽链组成的生物大分子，每一条多肽链有二十至数百个氨基酸残基（-R)不 等；各种氨基酸残基按一定的顺序排列。蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除了遗 传密码所编码的20种基本氨基酸，在蛋白质中，某些氨基酸残基还可以被翻译后修饰而发 生化学结构的变化，从而对蛋白质进行激活或调控。多个蛋白质可以一起，往往是通过结合 在一起形成稳定的蛋白质复合物，折叠或螺旋构成一定的空间结构，从而发挥某一特定功 能。合成多肽的细胞器是细胞质中糙面型内质网上的核糖体。蛋白质的不同在于其氨基酸 的种类、数目、排列顺序和肽链空间结构的不同。蛋白质缺乏在成人和儿童中都有发生，但 处于生长阶段的儿童更为敏感。蛋白质的缺乏常见症状是代谢率下降，对疾病抵抗力减退， 易患病，远期效果是器官的损害，常见的是儿童的生长发育迟缓、营养不良、体质量下降、淡 漠、易激怒、贫血以及干瘦病或水肿，并因为易感染而继发疾病。蛋白质的缺乏，往往又与能 量的缺乏共同存在即蛋白质一热能营养不良，分为两种，一种指热能摄入基本满足而蛋白 质严重不足的营养性疾病，称加西卡病。另一种即为"消瘦"，指蛋白质和热能摄入均严重不 足的营养性疾病。蛋白质是人体不可缺少的物质，然而今年来许多不法商贩制造假蛋白来 蒙混消费者已获取高额利润。
[0003]目前，传统的蛋白质检测法主要有凯氏定氮法、考马斯亮兰法（Bradford法)、 Folin-酚试剂法、双缩脲法等好几种，然而已知的蛋白质检测方法又各有其缺陷。凯氏定 氮法用于标准蛋白质含量的准确测定费时太长；双缩脲法用于快速测定但不太灵敏；不同 蛋白质显色相似；Folin-酚试剂法耗费时间长，操作要严格计时，颜色深浅随不同蛋白质 变化，标准曲线不是严格的直线形式，且专一性差；考马斯亮兰法混合蛋白定量困难。因此， 寻找一种能快速简单且经济实用的蛋白质检测试剂已经刻不容缓了。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足而提供一种经济实用，检测效果 准确的测定蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法。
[0005] 技术方案：本发明公开了一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：溶剂、滤 纸、缓冲剂、显色剂、展开剂、标准蛋白质甲醇溶液、定量lg蛋白质粉勺子、毛细管、25x15的 娃胶板以及有盖玻璃瓶。
[0006] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，溶剂为乙醇。
[0007] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，缓冲剂为50~200mmol/L的磷酸盐溶液。
[0008] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，显色剂为丁二酮单肟/氯化镍的反应过滤 液。
[0009] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，显色剂为l.Og丁二酮单肟溶于 30mL50~80°C水中，加0. 8g氯化镍，冷却后加2mL浓氨水，搅拌5分钟后加200mL0. 5g/mL的 盐酸羟胺溶液，搅拌12~24小时过滤的滤液。
[0010] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，展开剂为体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸 乙酯和苯的混合液。
[0011] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒，标准蛋白质甲醇溶液浓度为0. 2~1. 5mol/ L〇
[0012] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入5-10mL溶剂溶解，加热搅拌2-3分钟后通过滤 纸过滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入1-2滴缓冲剂后滴加3-5滴显色剂，搅拌3-5分钟 后通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的观察现象为若硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高 度且反应液的点显红褐色则样品中含有大量蛋白质；相反则不含有蛋白质或少量蛋白质。
[0013] 有益效果：本发明通过丁二酮单肟/氯化镍的反应过滤液与蛋白质的显色反应简 单快速的检测样品中是否含有蛋白质，本发明提供的蛋白质的快速检测试剂盒，简单易操 作，速度快，检测效果明显、检出率高，为蛋白质检测提供新的标准。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1 一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：乙醇、滤纸、50mmol/L的磷酸盐溶液、 显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉勺 子、1. 5mol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0015] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入5mL乙醇溶解，加热搅拌3分钟后通过滤纸过 滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入2滴磷酸盐溶液后滴加5滴显色剂，搅拌3分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反 应液的点显紫红色则样品中含有大量蛋白质。
[0016] 实施例2 一种蛋白质的快速检测试剂盒及，包括如下成分：乙醇、滤纸、200mmol/L的磷酸盐溶 液、显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉 勺子、0. 2mol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0017] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入10mL乙醇溶解，加热搅拌3分钟后通过滤纸过 滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入1滴磷酸盐溶液后滴加5滴显色剂，搅拌5分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点不处于相同高度则 不含有或含有少量蛋白质。
[0018] 实施例3 一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、滤纸、150mmol/L的磷酸盐溶液、 显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉勺 子、1.Omol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0019] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入8mL乙醇溶解，加热搅拌3分钟后通过滤纸过 滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入2滴磷酸盐溶液后滴加4滴显色剂，搅拌4分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反 应液的点显淡红色则样品中含有少量蛋白质。
[0020] 实施例4 一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、滤纸、160mmol/L的磷酸盐溶液、 显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉勺 子、0. 6mol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0021] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入9mL乙醇溶解，加热搅3分钟后通过滤纸过滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入1滴磷酸盐溶液后滴加5滴显色剂，搅拌5分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反 应液的点显深红色则样品中含有大量蛋白质。
[0022] 实施例5 一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、滤纸、200mmol/L的磷酸盐溶液、 显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉勺 子、1. 3mol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0023] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入6mL乙醇溶解，加热搅拌2分钟后通过滤纸过 滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入1滴磷酸盐溶液后滴加4滴显色剂，搅拌3分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反 应液的点显红黑色则样品中含有大量蛋白质。
[0024] 实施例6 一种蛋白质的快速检测试剂盒，包括如下成分：乙醇、滤纸、75mmol/L的磷酸盐溶液、 显色剂、展开剂(体积比为1 :1〇 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液)、定量lg蛋白质粉勺 子、0. 3mol/L的蛋白质甲醇溶液、毛细管、25x15的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
[0025] 以上所述的蛋白质的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入5mL乙醇溶解，加热搅拌3分钟后通过滤纸过 滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入2滴磷酸盐溶液后滴加3滴显色剂，搅拌5分钟后 通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点不处于相同高度且 反应液的点显淡红色则样品中不含有或少量蛋白质。
[0026] 以上实施例1-6所检测的为随机于苏州各大中小超市、商店购买的不同品牌的 蛋白质粉，将检测的蛋白质粉送交正规检测机构进行检测，对比结果见表1 : 表1实施例1-6的检测结果与正规检测机构检测结果比较
【权利要求】
1. 一种蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，包括如下成分：溶齐IJ、滤纸、缓冲齐IJ、显 色剂、展开剂、标准蛋白质甲醇溶液、定量lg蛋白质粉勺子、毛细管、25x15的硅胶板以及有 盖玻璃瓶。
2. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，溶剂为乙醇。
3. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，缓冲剂为 50~200mmol/L的磷酸盐溶液。
4. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，显色剂为丁二酮单 肟/氯化镍的反应过滤液。
5. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，显色剂为l.Og 丁 二酮单肟溶于30mL50~80°C水中，加 0. 8g氯化镍，冷却后加 2mL浓氨水，搅拌5分钟后加 200mL0. 5g/mL的盐酸羟胺溶液，搅拌12~24小时过滤的滤液。
6. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，展开剂为体积比为 1 :10 :50的甲醇、乙酸乙酯和苯的混合液。
7. 根据权利要求1所述的蛋白质的快速检测试剂盒，其特征在于，标准蛋白质甲醇溶 液浓度为 〇? 2~1. 5mol/L。
8. -种权利要求1-7任一项所述的蛋白质的快速检测试剂盒的使用方法，包括如下步 骤： 步骤一，取lg待测蛋白质粉样品，加入5-10mL溶剂溶解，加热搅拌2-3分钟后通过滤 纸过滤； 步骤二，向步骤一中所述的滤液加入1-2滴缓冲剂后滴加3-5滴显色剂，搅拌3-5分钟 后通过薄层层析法检测； 步骤三，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤二中所述的反应液，点样于硅 胶板上，标准蛋白质的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸 至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，用火烤干，观察现象； 步骤四，步骤三中所述的观察现象为若硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高 度且反应液的点显红褐色则样品中含有大量蛋白质；相反则不含有蛋白质或少量蛋白质。
【文档编号】G01N30/90GK104459008SQ201410742078
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】熊开胜, 张海防, 谢建庭 申请人:苏州东辰林达检测技术有限公司