莪红片质量控制方法与流程

本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种莪红片质量控制方法。

背景技术：

心脑血管疾病是严重危害人民健康、威胁生命、影响劳动的一种常见病、多发病，发病率高。中医称脑血管病为“中风”。中风的病因是气虚、痰浊、火盛、血瘀等。大部分患者属于中经络范围，出现经络症候，少数重症者可致肾阴亏损、肝阳暴亢、挟痰挟火、横窜经络、扰动心神，形成入脏入腑的闭症或脱症。《素问·阴阳应象大论》“疏其血气，令其调达，而致和平”，“坚者削之”，“留者攻之”的理论，以活血化瘀为治疗大法。

莪术性温，味苦、辛，功能破结散结，行血止痛，又不峻烈。经药理研究发现，莪术可增加血流量。红花为菊科植物，入心、肝经，具活血通经、祛瘀止痛的作用。莪红片方中用莪术其峻烈破血之力，《本草图经》“蓬莪术，古方不见用者，今医家治积聚诸气，为臣药。”故以莪术为君药。红花《本草衍义补遗》：“红花，破留血，养血”，为臣药。君臣合力，破瘀治血养血以去邪，令血气调达。

为保证制剂的稳定性及疗效，对莪红片制定了全面的质量标准，红花为莪红片中主要药味，本法采用高效液相法对方中红花以羟基红花黄色素A为指标进行含量测定，以薄层色谱分别对红花定性鉴别。对制剂进行了长期稳定性试验，结果表明在24个月内制剂的质量无明显的变化，为制定制剂的有效期提供了有力的证据。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是提供一种莪红片的质量控制方法，该方法能够快速、准确的鉴别莪红片中的红花，并通过高效液相色谱法测定莪红片中羟基红花黄色素A的含量。

本发明公开了一种莪红片质量控制方法，包括利用薄层色谱法进行红花鉴别和利用高效液相色谱法进行羟基红花黄色素A含量测定。

进一步的，所述红花鉴别方法为：取莪红片10片，除去包衣，研细成粉末；取所述粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞后振摇15min，静置；吸取上清液，作为供试品溶液；

取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；

取空白样品，同法制成空白对照溶液；

照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:3:0.4)为展开剂展开，取出，晾干；

观察硅胶H薄层板，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，在日光下显相同颜色的斑点。

进一步的，所述羟基红花黄色素A含量测定方法为：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为26:2:72的甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算≥1500；

对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品，加25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取莪红片20片，除去包衣，研细成粉末，取所述粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，加25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，计算即得，本品每片含红花以羟基红花黄色素A计，不少于0.045mg。

进一步的，所述羟基红花黄色素A含量测定方法中，供试品溶液制备步骤的超声处理功率为300W，超声频率为50kHz，超声时间40分钟。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明的莪红片质量控制方法，提供了鉴别药物中红花的方法，并采用高效液相法对方中主要药味红花以羟基红花黄色素A为指标进行含量测定。

2)本发明的质量控制方法能更好地控制药品的质量，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现药品安全有效、质量可控。

当然，实施本发明的任一产品必不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1所示为本发明实施例1中红花鉴别薄层色谱图；

图2所示为本发明实施例2中羟基红花黄色素A含量测定对照品高效液相色谱图；

图3所示为本发明实施例2中羟基红花黄色素A含量测定供试品高效液相色谱图；

图4所示为本发明实施例2中羟基红花黄色素A含量测定阴性对照高效液相色谱图；

图5所示为本发明实施例2中羟基红花黄色素A含量线性曲线。

具体实施方式

以下将配合附图及实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

实施例1，红花的鉴别

取莪红片10片，除去包衣，研细，取粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞后振摇15min，静置；吸取上清液，作为供试品溶液。

取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

取空白样品，同法制成空白对照溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以体积比为7:2:3:0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇溶液为展开剂展开，取出晾干，在日光下进行检视。

结果如图1本发明莪红片质量控制方法的红花鉴别薄层色谱图所示，图中1、3、5、7为红花对照药材，2、4、6为供试品，8为空白对照。图中供试品色谱中，在与红花对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。空白对照样品色谱中，在与红花对照药材色谱相应位置上，未见对应的斑点。表明莪红片中含有红花。

实施例2，羟基红花黄色素A的含量测定

(1)含量测定的方法

红花为莪红片中主要药味，本法采用高效液相法对方中红花以羟基红花黄色素A为指标进行含量测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为26:2:72的甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长为403nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品，加25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取莪红片20片，除去包衣，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液的制备：取不含红花的阴性样品，依供试品溶液的制备方法，同法制得。

测定方法：精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出供试品中羟基红花黄色素A的含量，即得。

(2)含量测定的方法学研究

2.1检测波长的确定

以甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液＝26:2:72为溶剂，在350-450nm范围内对羟基红花黄色素A标准品进行扫描，羟基红花黄色素A标准品在该溶剂中，在403nm处有最大吸收。

2.2系统适用性试验

在上述色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，各进样体积20μl，记录色谱图，测定结果如图2-4所示。样品中羟基红花黄色素A理论塔板数计算：n＝3797(＞1500)；主峰与杂质峰的分离度为1.3；保留时间为13.83min；阴性对照溶液在对照品吸收峰处无吸收；表明辅料及各种分解产物对主峰干扰较小，符合系统适用性试验的要求。

2.3线性关系试验

精密称定2.0mg羟基红花黄色素A对照品于50ml容量瓶中，加入25％甲醇至刻度，摇匀，分别精密量取0.5、1、2、3、4、5、6ml于10ml量瓶中，加25％甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各20μl，照上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积(Y)对进样浓度(X，μg/ml)进行线性回归，回归方程为y＝0.2804x+0.0255，相关系数R²＝0.9997，结果表明，羟基红花黄色素A浓度在2.12～25.43μg/ml范围内，峰面积与浓度线性关系良好，见表1和图5。

表1羟基红花黄色素A线性关系试验结果

2.4最小检出量

精密量取标准品溶液中浓度为2μg/ml的样品20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，结果峰面积的响应值在线性范围内，说明最小检出量应小于2μg/ml，符合要求。

2.5精密度试验

精密量取标准品溶液中浓度为8μg/ml的样品20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，连续测定6次。结果见表2，平均值为30.018万，RSD＝0.94％，仪器精密度良好。

表2精密度试验结果

2.6稳定性试验

取莪红片10片，按含量测定项下方法制备得供试品溶液；精密吸取供试品溶液20μl，每隔一定时间进样测定一次，共测定8小时，结果见表3。RSD为1.8％，结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定。

表3稳定性试验结果

本发明的莪红片质量控制方法，提供了鉴别药物中红花的方法，并采用高效液相法对方中主要药味红花以羟基红花黄色素A为指标进行含量测定。本发明的质量控制方法能更好地控制药品的质量，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现药品安全有效、质量可控。

如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定成分或方法。本领域技术人员应可理解，不同地区可能会用不同名词来称呼同一个成分。本说明书及权利要求并不以名称的差异来作为区分成分的方式。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内，本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本发明的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。

还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的商品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种商品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系统中还存在另外的相同要素。

上述说明示出并描述了本发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。