检测左旋肉碱含量的方法与流程

文档序号:11945864阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测左旋肉碱含量的方法,其特征在于,包括:

将待测样品与显色液和乙酰辅酶A进行第一接触和第一酶标检测;

将第一接触后样品与肉碱乙酰转移酶进行第二接触和第二酶标检测;以及

基于第二酶标检测与第一酶标检测的差值,确定待测样品中左旋肉碱的含量。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一酶标检测和所述第二酶标检测的检测波长为405nm。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述乙酰辅酶A是以水溶液的形式提供的,所述乙酰辅酶A的浓度为0.2~0.4mg/ml,优选0.4mg/ml;

所述肉碱乙酰转移酶是以水溶液的形式提供的,所述肉碱乙酰转移酶的酶活为15~45units/ml。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述待测样品、所述显色液、所述乙酰辅酶A和所述肉碱乙酰转移酶的体积为100:40:50:50。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述第二接触的时间为10~20min,优选10min。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述基于第二酶标检测与第一酶标检测的差值,确定待测样品中左旋肉碱的含量是通过如下方式实现的:

将所述差值与标准曲线进行比对,其中,所述标准曲线是通过对左旋肉碱标准工作液进行酶标检测获得的。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述左旋肉碱标准工作液是左旋肉碱标准品的水溶液,所述左旋肉碱标准品的浓度分别为1.6μg/ml,3.2μg/ml,6.4μg/ml,9.6μg/ml,16μg/ml。

8.一种检测左旋肉碱含量的方法,其特征在于,包括:

(1)吸取制备好的左旋肉碱标准工作液和待测样品100uL于96孔微孔板中,每孔加入40uL显色液和50μL乙酰辅酶A溶液,混合均匀后放入酶标仪样品室中,检测波长调为405nm,5min后进行读数,结果记录为A1

(2)拿出微孔板,每孔加入50μL肉碱乙酰转移酶溶液,混合均匀后放入酶标仪样品室中,反应10min后读数,结果记录为A2

(3)以左旋肉碱标准工作液的浓度为横坐标,以左旋肉碱标准工作液的吸光值A2-A1为纵坐标,制作标准曲线;以及

(4)将待测样品的吸光值A2-A1与标准曲线比对,获得待测样品中左旋肉碱浓度,

其中,

所述左旋肉碱标准工作液是左旋肉碱标准品的水溶液,所述左旋肉碱标准品的浓度分别为1.6μg/ml,3.2μg/ml,6.4μg/ml,9.6μg/ml,16μg/ml,

所述显色液中含有0.2mg/ml的2-硝基苯甲酸,23.84mg/ml的N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸,0.74mg/ml的乙二胺四乙酸二钠,pH为7.4~7.6,

所述乙酰辅酶A溶液是乙酰辅酶A的水溶液,所述乙酰辅酶A的浓度为0.4mg/ml,

所述肉碱乙酰转移酶溶液是肉碱乙酰转移酶的水溶液,所述肉碱乙酰转移酶的酶活为15~45units/ml。

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