一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条及其制备方法与流程

本发明属于免疫分析技术领域，特别是一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术：

免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法(俗称试纸条)，该方法具有直观、快速、操作简便、费用低廉等特点，近年来被广泛开发用于非实验室环境条件下的定性、半定量的检测。免疫层析技术的应用领域包括病原体、药物、激素和代谢物在生物医学上的检测，植物检疫，兽医学，饲料/食品安全和环境污染等。免疫层析试纸条主要组分：样品垫，结合垫，硝酸纤维素膜和吸收垫。检测时以预先包被有T线和C线的硝酸纤维素膜为固定层析膜，待检测溶液滴加在样品垫上，通过毛细作用泳动向前，同时检测液中目标物与硝酸纤维素膜上的针对目标待测无的受体(抗原或抗体)发生特异性免疫反应将免疫复合物截留在T线处，而游离的标记复合物则不受影响继续泳动向前，与C线上的受体发生特异性免疫反应，可通过标记物增强显色或是酶反应获得直观结果，实现检测待检测物的目的。

目前免疫层析多重检测的实现通常采用两种方法：其一，一条试纸条上设置多条检测带；其二，多条试纸条平行并联。前者，无法解决多条检测带之间空间位阻的问题，同时多个不同免疫反应的条件平衡点很难确定；后者，简单的平行并联中没能解决液体的准确分配与同步层析问题，因而定量准确性很难控制。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条，其结构简单，可以在双通道内进行单独反应，并实现液体样品的同步均匀分配。

本发明的另一目的是提供一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条的制备方法，其工艺简单，制备的Y型双通道荧光免疫层析试纸条质量好，检测效果突出。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条，它包括基板，该基板表面涂有生物惰性粘胶；该基板呈Y型，具有竖直的直臂，该直臂顶端两侧向上延伸设有第一侧臂和第二侧臂；

该第一侧臂由下至上依次贴设有第一结合垫、第一硝酸纤维素膜及第一吸收垫，该第一硝酸纤维素膜两端分别位于该第一结合垫和第一吸收垫的底部，该第一结合垫标记有第一荧光复合物；该第一硝酸纤维素膜由下至上包被有第一检测线抗体和第一质控线抗体；

该第二侧臂由下至上依次贴设有第二结合垫、第二硝酸纤维素膜及第二吸收垫，该第二硝酸纤维素膜两端分别位于该第二结合垫和第二吸收垫的底部，该第二结合垫标记有第二荧光复合物；该第二硝酸纤维素膜由下至上包被有第二检测线抗体和第二质控线抗体；

该直臂贴设有样品垫，该样品垫顶部呈Y型，两个顶端分别位于第一结合垫和第二结合垫下端的顶面。

进一步的，所述直臂底部呈圆形，所述样品垫底部也呈圆形。

进一步的，所述样品垫与第一结合垫、第二结合垫的交叠宽度均为1mm。

进一步的，所述第一结合垫与第一硝酸纤维素膜、所述第二结合垫与第二硝酸纤维素膜的交叠宽度均为2mm。

进一步的，所述第一吸收垫与第一硝酸纤维素膜、所述第二吸收垫与第二硝酸纤维素膜的交叠宽度均为2mm。

进一步的，所述第一硝酸纤维素膜和所述第二硝酸纤维素膜均为纳米纤维膜。

进一步的，所述第一吸收垫和第二吸收垫均为吸水纸。

进一步的，所述基板为PVC，所述第一侧臂和第二侧臂之间的夹角为90度。

一种上述的Y型双通道荧光免疫层析试纸条的制备方法，它包括下列步骤：

A.将第一硝酸纤维素膜分别进行第一检测线抗体和第一质控线抗体的包被，将第二硝酸纤维素膜分别进行第二检测线抗体和第二质控线抗体的包被；

B.将第一硝酸纤维素膜和第二硝酸纤维素膜在37℃烘箱干燥2h备用；

C.将样品垫、第一结合垫和第二结合垫分别用处理液浸泡30min，37℃烘箱中干燥过夜；

D.将处理后的第一结合垫和第二结合垫分别用第一荧光复合物和第二荧光复合物标记，37℃烘箱中干燥2h备用；

E.将第一硝酸纤维素膜粘贴于所述第一侧臂中部，将第一结合垫粘贴于第一侧臂下部并与该第一硝酸纤维素膜下端重叠；将第一吸收垫粘贴于第一侧臂上部并与该第一硝酸纤维素膜上端重叠；

F.将第二硝酸纤维素膜粘贴于所述第二侧臂中部，将第二结合垫粘贴于所述第二侧臂下部并与该第二硝酸纤维素膜下端重叠；将第二吸收垫粘贴于所述第二侧臂上部并与该第二硝酸纤维素膜上端重叠；

G.将样品垫粘贴于直臂表面，并使该样品垫的两个顶端分别重叠压设在第一结合垫和第二结合垫的底端。

进一步的，所述基板的生物惰性粘胶表面粘贴有保护纸，在粘贴所述第一硝酸纤维素膜之前，将该保护纸撕除；所述第一硝酸纤维素膜和所述第二硝酸纤维素膜均为静电纺丝纳米纤维膜。

本发明的有益效果是：本发明Y型双通道荧光免疫层析试纸条使得液体样品的同步均匀分配得以实现，而同时各通道内层析的单独反应又为不同生物分子保留最优选反应条件提供了可能，最终为各类免疫层析试纸条的多靶标检测提供了支撑。

附图说明

图1是本发明Y型双通道荧光免疫层析试纸条的结构示意图。

图2是本发明Y型双通道荧光免疫层析试纸条的三种检测结果示意图。

具体实施方式

为了使本发明的技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例与附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如图1所示，本发明提供一种Y型双通道荧光免疫层析试纸条，它包括基板1，例如PVC板，该基板1表面涂有生物惰性粘胶。该基板1呈Y型，具有竖直的直臂11，该直臂11顶端两侧向上延伸设有第一侧臂12和第二侧臂13。该第一侧臂12和第二侧臂13之间的夹角为90度。

该第一侧臂12由下至上依次贴设有第一结合垫2、第一硝酸纤维素膜3及第一吸收垫4，该第一硝酸纤维素膜3两端分别位于该第一结合垫2和第一吸收垫4的底部，该第一结合垫2标记有第一荧光复合物。该第一硝酸纤维素膜3由下至上包被有第一检测线抗体和第一质控线抗体。

该第二侧臂13由下至上依次贴设有第二结合垫5、第二硝酸纤维素膜6及第二吸收垫7，该第二硝酸纤维素膜6两端分别位于该第二结合垫5和第二吸收垫7的底部，该第二结合垫5标记有第二荧光复合物。该第二硝酸纤维素膜6由下至上包被有第二检测线抗体和第二质控线抗体。优选的，该第一吸收垫4和第二吸收垫7可以为吸水纸，另外，该第一硝酸纤维素膜3和该第二硝酸纤维素膜6均为静电纺丝纳米纤维膜，使得层析膜的膜参数可按需调整，可提高检测灵敏度，具有很好的使用价值。

该直臂11贴设有样品垫8，用于承接和过滤检测样品。该样品垫8顶部呈Y型，两个顶端分别位于第一结合垫2和第二结合垫5下端的顶面。该直臂11底部呈圆形，该样品垫8底部也呈圆形，用于储存释放检测液体。

本发明因为样品垫8的均匀性，使得液体样品的同步均匀分配得以实现，而同时各通道内层析的单独反应又为不同生物分子保留最优选反应条件提供了可能，最终为各类免疫层析试纸条的多靶标检测提供了支撑。

具体来说，该样品垫8与第一结合垫2、第二结合垫5的交叠宽度均为1mm。该第一结合垫2与第一硝酸纤维素膜3、该第二结合垫5与第二硝酸纤维素膜6的交叠宽度均为2mm。该第一吸收垫4与第一硝酸纤维素膜3、该第二吸收垫7与第二硝酸纤维素膜6的交叠宽度均为2mm。

本发明还提供一种上述的Y型双通道荧光免疫层析试纸条的制备方法，它包括下列步骤：

将第一硝酸纤维素膜3分别进行第一检测线抗体和第一质控线抗体的包被，将第二硝酸纤维素膜6分别进行第二检测线抗体和第二质控线抗体的包被；

将第一硝酸纤维素膜3和第二硝酸纤维素膜6在37℃烘箱干燥2h备用；

将样品垫8、第一结合垫2和第二结合垫5分别用处理液浸泡30min，37℃烘箱中干燥过夜；

将处理后的第一结合垫2和第二结合垫5分别用第一荧光复合物和第二荧光复合物标记，37℃烘箱中干燥2h备用；

该基板1的生物惰性粘胶表面粘贴有保护纸，在粘贴该第一硝酸纤维素膜3之前，将该保护纸撕除；

将第一硝酸纤维素膜3粘贴于该第一侧臂12中部，将第一结合垫2粘贴于第一侧臂12下部并与该第一硝酸纤维素膜3下端重叠；将第一吸收垫4粘贴于第一侧臂12上部并与该第一硝酸纤维素膜3上端重叠；

将第二硝酸纤维素膜6粘贴于该第二侧臂13中部，将第二结合垫5粘贴于该第二侧臂13下部并与该第二硝酸纤维素膜6下端重叠；将第二吸收垫7粘贴于该第二侧臂13上部并与该第二硝酸纤维素膜6上端重叠；

将样品垫8粘贴于直臂11表面，并使该样品垫8的两个顶端分别重叠压设在第一结合垫2和第二结合垫5的底端。

本发明所述的Y型双通道荧光免疫层析试纸条制备方法，工艺简单，无交叉影响，适合大规模的工业生产。

本发明通过Y型的设计可以实现一个试纸条上双通道的功能，使得检测溶液能均匀分配到Y型双通道荧光免疫层析试纸条两壁的单独检测区域内，可以实现双通道内液体样品的均匀、同步分配，可以解决双通道同步层析所需要的试纸条对应各组分的均一性的问题。

在实施检测之前，针对目标检测物，分别研制各自对应的单靶标基于荧光纳米粒子的免疫层析器件，获得各自检测对应的内部尽可能宽泛、之间尽可能平行的层析反应体系；将两个检测的反应体系相互平衡融合，同时利用双通道免疫层析器件使得两个检测反应同步均匀的进行，从而在保证各自敏感性与特异性的前提下，实现双通道标的同步检测。

本发明还可以进行双通道免疫层析判读仪设计：通过二维移动平台、智能定位系统、激发系统、接收系统、控制系统的筛选与优化，结合智能数理算法，实现基于荧光纳米粒子的双通道免疫层析器件上特异性免疫检测信号的自动剥离与提取。

本发明Y型双通道荧光免疫层析试纸条制备方法的具体操作过程为：撕去基板上的粘胶保护纸层露出生物惰性粘胶，以第一侧臂12为例，包被好第一检测线抗体和第一质控线抗体的第一硝酸纤维素膜3贴于距直臂11一定距离处，将第一荧光标记复合物标记的第一结合垫2贴于距直臂适当距离处，再将样品垫8和第一吸收垫4贴于第一硝酸纤维素膜3两端。检测样品时，将200μl待检样品溶液加入组装好的试纸条的样品垫8的圆垫上，样品溶液在毛细作用下向前泳动，经过第一结合垫2时其上干燥的第一荧光标记复合物复溶并随样品溶液向前迁移，在特定的抗原或抗体区带位置发生特异性结合，荧光颗粒在相应区域聚集增强显色，可在紫外灯下用肉眼进行观察，也可用专用配套仪器进行读数，从而实现定性和定量的检测。如图2所示，以夹心式反应为例说明检测结果：Y型双通道荧光免疫层析试纸条的一端阳性结果A呈现两条线，即检测线9和质控线10；阴性结果B只出现一条线，即质控线10；如果无线条出现C则说明检测时间太短或是试纸条失效。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的结构作任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明的技术方案的范围内。