本发明属于药物含量的检测方法，具体涉及一种金银花中木犀草素的含量测定方法。
背景技术：
木犀草素（luteolin）是一种天然黄酮类化合物，存在于全叶青兰、辣椒、野菊花、金银花、紫苏等多种植物中。具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等，其中以镇咳和祛痰作用最为显著，临床主要用于止咳、祛痰、消炎、治疗心血管疾病、治疗“肌萎缩性脊髓侧索硬化症”，sars，肝炎等。木犀草素提纯物为黄色针状结晶，熔点328-330℃。微溶于水，具弱酸性，可溶于碱性溶液中，正常条件下稳定。
由于木犀草素良好、广谱的药理作用，目前多个制剂中含有木犀草素，并且药品的质量以木犀草素的含量高低作为一个评价标准，故制定一种金银花中木犀草素的含量测定方法可以有效的控制药品中木犀草素的含量，进而评价药品质量。
忍冬藤为忍冬科植物忍冬（lonicerajaponicathunb）的干燥茎枝，我国忍冬属植物资源丰富，共有98种，分布于全国各个省区，尤以西南各省最多。忍冬藤收载于2010年版一部，具有清热解毒、疏风通络功能。临床用于温病发热、热毒血痢、痈舯疮疡、风湿热痹。中国药典2010年版一部将绿原酸作为忍冬藤质量控制的指标，但忍冬藤除了含绿原酸外，还含有环烯醚萜苷类、黄酮类、皂苷类等成分，现代药理研究表明忍冬藤中有机酸和黄酮类均有明显的生理活性，绿原酸和咖啡酸具有显著的抗菌作用，木犀草素等黄酮类化合物具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等多种药理作用，现已备受人们关注，因此，仅以绿原酸作为忍冬藤质量控制的指标，存在一定的局限性，有必要建立多指标评价该药材质量的分析方法，为此，我们经过不断地研究摸索，建立了忍冬藤中木犀草素的含量测定方法，并对三批忍冬藤药材进行了含量测定，结果显示该方法简单、快速、可靠，可用于忍冬藤药材的质量控制。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种金银花中木犀草素的含量测定方法，采用高效液相色谱法，简便快速、通用性强，出峰快，省时省力，经济环保。
为实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
所述方法采用的色谱条件为：
色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；以乙腈-0.5%磷酸溶液作为流动相（乙腈与0.5%磷酸溶液体积比为46:54）；柱温为30℃；检测波长为350nm；流速为1.0ml/min；进样量为20μl。
本发明有益效果
本发明提供的方法能准确有效的测定金银花中木犀草素的含量，误差小，可作为监控金银花药材的质量指标，确保金银花药材的质量和临床效果，适于实验室及工业生产应用。
具体实施方式
、仪器与条件
日本岛津lc-10atvp泵，岛津spd-10avp紫外可见光多波长检测器，rheodyne7725i进样器及tl9900色谱数据工作站；色谱条件如下：
色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；
以乙腈-磷酸溶液作为流动相，所述乙腈的质量分数为46%，磷酸溶液的浓度为0.5%；柱温为30℃；检测波长为285nm；流速为1.0ml/min；进样量为20μl；
2、试验药物：金银花药材3批，来源于四川某中药材公司、木犀草素对照品，来源于中国药品生物制品鉴定所。
、检测方法：
3.1供试品溶液的制备：精密称取干燥的金银花样品5g，置索氏提取器中，加入120ml的石油醚，浸泡12h，70℃水浴中提取至无色，挥干石油醚，之后加入100ml甲醇，超声提取3次，过滤、浓缩提取液，定容至5ml的容量瓶中，用0.45μm滤膜过滤，即为测定木犀草素的供试品溶液，备用。
3.2对照品溶液的配制
精密称取木犀草素对照品适量，用乙腈溶解稀释，制备成每ml含木犀草素。1μg的对照品溶液，即可。
3.3测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20µl，每个供试品做5个平行，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。
、检测结果
3批金银花药材中木犀草素的含量分别为：0.00246%、0.00239%、0.00237%。含量复合中国药典要求。
、线性关系的考察
精密称取干燥至恒重的木犀草素对照品适量，加乙腈溶解，制备含木犀草素浓度为0.1mg/ml的对照品母液，精密吸取对照品母液，制得含木犀草素0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml的一系列对照品溶液，分别精密吸取20μl，注入高效液相色谱月，按上述色谱条件测定，按外标法计算，结果显示木犀草素在0.05～0.6mg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0.9999。
检测限及最低检测浓度
精密吸取线性关系试验项下0.05mg/ml的溶液1ml，置20ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，为样品溶液，进样量为20μl。当峰信号噪音与基线噪音比约为3∶1时得最小检测浓度为0.054μg/ml，最小检测量为8.9ng。
精密度试验
以线性关系项下浓度为0.05mg/ml的溶液为样品溶液，连续进样6次，求取峰值面积，木犀草素峰面积rsd＝0.35％(n＝6)，表明该方法精密度良好。
重现性试验
对第一批次的金银花药材样品制备供试品溶液，独立进行五次测定，计算其相对标准偏差，结果木犀草素的相对标准偏差为0.52%，表明方法重现性良好。
稳定性试验
取同一供试品溶液(第一批次金银花药材)，分别放置0、2、4、8、24h后，按上述色谱条件操作，依法测定，木犀草素的峰面积相对标准偏差为0.03％(n＝5)。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
回收率试验：
精密称取样品5份（第一批次，其中木犀草素含量按5次测定平均值计算，为0.00246%，每份称样量约为1.0g，置平底烧瓶中，精密加入浓度为50.1μg/ｍl的木犀草素对照品0.5ｍl，按金银花药材样品制备供试品溶液的制备方法操作,按上述色谱条件进行检测，计算回收率。结果其平均回收率为100.812%，符合要求。