本发明属于皮革化学品性质检测技术领域，具体涉及一种利用分光光度法测定铬鞣剂有效成分含量的方法。
背景技术：
铬鞣是目前制革工业中使用最广泛的鞣法，在此过程中使用的铬鞣剂cr2o3含量一般为25±1%。然而这类铬鞣剂吸收率较低，一般只有60—75%，且存在中性盐污染的问题，因此市面上推出了很多高吸收铬鞣剂和不浸酸铬鞣剂等新产品，以提高铬鞣剂的吸收率，减少铬鞣过程的污染（杜晓声，卢丽旭，单志华，等.高吸收铬粉应用研究[j].中国皮革，2012,41（7）：6-8；陈占光，陈武勇.不浸酸铬鞣剂的研制及性能表征[j].中国皮革，2001,30（23）：6-10）。此外，为了使铬鞣剂耐碱稳定性更好，鞣制的蓝湿革粒面平细，通过加入蒙囿剂生产了蒙囿型铬鞣剂（李国英，张铭让.kmc系列铬鞣粉剂的分子设计和研制[j].皮革科学与工程，1992,2(1):13-21）。同时，为了简化操作，自碱化铬鞣剂也逐渐被开发并投放市场（韩玉林，熊健.新型自碱化皮革铬鞣剂的合成[j].精细与专用化学品，1997，17:3-4）。虽然铬鞣剂的具体性质有所差异，但是目前铬鞣剂的有效成分含量均以cr2o3计，根据制革用粉状铬鞣剂国家标准（gb/t24331-2009）的规定，不同类型的铬鞣剂中cr2o3含量均需满足一定的含量，如标准型、蒙囿型、蒙囿交联型和蒙囿自碱化型铬鞣剂的cr2o3含量应分别大于24%、23%、22%和19%。
与常规铬鞣剂相比，蒙囿型铬鞣剂、自碱化铬鞣剂、高吸收铬鞣剂和不浸酸铬鞣剂等特殊铬鞣剂在生产过程中均要添加其他助剂，助剂的加入不仅会降低铬鞣剂中的cr2o3含量，还会增加产品成本。以铬鞣剂中cr2o3含量来看，蒙囿型铬鞣剂、自碱化铬鞣剂、高吸收铬鞣剂和不浸酸铬鞣剂等cr2o3含量均低于常规铬鞣剂，但是产品的价格则大大高于常规铬鞣剂，因此采用cr2o3含量来衡量铬鞣剂的有效物质，不能客观地反应特殊铬鞣剂的性质，不利于这类产品的推广。然而目前国内外除了采用cr2o3含量评价铬鞣剂的有效成分含量外，其他测定铬鞣剂有效成分含量的方法还未见报道。
技术实现要素：
针对目前测定铬鞣剂有效成分含量方法单一，且不能客观表达特殊铬鞣剂性能的现状，发明人在已公开的铬鞣剂组成、结构和性能测试方法和技术，以及其他鞣剂组成、结构和性能测试方法和技术的基础上，结合现有铬鞣技术和铬鞣机理所公开的材料，深入研究了铬鞣剂在鞣制过程中的反应过程及其与皮胶原蛋白的作用规律，提出了一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法。
在铬鞣过程中，铬通过与皮胶原蛋白上离解的羧基形成配位键而产生鞣制效果。在此过程中，铬从鞣液进入皮革内部，表现为鞣液中铬含量减少，皮革中铬含量增加。由于皮革在鞣制过程中引入了铬，会使得皮革的质量增加，因此，理论上可以采用重量法测定铬鞣剂的有效成分。然而发明人通过实验，发现通过测定皮革在鞣制前后的质量差以表征铬的吸收程度，从而测定铬鞣剂有效成分含量的方法是不可行的，主要原因为：首先，由于取样和实验室测试条件的限制，检测过程中铬鞣规模较小，因此可用于进行恒重的鞣制前、后的皮或革也较少，这就使得测试的相对误差很大；其次，由于鞣制前后的皮或革水分含量在70%左右，因此恒重时间长、效率低，不能满足企业常规检验和出厂检验的要求；再次，在铬鞣过程中，裸皮不仅吸收了铬，还吸收了铬鞣剂中的中性盐等其他物质，而这些物质是没有鞣制效果的，但是其依然会导致鞣制前后皮革质量的变化；最后，由于在鞣制过程中，皮内的可溶性蛋白会溶出，使得鞣制后皮革重量的增加小于其实际吸收的铬鞣剂中的有效成分，此外，不同批次实验采用的皮可溶性蛋白含量和在鞣制过程中的溶出量不一致，使得测试可重复性和稳定性差。
铬鞣剂溶液为蓝绿色，其在可见光谱区域内有两个特征吸收峰，分别位于420nm左右和580nm左右（陈武勇，李国英.鞣制化学（第三版）[m].北京：中国轻工业出版社，2011）。溶液的吸光度与其浓度在一定范围内具有线性正相关性，因此通过测定鞣制前后鞣液的吸光度，可以反映出鞣制过程中铬的吸收情况，表征铬鞣剂中有效成分含量的变化。铬鞣剂中的中性盐、蒙囿剂等均为有机酸及其盐，这些物质在可见光区没有吸收，不会对结果造成干扰；皮内的可溶性蛋白也没有可见吸收光谱，依然不会干扰铬的吸光度。因此，在一定条件下，铬鞣剂溶液的的吸光度仅由铬元素的含量决定。紫外—可见分光光度法是进行常量和微量物质含量测定的重要方法，该方法操作简便，所需被测物少，误差小，可重复性和稳定性强，因此可以采用紫外—可见分光光度法测定铬鞣剂的有效成分含量。
由于不同铬鞣剂组成和性质不同，其紫外—可见特征吸收峰的位置也不相同，在进行测试前，首先采用紫外—可见分光光度计对铬鞣剂溶液进行扫描，确定特征吸收峰位置，并以该特征吸收波长作为后续试验的条件，可以消除铬鞣剂中不同中性盐对铬特征吸收波长的影响，进一步减少误差，提高测试精度和可信度。经过多次试验，发明人发现铬鞣剂母液浓度为2-10g/l时，制作标准曲线时线性较好，同时测试结果重复性好和误差较小。同时，发明人经过多次试验发现，用0、10、20、30和40ml的铬鞣剂母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度制得不同浓度的标准溶液，在事先确定的特征吸收波长处测定标准溶液的吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，标准曲线可以覆盖测试范围，同时标准曲线相关系数r2较高，标准曲线线性好。
众所周知，动物皮各部位纤维编织情况不同，存在很大的部位差。同时，由于准备工段处理工艺、材料以及原料皮来源不同，裸皮在鞣制过程中对铬的吸收情况也有所差异。因此，发明人采用标准化的分析纯铬皮粉代替裸皮进行鞣制，既可以消除裸皮部位差对测试产生的干扰，又避免了裸皮来源不同对测试结果的影响，提高了测试的可操作性和可重复性。在铬鞣过程中，ph值是影响结合的关键因素，而不同的铬鞣剂由于分子组成和结构的不同，其鞣制结束时的ph也有差异，因此在本发明提供的一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法中，需要调节鞣制体系ph至4.0，以使铬充分的与皮胶原蛋白结合，同时又不使铬发生沉淀而吸附于皮上，这是准确测定铬鞣剂有效成分含量的关键。
在上述研究的基础上，发明人提供了一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法，其特征在于通过以下7步操作即可测定铬鞣剂的有效成分含量：
（1）、称取一定量的铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为cg/l的母液，母液浓度为2—10g/l；
（2）、分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；
（3）、使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，确定母液的特征吸收波长，在该波长下分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线的斜率(k)与相关系数(r2)，r2应当大于0.99；
（4）、实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min，使用浓度为1mol/l的盐酸或1mol/l氢氧化钠溶液调节鞣液ph至4.0，并记录盐酸或氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；
（5）、空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min，加入与实验样相同体积的盐酸或氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；
（6）、实验样和空白样振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，收集滤液，再用滤纸过滤滤液，过滤后的滤液在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；
（7）按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分含量，测试需进行平行试验，平行试验结果之差小于1.00%；
上述操作中，测试用水为蒸馏水，所用试剂除铬鞣剂外均为分析纯试剂。
本发明提供的一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法中，母液浓度为2—10g/l，母液特征吸收波长为420nm左右特征吸收波长或580nm左右特征吸收波长的任意一个。本发明提供的一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法可以用于测定常规铬鞣剂、蒙囿型铬鞣剂、自碱化铬鞣剂、高吸收铬鞣剂或不浸酸铬鞣剂中任意一种的有效成分含量。
在本发明提供的一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法中，铬鞣剂母液浓度为2-10g/l，在此浓度下后续制作标准曲线的线性好，同时也有利于测试过程中鞣制反应的发生。母液浓度低于2g/l或高于10g/l，标准曲线线性不好，测试结果相对误差大。本发明中配制的母液为1000ml，可在满足测试用液需求的同时，用于润洗测试过程中量取溶液体积的玻璃仪器，可以减少实验误差并提高测试的可重复性和可信度。本发明采用0、10、20、30和40ml的母液配制标准溶液，所建立标准曲线覆盖了测试范围，同时标准曲线的相关系数r2大于0.99，表明标准曲线具有良好的线性关系，适合于定量分析。虽然铬鞣剂溶液在420nm左右和580nm左右处均有两个特征吸收峰，然而由于铬鞣剂组成和结构的差异，这两个特征吸收峰的吸收波长和相对吸光度会有所差异，在测试前使用紫外-可见分光光度计扫描母液，确定特征吸收峰和对应的吸收波长，选择相对吸光度较高的特征吸收波长，这样可以提高测试灵敏度，减少误差，有针对性的对不同铬鞣剂的有效成分含量进行测定。
在本发明提供的一种测定铬鞣剂有效成分含量的方法中，皮粉用量为10g，鞣制时母液用量为100ml，可以获得相对较多的滤液用于测试，同时滤液吸光度也在标准曲线范围内。采用40℃鞣制，并调节鞣制体系ph为4.0，均是模拟常规铬鞣过程中的相关参数设置的，与铬鞣剂的实际使用情况相似，测试结果贴近实际生产，同时此条件下鞣制效果好，铬鞣剂中的铬既可以充分与皮胶原结合，又不会产生沉淀。在空白样中加入相同体积的调节实验样ph所用盐酸或氢氧化钠溶液，可以消除加入铬鞣剂以外的其他物质对滤液吸光度的影响，提高测试准确性和可重复性。通过测试实验样和空白样滤液的吸光度，并进行平行试验，平行试验结果之差小于1.00%，表明本方法稳定性好、重现性高。
此外，本发明还具有以下优点：
第一，本发明提供的方法操作简单，所用仪器、设备和试剂均为常规皮化材料生产厂家实验室或市面上的常规物品，可操作性强；
第二，本发明提供的方法测试结果重现性好，结果误差小，测试稳定性强，同时测试速度快，所需样品少，可作为常规检验和出厂检验的测试方法。
具体实施方式
下面给出实施例以对本发明作更详细的说明，有必要指出的是以下实施例不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述本发明内容对本发明做出的一些非本质的改进和调整仍属于本发明的保护范围。
实施例1
称取一定量的常规铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为6g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在423nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9982；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例2
称取一定量的蒙囿铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为10g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在585nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9968；实验样准备：称取10.00g铬皮粉250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例3
称取一定量的不浸酸铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为8g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在588nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9956；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例4
称取一定量的自碱化铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为2g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在420nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9934；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的盐酸溶液调节鞣液ph为4.0，并记录盐酸溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的盐酸溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例5
称取一定量的高吸收铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为5g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在584nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9938；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例6
称取一定量的不浸酸铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为4g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在588nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9989；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例7
称取一定量的高吸收铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为6g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在580nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9971；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例8
称取一定量的不浸酸铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为6g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在587nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9982；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
实施例9
称取一定量的常规铬鞣剂，溶解后转移至1000ml容量瓶并定容至刻度线，配制铬鞣剂浓度为7g/l的母液；分别量取0、10、20、30和40ml母液于100ml容量瓶，并用蒸馏水定容至刻度，制得不同浓度的标准溶液；使用紫外-可见分光光度计对母液进行扫描，在425nm特征吸收波长处，分别测定不同浓度标准溶液的吸光度值，并以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，计算标准曲线斜率k和相关系数r2，r2值为0.9921；实验样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入母液100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与母液充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，使用浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液调节鞣液ph为4.0，并记录氢氧化钠溶液用量，随后继续振荡60min；空白样准备：称取10.00g铬皮粉于250ml碘量瓶中，加入蒸馏水100ml后盖紧瓶塞，用手振荡使皮粉与蒸馏水充分接触，随后将碘量瓶放入至40℃的水浴振荡器中振荡5min后，加入与实验样相同体积的氢氧化钠溶液，随后继续振荡60min；振荡结束后先采用尼龙滤布过滤，再利用滤纸过滤，收集实验样和空白样滤液，并在测定标准曲线的波长处，使用紫外-可见分光光度计测定实验样和空白样滤液的吸光度值a实和a空；按照有效成分含量（%）=[k×c-(a实-a空)]/(k×c)×100%，计算铬鞣剂的有效成分。
为了本发明提供方法的可重现性和稳定性，实施例中平行试验结果之差也列于表1。