一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒与流程

本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒。

背景技术：

甲基睾丸酮是一种人工合成的类固醇类激素，又名甲睾酮、甲基睾酮、甲级睾丸素，在生物养殖上具有提高产量和控制性别等作用，在家禽动物体内的代谢较慢，极小的残留会对人类造成巨大潜在危害，如扰乱人体激素平衡、造成胎体中毒等。现在世界上的大多数国家已立法限制或者禁止水产品中使用此激素。我国在2001年就明确的规定不允许使用甲基睾丸酮等激素内药物，也规定为禁止使用兽药，在所有动物性食品的所有可食组织中不得检出。

目前食品中甲基睾丸酮的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、气相色谱质谱法、酶联免疫法等。气质联用法需要对样品进行衍生处理，操作复杂，重现性差；酶联免疫法同意出现样品假阳性，定量不够准确 ，较试用于样品初筛；液相色谱串联质谱法灵敏度和特异性高，但价格昂贵，HPLC仪器价格适中，检测的准确度和灵敏度高，是目前常用的方法。固相萃取HPLC采用不同类别的SPE小柱对样品净化，再经过HPLC分析，达到分离效果。本发明通过对样品欠处理方法的研究，确定适合的样品提取和净化方法，优化高效液相色谱条件。但是这些方法过于复杂，成本较高，只适用于实验室中，并不适合人们在日常生活中对肌肉中的甲基睾丸酮进行检测，并且现在的试剂盒基本上不能够对试剂盒内的试管和玻璃瓶等进行保护，在运输的过程中容易使试剂盒内的试管和玻璃瓶等损坏。

技术实现要素：

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，具备人们在使用时十分方便，人们在平常生活中就能对甲基睾丸酮进行检测以及对试剂盒内的试管和玻璃瓶等易碎物品进行保护等优点，解决了现在检测甲基睾丸酮的方法过于复杂，成本较高，并不适合人们在日常生活中对肌肉中的甲基睾丸酮进行检测以及现在的试剂盒基本上不能够对试剂盒内的试管和玻璃瓶等进行保护的问题。

（二）技术方案

为实现上述人们在使用时十分方便，人们在平常生活中就能对甲基睾丸酮进行检测以及对对试剂盒内的试管和玻璃瓶等易碎物品进行保护的目的，本发明提供如下技术方案：一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法，包括如下步骤：

1）鸡去皮，沿背脊取肌肉，称取100g置于匀浆机中充分搅拌；

2）取5.0g搅拌均匀的鸡肉放置于50ml烧杯中，用15ml乙醚提取，磁力搅拌15min，转移至离心管中，用5ml乙醚洗净烧杯，合并至离心管中，人工搅拌10min；

3）离心完成后，将离心管中的鸡肉放置于微孔板的微孔内，鸡肉的体积不能大于微孔板微孔容积的2/3；

4）往微孔板的微孔内依次加入用HPR标记的人甲基睾丸酮溶液，然后将微孔板倾斜放置，倾斜的角度为10至15度，使人甲基睾丸酮溶液与微孔板内部的鸡肉充分接触；

5）微孔板内部的鸡肉中含有的甲基睾丸酮会与用HPR标记的人甲基睾丸酮溶液抗体结合，形成抗体复原酶化合物；

6）将微孔板内部的鸡肉彻底洗涤，再加入底物TMB显色，观察鸡肉的颜色，如果鸡肉的内部不含有甲基睾丸酮，则鸡肉没有颜色；如果鸡肉的内部含有甲基睾丸酮，则TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酶的作用下转化成最终的黄色；

7）颜色的深浅和样品鸡肉中的甲基睾丸酮呈正相关，颜色越深则甲基睾丸酮的含量越高，颜色越浅则甲基睾丸酮的含量越低。

一种鸡肉中甲基睾丸酮检测试剂盒，包括试剂盒，所述试剂盒的内部设置有第一横板，所述第一横板上开设有等距离排列的人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽，两个人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽之间开设有TMB检测液试剂瓶放置槽，所述TMB检测液试剂瓶放置槽的一侧开设有乙醚溶液试剂瓶放置槽，所述人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽、TMB检测液试剂瓶放置槽和乙醚溶液试剂瓶放置槽的内部均设置有海绵垫，所述第一横板的底部设置有第二横板，所述第二横板上开设置有试管放置槽，所述试管放置槽的一侧开设有离心管放置槽，所述离心管放置槽远离试管放置槽的一侧开设有烧瓶放置槽，所述第二横板的底部设置有微孔板，所述微孔板的底部与试剂盒的内底壁相接触。

（三）有益效果

与现有技术相比，本发明提供了一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，具备以下有益效果：

1、该鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，通过设置的人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽、TMB检测液试剂瓶放置槽、乙醚溶液试剂瓶放置槽、试管放置槽、离心管放置槽和烧瓶放置槽，使得该检测方法所需要的工具都可以放置在一个试剂盒的内部，人们在使用时十分方便，人们在平常生活中就能对甲基睾丸酮进行检测。

2、该鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，通过微孔板、人甲基睾丸酮溶液和TMB检侧溶液相互配合使用下，使鸡肉中的甲基睾丸酮与人甲基睾丸酮溶液产生反应，达到了检侧出鸡肉中的甲基睾丸酮的效果。

3、该鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，试管放置槽、离心管放置槽和烧瓶放置槽的深度与试管、离心管和烧瓶的直径相同，使试管、离心管和烧瓶在放置时不会掉落，通过设置的海绵垫起到了保护试剂瓶的作用，第一横板与第二横板均为泡沫材质构成，在试剂盒产生震动的时候，可以对试剂瓶等易碎物品进行保护。

附图说明

图1为本发明提出的一种鸡肉中甲基睾丸酮检测试剂盒结构示意图；

图2为本发明提出的一种鸡肉中甲基睾丸酮检测试剂盒第一横板俯视图；

图3为本发明提出的一种鸡肉中甲基睾丸酮检测试剂盒第二横板俯视图。

图中：1试剂盒、2第一横板、3人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽、4 TMB检测液试剂瓶放置槽、5乙醚溶液试剂瓶放置槽、6海绵垫、7第二横板、8试管放置槽、9离心管放置槽、10烧瓶放置槽、11微孔板。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-3，一种鸡肉中甲基睾丸酮检测方法，包括如下步骤：

1）鸡去皮，沿背脊取肌肉，称取100g置于匀浆机中充分搅拌；

2）取5.0g搅拌均匀的鸡肉放置于50ml烧杯中，用15ml乙醚提取，磁力搅拌15min，转移至离心管中，用5ml乙醚洗净烧杯，合并至离心管中，人工搅拌10min；

3）离心完成后，将离心管中的鸡肉放置于微孔板的微孔内，鸡肉的体积不能大于微孔板微孔容积的2/3；

4）往微孔板的微孔内依次加入用HPR标记的人甲基睾丸酮溶液，然后将微孔板倾斜放置，倾斜的角度为10至15度，使人甲基睾丸酮溶液与微孔板内部的鸡肉充分接触；

5）微孔板内部的鸡肉中含有的甲基睾丸酮会与用HPR标记的人甲基睾丸酮溶液抗体结合，形成抗体复原酶化合物；

6）将微孔板内部的鸡肉彻底洗涤，再加入底物TMB显色，观察鸡肉的颜色，如果鸡肉的内部不含有甲基睾丸酮，则鸡肉没有颜色；如果鸡肉的内部含有甲基睾丸酮，则TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酶的作用下转化成最终的黄色；

7）颜色的深浅和样品鸡肉中的甲基睾丸酮呈正相关，颜色越深则甲基睾丸酮的含量越高，颜色越浅则甲基睾丸酮的含量越低。

一种鸡肉中甲基睾丸酮检测试剂盒，包括试剂盒1，试剂盒1的内部设置有第一横板2，第一横板2上开设有等距离排列的人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽3，两个人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽3之间开设有TMB检测液试剂瓶放置槽4，TMB检测液试剂瓶放置槽4的一侧开设有乙醚溶液试剂瓶放置槽5，人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽3、TMB检测液试剂瓶放置槽4和乙醚溶液试剂瓶放置槽5的内部均设置有海绵垫6，海绵垫6起到了保护试剂瓶的作用，第一横板2的底部设置有第二横板7，第一横板2与第二横板7均为泡沫材质构成，在试剂盒1产生震动的时候，可以对试剂瓶等易碎物品进行保护，第二横板7上开设置有试管放置槽8，试管放置槽8的一侧开设有离心管放置槽9，离心管放置槽9远离试管放置槽8的一侧开设有烧瓶放置槽10，试管放置槽8、离心管放置槽9和烧瓶放置槽10的深度与试管、离心管和烧瓶的直径相同，使试管、离心管和烧瓶在放置时不会掉落，通过设置的人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽3、TMB检测液试剂瓶放置槽4、乙醚溶液试剂瓶放置槽5、试管放置槽8、离心管放置槽9和烧瓶放置槽10，使得该检测方法所需要的工具都可以放置在一个试剂盒1的内部，人们在使用时十分方便，人们在平常生活中就能对甲基睾丸酮进行检测，第二横板2的底部设置有微孔板11，微孔板11的底部与试剂盒1的内底壁相接触。

综上所述，该鸡肉中甲基睾丸酮检测方法及试剂盒，通过设置的人甲基睾丸酮溶液试剂瓶放置槽3、TMB检测液试剂瓶放置槽4、乙醚溶液试剂瓶放置槽5、试管放置槽8、离心管放置槽9和烧瓶放置槽10，使得该检测方法所需要的工具都可以放置在一个试剂盒1的内部，人们在使用时十分方便，人们在平常生活中就能对甲基睾丸酮进行检测，在微孔板11、人甲基睾丸酮溶液和TMB检侧溶液相互配合使用下，使鸡肉中的甲基睾丸酮与人甲基睾丸酮溶液产生反应，达到了检侧出鸡肉中的甲基睾丸酮的效果，试管放置槽8、离心管放置槽9和烧瓶放置槽10的深度与试管、离心管和烧瓶的直径相同，使试管、离心管和烧瓶在放置时不会掉落，通过设置的海绵垫6起到了保护试剂瓶的作用，第一横板2与第二横板7均为泡沫材质构成，在试剂盒1产生震动的时候，可以对试剂瓶等易碎物品进行保护。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。