1.一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒的主要组成为:
鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液,1支100 μL,为鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶于水制成的溶液,浓度为10-20 mg/mL;
酶标ORF90多抗溶液,1支100 μL,为酶标ORF90多抗溶于水制成的溶液,浓度为10-20 mg/mL;
稀释液,2瓶,每瓶50 mL,溶液为质量体积浓度为10 g/L的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液;
TMB底物溶液,1支,250 μL;为TMB的DMSO溶液,其质量体积浓度
为6 mg/mL;
终止液,浓度为2 M的硫酸溶液1瓶,20 mL;
鲤疱疹病毒2型阳性对照1支,500 μL,为金鱼阳性组织匀浆;
阴性对照1支,500 μL,为阴性金鱼组织匀浆;
包被液,1瓶,20 mL,为含有0.015 M 碳酸钠和0.035 M 碳酸氢钠的水溶液;
96孔酶标板,1块。
2.根据权利要求1所述的一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒中,所述的磷酸盐缓冲液的重量体积比组成为:
氯化钠 8.0 g
磷酸二氢钾 0.2 g
十二水合磷酸氢二钠 2.9 g
氯化钾 0.2g
吐温-80 0.5 mL
双蒸水 1000 mL。
3.根据权利要求1所述的一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒中还包括:
磷酸盐缓冲液PBST,1瓶50 mL,其质量体积比组成为:
氯化钠 8.0 g
磷酸二氢钾 0.2 g
十二水合磷酸氢二钠 2.9 g
氯化钾 0.2 g
吐温-80 0.5 mL
双蒸水 1000 mL。
4.根据权利要求1所述的一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒还包括:
过氧化脲溶液,1瓶100 mL,由过氧化脲与乙酸钠-柠檬酸缓冲液混合制成;
其中,乙酸钠-柠檬酸缓冲溶液的制法是:将17 mL质量体积浓度为94 g/L的柠檬酸溶液加入到500 mL质量体积浓度为81 g/L的乙酸钠溶液中,混合均匀制得;
过氧化脲溶液的制法如下:称取140 mg过氧化脲,并将其加入到100 mL乙酸钠-柠檬酸缓一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测方法,其特征在于,该方法使用权利要求1或2或3或4所述的试剂盒进行检测,其步骤如下:
(1)将试剂盒中的鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液用稀释液稀释到10 μg/mL,100 μL/孔包被酶标板,4 ℃过夜;
(2)用磷酸盐缓冲液PBST洗板,250 μL/孔,洗涤三遍;
(3)加入稀释液封闭酶标板,200 μL/孔,37 ℃反应2h;
(4)用磷酸盐缓冲液PBST洗板,250 μL/孔,洗涤三遍;
(5)将待检测样品、阳性和阴性对照用稀释液按照1:10稀释,100 μL/孔加入酶标板中,25 ℃反应0.5 h;
(6)用磷酸盐缓冲液PBST洗板,250 μL/孔,洗涤三遍;
(7)将酶标ORF90多抗溶液用稀释液按1:1000稀释,100 μL/孔,加入酶标板中,25 ℃反应0.5 h;
(8)取TMB底物溶液1支,加入18 mL双蒸水和2 mL过氧化脲溶液配制成工作溶液,100 μL/孔加入酶标板,25 ℃反应15 min;
(9)加50 μL/孔终止液,在450 nm测定光密度(OD)值;
(10)结果判定:P/N≥2.1,表明对照成立,其中:P为阳性对照OD值,N为阴性对照OD值;当样品OD值/阴性对照OD值≥2.1时,判为鲤疱疹病毒Ⅱ型阳性;样品OD值/阴性对照OD值<2.1时,判为鲤疱疹病毒Ⅱ型阴性。