一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法与流程

文档序号:12061550阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,包括步骤为:

(1)制备重悬液:所述重悬液中包括聚乙烯吡咯烷酮PVP、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷,将聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白和三羟甲基氨基甲烷溶于水并定容,调节pH值至8-9,得到重悬液;制备包被基液:所述包被基液中包括海藻糖,用海藻糖溶于0.01M,pH值为7-8的磷酸缓冲溶液PB,得到包被基液;

(2)向胶体金中加入碳酸钾,调节pH,再依次加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体、牛血清白蛋白溶液混合,离心得到沉淀,所述沉淀用步骤(1)制备的重悬液重悬得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金;

(3)用步骤(1)制备的包被基液、无水乙醇稀释抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体得到检测线包被液,用步骤(1)制备的包被基液稀释羊抗鼠IgG多克隆抗体得到对照线包被液;

(4)用步骤(2)制备的用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金对金垫喷金得到免疫金垫,用步骤(3)制备的所述检测线包被液、所述对照线包被液分别在粘贴有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线,得到点膜的聚氯乙烯底板;

(5)将样品垫、免疫金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装得到乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸。

2.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述聚乙烯吡咯烷酮、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述三羟甲基氨基甲烷和所述定容后总体积的比例为0.5g:10g:5g:1g:0.242g:100mL。

3.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述重悬液的pH值是用1M盐酸调节至8.4;所述磷酸缓冲溶液是0.01M、pH值为7.4的磷酸缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(2)的具体过程为:往搅拌的胶体金中加入碳酸钾,调节pH并搅拌10min,加入抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体并搅拌15min,再加入牛血清白蛋白溶液,搅拌15min,在4℃、转速为10000r/min的条件下离心3min,吸取得到第一沉淀,剩下上清液,将所述上清液继续在4℃、转速为10000r/min的条件下离心10min,吸取得到第二沉淀,将所述第一沉淀和所述第二沉淀合并,用所述重悬液重悬至离心前体积的1/10,得到用抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体标记的免疫金,其中所述搅拌是置于磁力搅拌器上实现的。

5.根据权利要求1或4所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述碳酸钾为0.2M碳酸钾,所述牛血清白蛋白溶液为质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液;所述碳酸钾和所述抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的比例为4uL/mL:14µg/mL;所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金体积的1/10。

6.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述检测线包被液中所述抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的浓度为0.45mg/mL,所述对照线包被液中所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为1.5mg/mL。

7.根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述喷金过程是通过点膜喷金设备实现的;所述金垫采用玻璃纤维膜;所述点膜的聚氯乙烯底板放入37℃±3℃、相对湿度≤30%的条件下烘干2h。

8. 根据权利要求1所述的乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤(5)中所述样品垫采用玻璃纤维膜;在使用前用样品垫处理液对所述样品垫浸泡10min后干燥,其中所述样品垫处理液是将比例为0.2g:1mL:20mg:1.21g的牛血清白蛋白、吐温80、鼠抗人红细胞抗体和三羟甲基氨基甲烷溶于水中定容至100 mL,pH值调节至8.0;所述乙型肝炎病毒表面抗原检测试纸是组装后切割得到的。

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