一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒的制作方法

本发明涉及瘦肉精检测技术领域，具体涉及一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒。

背景技术：

盐酸克伦特罗是一种人工合成的β-肾上腺素类兴奋剂，俗称“瘦肉精”，开始是用于治疗支气管哮喘病，特别是慢性病的治疗。20世纪80年代，美国研究人员发现高剂量使用盐酸克伦特罗可以促进动物组织生长，提高瘦肉率和分解脂肪的作用。随后，该药物就被广泛的应用于牲畜和家禽生产中。但是，后来的研究表明，盐酸克伦特罗极易在牲畜和家禽体内蓄积，当人们长期食用残留盐酸克伦特罗的肉制品后，会出现头痛、胸闷、心悸、四肢麻木等不良反应，严重者可以危及生命。所以，为了保证食品的安全，建立一种高效、灵敏、简单、特异性强的盐酸克伦特罗残留检测方法具有重要的现实意义。

目前关于盐酸克伦特罗的检测方法的报道，主要包括：酶联免疫吸附法(elisa)、气相色谱-质谱法(gc-ms)、电泳法、电化学法、高效液相色谱法（hplc）及高效液相色谱-质谱法（hplc-ms）等，而gc-ms法在进样前需要衍生化，操作较复杂；而检测限较低，虽然hplc-ms有较好的灵敏度，但是因为仪器昂贵，前处理复杂，一般实验室难以满足检测的要求。其中elisa试剂盒是目前检测克伦特罗常用的方法，但是elisa试剂盒一般都是半微量的，而且需要选择特定抗体进行酶联免疫，并且需要反复洗涤以除去未反应的物质，操作十分繁琐。

技术实现要素：

本发明提供一种简单、准确的肉制品中残留盐酸克伦特罗的检测方法及检测试剂盒，用于实际样品中盐酸克伦特罗检测，证明其可操作性良好。

一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其具体步骤如下。

金纳米簇溶液作为检测底液。

盐酸溶液与亚硝酸钠溶液反应，生成亚硝酸，可以与盐酸克伦特罗进行重氮化反应。

盐酸克伦特罗的重氮化合物可以引起检测试剂金纳米簇的荧光猝灭，并可以通过365nm的紫外灯照射下，观察其颜色变化。

金纳米簇底液中加入盐酸及亚硝酸钠，不加入样品作为空白样进行颜色对照。

检测温度为室温。

盐酸溶液与亚硝酸钠溶液的体积比是1：1。

把肉制品样品绞碎，加入碳酸钠溶液和乙酸乙酯，涡旋混匀10min，置入高速离心机中离心处理，取上清液，然后把盐酸加入到上清液中，充分混匀，离心分离有机层，备用。

实际样品中盐酸克伦特罗经碳酸钠溶液和乙酸乙酯提取后加入盐酸和亚硝酸钠后，混合物加入到底液中。

金纳米簇是由氯金酸与牛血清白蛋白，在碱性条件下，反应12小时制备，经过透析，干燥备用。

附图说明

图1本发明具有荧光的金纳米簇的荧光光谱图。

图2重氮化的盐酸克伦特罗引起金纳米簇的荧光猝灭图。

图3检测盐酸克伦特罗的颜色对照图。

图1为金纳米簇的荧光光谱图，金纳米簇是由氯金酸与牛血清白蛋白，在碱性条件下，反应12小时制备，经过透析，干燥备用。通过荧光光谱图中（见图1），可以看出其荧光激发波长为500nm（图1a），发射波长为610nm（图1b）。

图2为重氮化的盐酸克伦特罗引起金纳米簇的荧光猝灭图。从图中可知，荧光发射波长为610nm的荧光峰，随着重氮化的盐酸克伦特罗的加入，发射峰强度呈现规则的猝灭，在重氮化的盐酸克伦特罗加入量到达一定浓度时，是可以猝灭到底的，而且还伴随微小的蓝移。

图3是在365nm的紫外灯照射下，不同浓度的重氮化的盐酸克伦特罗引起金纳米簇底液颜色的变化对比图。

具体实施方式

实施例1。

一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，具体操作步骤如下：

金纳米簇制备，10ml，50mg/mlbsa在37°c下恒温10min，加入10ml,10mmhaucl4水溶液磁力搅拌2min后，迅速加入1m的氢氧化钠溶液1ml，此混合液继续在37°c下磁力搅拌进行反应12h。制备的auncs@bsa粗产品用水透析24h；再用g-75凝胶分子筛柱将未反应的bsa去除，制备的金纳米簇作为试剂a。

准确称取绞碎的猪肉5g，加入10%碳酸钠溶液和20ml的乙酸乙酯，涡旋混匀10min，置入高速离心机中以5000r/min，离心处理10min，取上清液，然后把0.1m盐酸20ml加入到上清液中，充分混匀5min，在5000r/min下离心10min，分离有机层，即得到含有盐酸克伦特罗的样品溶液。

将盐酸稀释为0.10mol/l的水溶液（试剂b），亚硝酸钠水溶液稀释为0.10mol/l（试剂c）按体积比1:1反应，生成亚硝酸，亚硝酸不稳定，迅速加入含有不同浓度克伦特罗的样品溶液，得到克伦特罗的重氮化衍生物。

将盐酸稀释为0.10mol/l的水溶液（试剂b），亚硝酸钠水溶液稀释为0.10mol/l（试剂c）按体积比1:1反应，生成亚硝酸，迅速加入到金纳米簇的底液中，制成空白对照样品。

将重氮化的克伦特罗的溶液加入金纳米簇底液中，与空白样品同时置于365nm的紫外灯下观察颜色。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种检测肉制品中残留盐酸克伦特罗的检测方法及检测试剂盒，该方法采用金纳米簇作为荧光响应试剂，通过盐酸与亚硝酸钠生成的亚硝酸与盐酸克伦特罗进行重氮化反应后引起金纳米簇荧光变化，通过紫外灯照射，进行颜色比对。此发明所提供的方法可以准确、快速地检测盐酸克伦特罗，试剂种类少，用量少，经济适用，可以满足肉制品快速检测需求，便于推广。

技术研发人员：曹雪玲;刘发现;罗亚楠
受保护的技术使用者：吉林化工学院
技术研发日：2017.04.17
技术公布日：2017.08.11