一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法与流程

本发明涉及到一种使用色谱法测试或分析材料的方法，尤其涉及到一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法。

背景技术：

ada作为一种新型面团改良剂，可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构；研究表明在面制品的加工过程中ada与bpo会发生降解，生成sem、hdc[10]残留于面制品中，而sem具有致突变和致癌作用[7]，我国《食品添加剂使用卫生标准》(gb2760-2011)中规定：小麦粉中ada的最大使用量为0.045g/kg，欧盟、新加坡、澳洲、日本等则禁止ada作为面粉处理剂使用。

目前，我国卫生标准中规定了ada在面粉中最大使用量为0.045g/kg，但目前国内尚无面粉中ada的检测标准，所以有必要建立面粉及制品中ada检测方法，从而有效地监控面粉及制品中品质改良剂的非法添加使用。

技术实现要素：

本发明的目的就是为了克服上述问题，提供了一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法。

本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法，包括如下步骤：

（1）研磨：黏性面制品冷冻后，研磨成粉末状；

（2）萃取：将步骤（1）中得到的粉末状的黏性面制品使用丙酮连续提取两次得上清液，将上清液氮吹至近干后，用n,n二甲基甲酰胺或n,n二甲基乙酰胺回溶，先加乙酸铵定容后混匀后再加正己烷混匀，然后离心分层，取下层液；

（3）过滤：将步骤（2）中得到的下层液使用过滤膜过滤得到样品；

（4）设定参数：选用cn色谱柱，使用流动相进行等度洗脱检测，采用二极管阵列检测器、设置波长245nm、扫描范围190-600nm；

（5）检测：将步骤（3）得到的样品采用步骤（4）所设定参数进行hplc检测。

作为本发明的进一步改进，步骤（1）中黏性面制品样品采用液氮冷冻。

作为本发明的进一步改进，步骤（4）中的流动相的体积比为v(20mm乙酰胺水溶液):v(乙腈)=98:2。

本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法，利用高效液相色谱仪为检测仪器，通过对待测物前处理条件以及仪器分析条件的优化，建立了面制品中可行的检测方法，该实验方法具有操作简便、结果稳定、与干扰峰分离度大等特点。

附图说明

图1为本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的待测物ada的扫描图；

图2为本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的cn基柱条件下的ada标液色谱图。

具体实施方式

下面对本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法，作进一步说明：

本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法，包括如下步骤：

（1）研磨：黏性面制品采用液氮冷冻后，将黏性面制品切碎，称取质量10.000g放进球磨仪，调节转速、研磨时间，进行研磨至粉状；

（2）萃取：将步骤（1）中得到的粉末状的黏性面制品于具塞管中，加入5.00ml丙酮，旋涡混合2~4min后，采用10000r/min离心5~7min，取上清液于10ml具塞管中，向原具塞管中再加入5.00ml丙酮，旋涡混合2~4min，然后10000r/min离心5~7min，合并上清液，取上清液5.00ml移入具塞管，35~45℃氮吹至近干，再加50.00uln,n二甲基甲酰胺或n,n二甲基乙酰胺，涡旋0.5~1.5min，加1950.00ul20mmol乙酸铵定容2.00ml，斡旋0.5~1.5min，加1.00ml正己烷，斡旋混匀，静置8~12min，待分层稳定后，取下层液；

（3）过滤：将步骤（2）中得到的下层液使用0.45μm的过滤膜过滤得到样品；

（4）设定参数：选用cn色谱柱，色谱柱条件为cn柱4.6mm×250mm5um，柱温30℃；使用体积比为v(20mm乙酰胺水溶液):v(乙腈)=98:2的流动相进行等度洗脱检测，流速0.8ml/min；采用二极管阵列检测器，设置波长245nm，扫描范围190-600nm；

（5）检测：将步骤（3）得到的样品采用步骤（4）所设定参数进行hplc检测。

称取0.01gada标准品于10ml容量瓶中。用n,n-二甲基甲酰胺或n,n-二甲基乙酰胺稀释溶解定容。再分取1.00ml于10ml容量瓶中，用20mmol/l乙酸铵水溶液稀释溶解定容。分别配制成含偶氮甲酰胺为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml标准使用液，按照上述步骤（4）所设定条件进行测定，以ada浓度为横坐标，特征峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，主要用于分析样品中ada的含量。

检测波长的确定：在190~700nm波长之间对偶氮甲酰胺进行全波长扫描，结果如图1所示，其待测化合物在245nm波长下具有较高的灵敏度，因此，为确保其灵敏度，降低基线噪音，所以选择使用波长为245nm。

色谱分析柱的确定：选用三种色谱柱，c18柱，4.6mm×250mm5um、氨基色谱柱4.6mm×250mm5um、cn基柱4.6mm×250mm5um、分别进行比较。通过对出峰时间和分离度，其中，cn基柱分离度及待测物ada峰型最好，因此，选用cn基柱4.6mm×250mm5um，作为分离色谱柱进行进一步优化。

流动相的选择：不同比例的20mmol/l乙酸铵与乙腈(20mmol/lnaac:acn=100:0、98:2、96:4、94:6、92:8、90:10)作为流动相进行等度洗脱，结果发现，20mmol/l乙酸铵:乙腈=98:2时，待测物ada峰型最好，此时，待测物可与面粉中干扰物及二甲基甲酰胺较好的分离。

技术特征：

技术总结
本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法涉及到一种使用色谱法测试或分析材料的方法，包括研磨、萃取、过滤、设定参数和检测五个步骤。本发明的一种黏性面制品中偶氮二甲酰胺的检测方法，利用高效液相色谱仪为检测仪器，通过对待测物前处理条件以及仪器分析条件的优化，建立了面制品中可行的检测方法，该实验方法具有操作简便、结果稳定、与干扰峰分离度大等特点。

技术研发人员：樊继鹏;陈军;徐振东;顾娟红;杨天宇;朱振华;吴森明
受保护的技术使用者：苏州出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心
技术研发日：2017.11.02
技术公布日：2018.01.16