本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种尿微量白蛋白检测试剂条及其制备方法。
背景技术：
白蛋白是重要的血浆蛋白质之一，在正常情况下，白蛋白的分子量大，不能越过肾小球基膜，因此，在健康人尿液中仅含有浓度很低的白蛋白，具体到每升尿白蛋白不超过20mg，所以又被称为“尿微量白蛋白检查”。疾病时，肾小球基膜受到损害致使通透性发生改变，任何能够引起肾小球基膜通透性增高的病变，均可导致白蛋白的排出。这个时候白蛋白即可进入尿液中，尿白蛋白浓度即可出现持续升高。测定尿白蛋白最理想的方法是留取24小时尿标本，由于尿白蛋白的排泄量存在较大程度的变异，所以未定时的尿液标本一次白蛋白排泄量增加，可能并无意义，连续2～3次增高方有诊断价值。
微量白蛋白测定反映早期肾病、肾损伤情况。病理性增高见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期。在早期尿微量白蛋白阶段是肾病发生的早期信号和预兆，此时肾脏损害处在尚可逆转的时期，如能及时治疗，可以终止或逆转肾病的发展进程。尿微量白蛋白检测可作为全身性或局部炎症反应的肾功能指标，如尿路感染等原因引起的肾脏早期病变；急性胰腺炎并发症的预测指标；服用对肾功能有影响的药物者也可检测尿微量白蛋白，便于早期观察肾功能情况及早采取措施。
国内目前应用的尿微量白蛋白检测方法主要有干化学检验法、免疫荧光法、酶免疫法、放射免疫法以及免疫比浊法。干化学检验法能提供半定量或定性的结果，同时干化学试纸条检测结果受较多因素影响，在临床检验中不可避免的会出现假阴性和假阳性结果。免疫荧光法及酶免疫法操作复杂且耗时长，不便广泛临床应用；放射免疫法灵敏度高，特异性强，但具有放射性污染，试剂保存期短等缺点。免疫比浊法具有操作简单，测定周期短，精密度高在生化分析仪上使用较为广泛。但是，由于免疫比浊法的检测原理是反应生成不溶性抗原一抗体复合物，并产生一定的浊度，浊度的高低反映样品中微量白蛋白的含量，导致现有的尿微量白蛋白试剂盒不可避免的出现灵敏度较低的不足。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种尿微量白蛋白检测试剂条及其制备方法，该试剂条制作成本低、使用方便快捷，检测尿微量白蛋白快速、准确。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案。
一种尿微量白蛋白检测试剂条，包括托板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述托板上，所述滤纸片中浸入有染液，所述染液由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ组成为0.10-100mmol/L菁染料、pH7.4-8.0、20-200mmol/L三乙醇胺缓冲液、0.01-1g/L的Triton X-100、0.10-10g/L的苯甲酸钠、0.10-20g/L的PEG-4000；试剂Ⅱ组成为pH7.4.0-8.0、50-200mmol/L磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液、0.01-50mmol/L O-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、0.10-20g/L的叠氮钠，1-20g/L的二甲基乙酰胺；所述菁染料为式I的化合物，
本发明的另一目的是提供上述尿微量白蛋白检测试剂条的制备方法，包括以下步骤：
⑴称取原料菁染料、三乙醇胺、Triton X-100、苯甲酸钠、PEG-4000，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅰ；称取磷酸氢二钠–磷酸二氢钠、O-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、叠氮钠、二甲基乙酰胺，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅱ；
⑵将试剂Ⅰ和试剂Ⅱ混合，室温下密闭放置1-2h得到染液，滤纸片浸入染液中，充分浸泡后取出，置于温度为50-70℃的真空干燥箱中干燥10-20min，将干燥后的滤纸片与托板固定，裁成长10mm、宽5mm矩形纸条，制成尿微量白蛋白检测试剂条。
所述尿微量白蛋白检测试剂条托板是聚氯乙烯树脂，所述滤纸片是普通定量滤纸或普通定性滤纸。
本发明的有益技术效果：本发明制作的尿微量白蛋白检测试剂条采用的菁染料能够与尿液中的微量白蛋白迅速发生反应，当微量白蛋白浓度在0-200mg/L范围内时，试纸呈现从无色到深蓝色的明显色阶，易于目视分辨和机读，测定结果准确，稳定性好。
具体实施方式
下面结合实施例进一步对本发明作详细的阐述，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例
一种尿微量白蛋白检测试剂条，包括托板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述托板上，所述滤纸片中浸入有染液，所述染液由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ组成为0.10mmol/L菁染料、pH7.4、20mmol/L三乙醇胺缓冲液、0.01g/L的Triton X-100、0.10g/L的苯甲酸钠、0.10g/L的PEG-4000；试剂Ⅱ组成为pH7.4.0、50mmol/L磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液、0.01mmol/L O-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、0.10g/L的叠氮钠，1g/L的二甲基乙酰胺；所述菁染料为式I的化合物，
上述尿微量白蛋白检测试剂条的制备方法，包括以下步骤：
⑴称取原料菁染料、三乙醇胺、Triton X-100、苯甲酸钠、PEG-4000，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅰ；称取磷酸氢二钠–磷酸二氢钠、O-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、叠氮钠、二甲基乙酰胺，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅱ；
⑵将试剂Ⅰ和试剂Ⅱ混合，室温下密闭放置1.5h得到染液，取普通定量滤纸片浸入染液中，充分浸泡后取出，置于温度为60℃的真空干燥箱中干燥15min，将干燥后的滤纸片与PMMA树脂托板固定，裁成长10mm、宽5mm矩形纸条，制成尿微量白蛋白检测试剂条。
利用上述尿微量白蛋白检测试剂条检测尿微量白蛋白的方法，包括：
⑴先配置0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、100mg/L、200mg/L的牛血清白蛋白标准溶液；再将本实施例制备好的检测试剂条分别浸于上述的7种牛血清白蛋白标准溶液中；然后使用尿液分析仪测定1分钟的反射率，最后根据7个点绘制标准曲线；
⑵使用时，将按照实施例制备好的尿微量白蛋白检测试剂条浸入待测尿液中取出，1分钟后使用尿液分析仪测定反射率，测得的反射率与标准曲线上对应的浓度即为待测液微量白蛋白浓度。
实施例2
一种尿微量白蛋白检测试剂条，包括托板和滤纸片，所述滤纸片附着在所述托板上，所述滤纸片中浸入有染液，所述染液由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ组成为10mmol/L菁染料、pH8.0、100mmol/L三乙醇胺缓冲液、0.1g/L的Triton X-100、1g/L的苯甲酸钠、2g/L的PEG-4000；试剂Ⅱ组成为pH8.0、100mmol/L磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液、1mmol/LO-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、2g/L的叠氮钠，10g/L的二甲基乙酰胺；所述菁染料为式I的化合物，
上述尿微量白蛋白检测试剂条的制备方法，包括以下步骤：
⑴称取原料菁染料、三乙醇胺、Triton X-100、苯甲酸钠、PEG-4000，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅰ；称取磷酸氢二钠–磷酸二氢钠、O-(N-琥珀酰亚胺基)-N N N'N'-四甲基四氟硼酸脲、叠氮钠、二甲基乙酰胺，加入纯化水中定容至1L，调节pH，得到试剂Ⅱ；
⑵将试剂Ⅰ和试剂Ⅱ混合，室温下密闭放置2h得到染液，取普通定性滤纸片浸入染液中，充分浸泡后取出，置于温度为65℃的真空干燥箱中干燥20min，将干燥后的滤纸片与PVC托板固定，裁成长10mm、宽5mm矩形纸条，制成尿微量白蛋白检测试剂条。
利用上述尿微量白蛋白检测试剂条检测尿微量白蛋白的方法，包括：
⑴先配置0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、100mg/L、200mg/L的牛血清白蛋白标准溶液；再将本实施例制备好的检测试剂条分别浸于上述的7种牛血清白蛋白标准溶液中；然后2秒钟后取出晾干，1分钟后显色完全，最后根据各试纸的显色情况制备比色卡，比色卡的色阶为白色到深蓝色的7个色阶；
⑵使用时，将按照实施例制备好的尿微量白蛋白检测试剂条浸入待测尿液中取出，2秒钟后取出晾干，1分钟后显色完全，与标准比色卡进行比较，与检测试剂条上颜色最接近的标准比色卡上的颜色所对应的浓度即为待测液的浓度，如果在两个色阶之间，则可估读微量白蛋白浓度。