一种甲磺酸达比加群酯或其制剂有关物质或/和含量的检测方法与流程

本发明涉及有关物质检测方法领域，特别是涉及一种甲磺酸达比加群酯或其制剂有关物质或/和含量的检测方法。

背景技术：

甲磺酸达比加群酯由德国勃林格殷格翰公司开发，于2010年首先获得美国食品药品监督局批准用于非瓣膜房颤患者的卒中和全身栓塞预防，是一种直接凝血酶抑制剂，为达比加群的前药，属于非肽类凝血酶抑制剂，口服后在体内释放出后者，与凝血酶的纤维蛋白特异位点结合，阻止纤维蛋白原裂解为纤维蛋白，从而阻断凝血瀑布网络的最后步骤及血栓形成，该药上市，是抗凝血治疗领域和潜在致死性血栓预防领域的一项重大进展，具有里程碑意义。

有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量不仅反映药品纯度的直接指标，而且有重要的安全意义。

技术实现要素：

现有的甲磺酸达比加群酯或其制剂有关物质的检测方法，在应用的过程中发现，现有方法只能检测胶囊的降解杂质，对于原料药和其后制剂中还含有的原料药合成中带来的工艺杂质不能检测。本发明研究了一种能够全面检测甲磺酸达比加群酯及其制剂有关物质的检测方法。

本发明主要解决的技术问题是现有的甲磺酸达比加群酯或其制剂有关物质的检测方法，只能检测胶囊的降解杂质，还有许多有关物质杂质不能检测。为解决上述技术问题，本采用的一个技术方案是：提供一种甲磺酸达比加群酯或其制剂有关物质的检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱进行检测，对有关物质进行定性或定量，检测条件包括：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，检测波长：210～400nm，流动相：流动相a：含缓冲液的水相，ph为4.25～4.40，进一步为4.3；流动相b:主要包括甲醇或乙腈；流动相采用梯度洗脱法洗脱。

进一步的，所述有关物质至少包括：杂质8、杂质4、杂质1中的一种或多种，更进一步的，所述有关物质至少包括杂质02、杂质5、杂质7、杂质9、杂质2、杂质10、杂质11、杂质12中的一种或多种。

进一步的，所述流动相洗脱梯度如下：

本发明一个具体实施方式中，流动相洗脱梯度如下：

在确定了本发明色谱柱填料的基础上，色谱柱尺寸可以使用常规尺寸，即所述色谱柱长度为50～250mm，内径为2.1～4.6mm，填料的粒径为3～5μm。本发明一个具体实施方式中，长度为250mm，内径4.6mm，粒径5μm。

本发明检测波长，可以在前述公开的范围内通过常规手段进行调节选择。在寻找最佳检测波长时，可以使用紫外分光光度法、hplc配套使用的全波段扫描等方式进行，再配合hplc检测器的检测效果(如避免溶剂干扰等)，采用常规技术授权找到适宜的检测波长。本发明一个具体实施方式中，检测波长选自210～400nm，例如在242nm、310nm或/和340nm。

进一步地，水相的ph为4.3。

其中，所述缓冲液是醋酸盐-醋酸缓冲液。前期尝试了磷酸缓冲系统，分离效果不理想,只有醋酸盐分离效果较佳。

本发明所述醋酸盐-醋酸缓冲液中的醋酸盐包括但不限于醋酸钠、醋酸钾或醋酸铵。进一步地，醋酸盐选自醋酸铵；更进一步地，所述缓冲液中，醋酸铵浓度为0.2wt％～0.5wt％，优选为0.2wt％。本发明中缓冲液是取适当浓度的醋酸盐溶液，加入醋酸调节ph而制得。

进一步的，所述流动相b:主要包括乙腈。

本发明中，柱温、流速、进样量等参数可以在常见范围内选择。

进一步的，流动相流速为0.8ml/min～1.2ml/min，例如为1.0ml/min。

进一步的，柱温选自20～40℃，进一步选自25-35℃，例如35℃。

进一步的，所述检测方法包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液、对照品溶液；

(2)分别将供试品溶液、对照品溶液进样检测，对有关物质作定型或定量。

供试品溶液、对照品溶液的配制，不限顺序。

本发明还提供了一种甲磺酸达比加群酯或其制剂含量检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱进行检测，对甲磺酸达比加群酯进行定性或定量，检测条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，检测波长：

210～400nm，流动相：流动相a：含缓冲液的水相，ph为4.25～4.40，进一步为4.3；流动相b:主要包括甲醇或乙腈；流动相采用梯度洗脱法洗脱，所述梯度洗脱法的洗脱梯度如下：

其余条件同杂质检测方法。

本发明中定性检测，可以使用常规方法进行，例如选用对照品通过外标法进行对应分析，又或者通过hplc将各成分分开以后，通过常规鉴定手段进行定性分析，如质谱、薄层、紫外等等。

本发明中定量检测，可以使用外标法、面积归一法等常规方法进行含量计算。

在定量分析时，若使用外标法，采用常规手段制作标准曲线进行计算即可；但在定性分析时，则无需制作标准曲线，可以通过保留时间来判定。

本发明所述杂质02、杂质5、杂质7、杂质9、杂质1、杂质2、杂质4、杂质8、杂质10、杂质11、杂质12具体名称、结构如下：

本发明的有益效果是：采用本发明的甲磺酸达比加群酯及其制剂有关物质的检测方法，既能检测甲磺酸达比加群酯及其制剂的降解杂质又能检测甲磺酸达比加群酯合成过程中带来的工艺杂质；本发明的检测方法能够使甲磺酸达比加群酯及其制剂有关物质色谱峰分开，并具有良好的色谱峰分离度。

附图说明

图1本发明甲磺酸达比加群酯有关物质检测方法系统适应性色谱图。

图2进口甲磺酸达比加群酯注册标准检测方法系统适应性色谱图。

图3甲磺酸达比加群酯有关物质检测方法实施例1色谱图。

其中，dbc-z8为杂质8、dbc-z4为杂质4、dbc-z1为杂质1

图4甲磺酸达比加群酯有关物质检测方法实施例2色谱图

图5甲磺酸达比加群酯含量检测方法实施例3色谱图。

具体实施方式

实施例1

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(推荐phenomenexgeminic18，4.6×250mm，5μm)，以0.2％醋酸铵溶液(冰醋酸调节ph值至4.3)为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为242nm、310nm、340nm。

取杂质6对照品，精密称定，用稀释剂1[乙腈-乙醇-水(12:3:10)]溶解并用稀释剂2[流动相a-流动相b(85:15)]稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为对照品溶液(1)；分别精密称取杂质02、杂质5、杂质7、杂质9、杂质1、杂质2、杂质4、杂质8、杂质10、杂质11、杂质12各对照品，用上述稀释剂1溶解并用稀释剂2稀释制成每1ml中约含各杂质90μg的溶液，作为对照品溶液(2)。另取本品30mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用上述稀释剂1溶解，再分别加入对照品溶液(1)、(2)各1ml，用上述稀释剂2稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图(如图1所示，图中dbc-z8、dbc-z4、dbc-z1即杂质8、杂质4、杂质1)。

测定法取甲磺酸达比加群酯胶囊，精密称定，用稀释剂1[乙腈-乙醇-水(12:3:10)]溶解并用稀释剂2[流动相a-流动相b(85:15)]稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1.0ml置100ml量瓶中，用稀释剂2稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，如图3所示。

对比例

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.2％醋酸铵溶液(冰醋酸调节ph值至4.4)为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温40℃，流速为2.0ml/min，采用dad检测器，检测波长为340nm。

采用该色谱条件对实施例1的系统适用性溶液进行检测，结果，如图2所示，图中dbc-z8、dbc-z4、dbc-z1即杂质8、杂质4、杂质1。

实施例2

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(推荐phenomenexgeminic18，4.6×250mm，5μm)，以0.3％醋酸铵溶液(冰醋酸调节ph值至4.3)为流动相a，以乙腈为流动相b，按下表进行梯度洗脱；柱温35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为242nm、310nm、340nm。

取杂质6对照品，精密称定，用稀释剂1[乙腈-乙醇-水(12:3:10)]溶解并用稀释剂2[流动相a-流动相b(85:15)]稀释制成每1ml中约含0.3mg的溶液，作为对照品溶液(1)；分别精密称取杂质02、杂质5、杂质7、杂质9、杂质1、杂质2、杂质4、杂质8、杂质10、杂质11、杂质12各对照品，用上述稀释剂1溶解并用稀释剂2稀释制成每1ml中约含各杂质90μg的溶液，作为对照品溶液(2)。另取本品30mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用上述稀释剂1溶解，再分别加入对照品溶液(1)、(2)各1ml，用上述稀释剂2稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，如图4所示，检测结果如下：

采用前述方法，对甲磺酸达比加群酯进行含量测定时，其图谱如图5所示。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。