产即得单克隆抗体。
[0023]控制线5为以线形包被纯化的羊抗鼠IgG抗体。
[0024]检测层2由纤维素膜制成。
[0025]该脂环酸芽孢杆菌金标测试条的制备方法，包括以下步骤:
⑴制备胶体金:
在质量浓度为0.01-0.03%的氯金酸中加入其体积0.8-1%且浓度为1%的柠檬酸三钠，煮沸10~20分钟，还原制成15~50纳米的胶体金溶液；
⑵制备抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液:
在10ml胶体金溶液中加入2~10mg抗脂环酸芽孢杆菌抗体，混合均匀后以2000转/分的速率离心lOmin，得到上清液，该上清液再以10000转/分的速率离心lh，得到沉淀物；将100ml沉淀物溶于4~10ml 0.02M、pH=7.4的Tris-HCl液中，得到含0.1-0.6%动物血清白蛋白、0.02%叠氮钠的抗脂环酸芽孢杆菌抗体的胶体金溶液；抗脂环酸芽孢杆菌抗体是指抗脂环酸芽孢杆菌单抗；
⑶将抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液浸着无纺布，浸入量以浸入液体开始向外流出为止，然后在37°C下干燥至恒重，即得抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层3 ;
⑷制备检测层2:
将浓度为l~2mg/ml的抗脂环酸芽孢杆菌单抗和浓度为l~2mg/ml的羊抗鼠IgG抗体喷在纤维素膜上形成检测线6和控制线5，最后在37°C下干燥至恒重，即得检测层2 ;
(5)在附有双面胶层8的塑料制成的衬板7的中段粘贴检测层2，该衬板7的两端分别黏贴多层滤纸制成的手持端吸水层I和无纺布制成的测试端吸水层4 ;然后在测试端吸水层4与检测层2之间夹贴抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层3，其中该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层3的4/5部分夹在测试端吸水层4，1/5部分压在检测层2上；最后，在手持端吸水层I和测试端吸水层4上附上单面胶保护层9，即得。
【主权项】
1.脂环酸芽孢杆菌金标测试条，包括衬板(7)，其特征在于:所述衬板(7)上附有双面胶层(8)，其一端设有手持端吸水层(I )，其另一端设有测试端吸水层(4);所述手持端吸水层(I)与所述测试端吸水层(4)之间的所述衬板(7)上依次设有检测层(2)、抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3);所述检测层(2)的一端与所述手持端吸水层(I)相粘附，其另一端则与所述抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3)相粘附，该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3)与所述测试端吸水层(4)相粘附；所述检测层(2)上沿样品流动方向依次设有检测线(6)、控制线(5);所述手持端吸水层(I)与所述测试端吸水层(4)上均设有单面胶保护层(9)。
2.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述手持端吸水层(O由多层滤纸制成。
3.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述测试端吸水层(4)由无纺布制成。
4.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述检测线(6)为以线形包被纯化的抗脂环酸芽孢杆菌单抗。
5.如权利要求4所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述抗脂环酸芽孢杆菌单抗是通过下述步骤制得:采用常规技术将来自于脂环酸芽孢杆菌模式菌株ATCC49025免疫接种Balb/C小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合，选择产生所需抗脂环酸芽孢杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞；再将杂交瘤细胞克隆得单克隆抗体。
6.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述控制线(5)为以线形包被纯化的羊抗鼠IgG抗体。
7.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于:所述检测层(2)由纤维素膜制成。
8.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条的制备方法，包括以下步骤: ⑴制备胶体金: 在质量浓度为0.01-0.03%的氯金酸中加入其体积0.8-1%且浓度为1%的柠檬酸三钠，煮沸10~20分钟，还原制成15~50纳米的胶体金溶液； ⑵制备抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液: 在10ml所述胶体金溶液中加入2~10mg抗脂环酸芽孢杆菌抗体，混合均匀后以2000转/分的速率离心lOmin，得到上清液，该上清液再以10000转/分的速率离心lh，得到沉淀物；将100ml所述沉淀物溶于4~10ml 0.02M、pH=7.4的Tris-HCl液中，得到含0.1-0.6%动物血清白蛋白、0.02%叠氮钠的抗脂环酸芽孢杆菌抗体的胶体金溶液；所述抗脂环酸芽孢杆菌抗体是指抗脂环酸芽孢杆菌单抗； ⑶将所述抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液浸着无纺布，浸入量以浸入液体开始向外流出为止，然后在37°C下干燥至恒重，即得抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3); ⑷制备检测层(2): 将浓度为l~2mg/ml的抗脂环酸芽孢杆菌单抗和浓度为l~2mg/ml的羊抗鼠IgG抗体喷在纤维素膜上形成检测线(6)和控制线(5)，最后在37°C下干燥至恒重，即得检测层(2); (5)在附有双面胶层(8)的塑料制成的衬板(7)的中段粘贴所述检测层(2)，该衬板(7)的两端分别黏贴多层滤纸制成的手持端吸水层(I)和无纺布制成的测试端吸水层(4);然后在所述测试端吸水层(4)与所述检测层(2)之间夹贴所述抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3)，其中该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层(3)的4/5部分夹在所述测试端吸水层(4)，1/5部分压在所述检测层(2)上；最后，在所述手持端吸水层(I)和所述测试端吸水层(4)上附上单面胶保护层(9)，即得。
【专利摘要】本发明涉及一种脂环酸芽孢杆菌金标测试条，包括衬板，其特征在于：所述衬板上附有双面胶层，其一端设有手持端吸水层，其另一端设有测试端吸水层；所述手持端吸水层与所述测试端吸水层之间的所述衬板上依次设有检测层、抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层；所述检测层的一端与所述手持端吸水层相粘附，其另一端则与所述抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层相粘附，该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层与所述测试端吸水层相粘附；所述检测层上沿样品流动方向依次设有检测线、控制线；所述手持端吸水层与所述测试端吸水层上均设有单面胶保护层。本发明还公开了该脂环酸芽孢杆菌金标测试条的制备方法。本发明具有特异性强、灵敏度高、操作简便的特点。
【IPC分类】G01N33-577
【公开号】CN104614531
【申请号】CN201510067207
【发明人】李儒 , 连晓雯, 张宇霞, 杜惠芬, 李克生, 武星, 裴瑞萍, 宋海珍
【申请人】甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月9日