序列在SEQIDNO;7中 示出。
[0074] 对p63特异的抗体可W是多克隆抗体或单克隆抗体；并且优选单克隆抗体。该是 因为单克隆抗体通常与其他蛋白产生较少的交叉反应。可W采用已知或商业可得的抗体。 例如，可W采用4A4单克隆抗体，其是商业可得的p63单克隆抗体。
[0075] [2]用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法
[0076]根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法，包括采用根 据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法，通过免疫组化染色的方式，使=重基序蛋白 29(TRIM29)的表达可视化。在识别方法中，TRIM29蛋白的表达被检测。TRIM29蛋白的表达 的检测可与在根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法中的"TR1M29蛋白的表 达分析"中记载的相同的方式进行。在检测前列腺基底细胞之后，前列腺基底细胞的存在、 减少和消失被识别。
[0077]在根据本发明的用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法中，通过免 疫组化染色的TRIM29蛋白表达的可视化，使得能够观察基底细胞形态和前列腺腺组织结 构与TRIM29蛋白表达之间的关系，使得能够可靠地识别构成部分腺组织结构的前列腺基 底细胞的存在、减少或消失。
[007引例如，当在组织切片上识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失时，在测试样本中TRIM29蛋白的"存在"、"减少"或"消失"可W在巧光显微镜或光学显微镜下基于与TRIM29 蛋白在正常前列腺组织的基底细胞中的表达水平相比较的TRIM29蛋白的可视化表达水平 而被目测确定。在用相机等拍摄的图像中的信号，如着色、冷光、巧光或放射，可W被机械地 可视化W分析TRIM29蛋白的表达水平。该样的方法使得能够通过肉眼查看图片来确定测 试样品中TRIM29蛋白的"存在"、"减少"或"消失"，并且还使得能够通过信号的机械数字化 而确定TRIM29蛋白的"存在"、"减少"或"消失"。
[0079] 例如，当与正常前列腺组织的基底细胞中的TRIM29蛋白的表达水平相比，测试样 品中的TRIM29蛋白的水平为相当时，前列腺基底细胞可W被确定为"存在"于测试样品中。 当在测试样品中几乎无法检测出TRIM29蛋白时，前列腺基底细胞可W被确定为"消失"。当 测试样品中的TRIM29蛋白的水平介于"存在"和"消失"之间时，前列腺基底细胞可W被确 定为"减少"。
[0080] <前列腺癌〉
[0081] 在前列腺癌中，前列腺基底细胞完全消失，或者减少为一些细胞留存。因此，根据 本发明的用于检测前列腺基底细胞的方法W及用于识别前列腺基底细胞的存在、减少和消 失的方法使得能够诊断或确诊前列腺癌。
[0082] [3]免疫组化染色试剂盒
[0083] 根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒包含TRIM29抗 体。本发明的免疫组化染色试剂盒可W被用在检测前列腺基底细胞的方法中，用在识别前 列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法中，W及用在诊断前列腺癌的方法中。
[0084] 本发明的免疫组化染色试剂盒优选地包含与TRIM29特异结合的抗体或W期望的 形式具有其抗原结合位点的片段（抗原结合片段）。此处所用的TRIM29抗体可W是在"[1] 用于检测前列腺基底细胞的方法"中记载的TRIM29抗体。换言之，抗体可W是单克隆抗体 或多克隆抗体。抗体片段没有特别的限制，只要其具有与TRIM29特异结合的能力，即，其是 具有抗原结合位点的片段（抗原结合片段）。此处所用的抗体片段可W是，例如，Fab、Fab'、 F(油'）2或Fv。
[0085] 此外，根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒优选地包含 细胞角蛋白抗体和/或p63抗体。此处所用的细胞角蛋白抗体和p63抗体可W是在"[1] 用于检测前列腺基底细胞的方法"中记载的细胞角蛋白抗体和p63抗体、或具有其抗原结合 位点的片段（抗原结合片段）。
[0086] 此外，根据本发明的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒可W包含一 种酶，例如过氧化物酶、碱性磯酸酶、0-D-半乳糖巧酶和葡萄糖氧化酶。该试剂盒还可W 包含，例如，作为巧光底物的异硫氯酸巧光素或稀±金属塞合物。试剂盒还可W包含放射性 同位素如巧、"C和1251。根据本发明的试剂盒可W采用其他标记物质如生物素、抗生物素蛋 白和化学发光物质。本发明的试剂盒可W包含，例如，酶的合适底物或化学发光物质。
[0087] 本发明的试剂盒可W包含声明其用于检测前列腺基底细胞的说明书。对用于检测 前列腺基底细胞的效果的说明可W存在于试剂盒用的容器上。可W声明该试剂盒用于前列 腺癌的诊断或确诊。
[0088] TRIM29抗体可W被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。细胞角 蛋白抗体也可W被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。此外，P63抗体 可W被用于制造检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒。
[00例 连施例
[0090] 参考实施例在W下详细说明本发明，实施例并非意在限制本发明的范围。
[0091] <实施例1〉
[009引在此实施例中，采用TRIM29抗体进行前列腺组织（正常和癌症）的免疫 组化染色。使用在北海道大学医学研究院癌症病理学系值巧artmentofCancer 化thology,Hok;kaidoUniversityGraduateSchoolofMedicine)保存和管理的 16 个样 本的前列腺标本来进行该免疫组化染色。供分析所用的前列腺标本的概况在表1中示出。 对15个前列腺癌样本和1个前列腺上皮内瘤（PIN)样本进行分析。
[009引[表U
[0094] 表1.在15个前列腺癌病例中的临床病理学发现
[0095]
【主权项】
1. 一种用于检测前列腺基底细胞的方法，包括通过免疫组化染色使三重基序蛋白 29 (TRM29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化。
2. 根据权利要求1所述的用于检测前列腺基底细胞的方法，包括分析前列腺的腺组织 结构的形态以及三重基序蛋白29 (TRM29)蛋白的可视化表达。
3. 根据权利要求1或2所述的用于检测前列腺基底细胞的方法，还包括通过免疫组化 染色使细胞角蛋白和/或p63蛋白的表达可视化。
4. 根据权利要求3所述的用于检测前列腺基底细胞的方法，包括分析前列腺的腺组织 结构的形态以及细胞角蛋白的可视化表达和/或P63蛋白的可视化表达。
5. -种用于识别前列腺基底细胞的存在、减少或消失的方法，包括采用权利要求1~4 中任一项所述的用于检测前列腺基底细胞的方法。
6. -种用于诊断前列腺癌的方法，包括通过免疫组化染色使用TRIM29抗体或其抗原 结合片段，在从受试者采集的前列腺组织中检测前列腺基底细胞的步骤。
7. 根据权利要求6所述的诊断方法，其中，与正常前列腺组织相比的前列腺基底细胞 的减少或消失指示前列腺癌的存在。
8. -种TRIM29抗体或其抗原结合片段，其用在前列腺癌的诊断中。
9. 一种用于诊断前列腺癌的诊断组合物，包含TRIM29抗体或其抗原结合片段。 10. TRIM29抗体或其抗原结合片段在制备用于诊断前列腺癌的诊断组合物中的用途。
11. 一种用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒，包含TRIM29抗体或其抗原 结合片段。
12. 根据权利要求11所述的用于检测前列腺基底细胞的免疫组化染色试剂盒，还包含 细胞角蛋白抗体或其抗原结合片段、和/或P63抗体或其抗原结合片段。
【专利摘要】本发明的目的是提供一种通过搜寻在前列腺基底细胞中特异性表达的分子并分析这些分子来检测前列腺基底细胞的方法。该问题能够采用用于检测前列腺基底细胞的方法来解决，该方法的特征在于，其采用免疫组化染色使TRIM29(三重基序蛋白29)蛋白在前列腺基底细胞中的表达可视化。
【IPC分类】G01N33-48, G01N33-53
【公开号】CN104871002
【申请号】CN201380067022
【发明人】畠山镇次, 田中伸哉
【申请人】国立大学法人北海道大学, Lsip基金运营联合公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2013年12月18日
【公告号】CA2893453A1, WO2014098135A1