骤2离心所得上清，旋转蒸发；
步骤4，将步骤3所得残渣加至蒸馏水中，纳滤浓缩，浓缩液进高效液相分析。
[0025]步骤I中尿液用量为75mL，对氯苯甲酸用量为3g，对苯二酚用量为5g，3，4_ 二对羟基苯丙氨酸用量为2g。
[0026]步骤I中离心条件为6000rpm，离心时间为4min。
[0027]步骤2中上清用量为80mL，盐酸溶液为7mL，氯化钠5g，乙酸乙酯3mL。
[0028]步骤2中离心条件为4000rpm，离心时间为4min。
[0029]步骤3中旋转蒸发温度为60°C，真空度为0.1MPa0
[0030]步骤4中纳滤膜的材质是陶瓷、聚醚砜或聚酰胺，纳滤膜的截留分子量为300Da，纳滤的压力范围是2.0Mpa。
[0031]步骤4中高效液相的色谱条件为色谱柱C18反相色谱柱，柱温35°C，流动相甲醇:0.1ν/ν9?Κ乙酸=30:70，流速 0.8mL/min，测定波长 230nm，进样量 1yL0
[0032]本实施例的甲基马尿酸测定方法在0.015?0.2mg/mL的检测范围内线性良好，2，3，4-甲基马尿酸的相关系数分别为0.9997、0.9996、0.9998，检出限达到0.39mg/L、
0.37mg/L、0.41mg/Lo低、中、高浓度的加标回收率范围为93.5?102.3%，精密度范围为
1.9 ?8.Tl。
[0033]实施例3
尿液中甲基马尿酸的检测方法，包括以下步骤:
步骤1，取尿样，加入对氯苯甲酸、对苯二酚、3，4_ 二对羟基苯丙氨酸，振荡混合，离心； 步骤2，在步骤I离心所得上清中加入盐酸溶液、氯化钠和乙酸乙酯，振荡混合，离心； 步骤3，取步骤2离心所得上清，旋转蒸发；
步骤4，将步骤3所得残渣加至蒸馏水中，纳滤浓缩，浓缩液进高效液相分析。
[0034]步骤I中尿液用量为100mL，对氯苯甲酸用量为5g，对苯二酚用量为6g，3，4-二对羟基苯丙氨酸用量为4g。
[0035]步骤I中离心条件为7000rpm，离心时间为3min。
[0036]步骤2中上清用量为lOOmL，盐酸溶液为10mL，氯化钠7g，乙酸乙酯6mL。
[0037]步骤2中离心条件为5000rpm，离心时间为5min。
[0038]步骤3中旋转蒸发温度为65°C，真空度为0.1MPa0
[0039]步骤4中纳滤膜的材质是陶瓷、聚醚砜或聚酰胺，纳滤膜的截留分子量为500Da，纳滤的压力范围是1.0Mpa。
[0040]步骤4中高效液相的色谱条件为色谱柱C18反相色谱柱，柱温35°C，流动相甲醇:
0.1ν/ν9?Κ乙酸=30:70，流速 0.8mL/min，测定波长 230nm，进样量 1yL0
[0041]本实施例的甲基马尿酸测定方法在0.015?0.2mg/mL的检测范围内线性良好，2，3，4-甲基马尿酸的相关系数分别为0.9997、0.9996、0.9998，检出限达到0.39mg/L、
0.37mg/L、0.41mg/Lo低、中、高浓度的加标回收率范围为93.5?102.3%，精密度范围为1.9 ?8.Tl。
[0042]应用实施例2的检测方法，职业卫生现场应用的结果显示了工人班末尿中甲基马尿酸的含量与工作场所空气中二甲苯浓度(TWA)呈线性关系，相关系数R2=0.7643，每个样本均检测到甲基马尿酸。环境卫生现场500个样本中两个化工污染区居民尿中甲基马尿酸检出率分别为25.9%、15.4%，对照区检出率为3%。
【主权项】
1.尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:包括以下步骤: 步骤1，取尿样，加入对氯苯甲酸、对苯二酚、3，4_ 二对羟基苯丙氨酸，振荡混合，离心； 步骤2，在步骤I离心所得上清中加入盐酸溶液、氯化钠和乙酸乙酯，振荡混合，离心； 步骤3，取步骤2离心所得上清，旋转蒸发； 步骤4，将步骤3所得残渣加至蒸馏水中，纳滤浓缩，浓缩液进高效液相分析。2.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤I中尿液用量为50?100mL，对氯苯甲酸用量为I?5g，对苯二酚用量为2?6g，3，4_ 二对羟基苯丙氨酸用量为I?4g。3.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤I中离心条件为5000?7000rpm，离心时间为3?5min。4.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤2中上清用量为50?lOOmL，盐酸溶液为5?10mL，氯化钠3?7g，乙酸乙醋I?6mL。5.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤2中离心条件为3000?5000rpm，离心时间为3?5min。6.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤3中旋转蒸发温度为50?65°C，真空度为0.1MPa07.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤4中纳滤膜的材质是陶瓷、聚醚砜或聚酰胺，纳滤膜的截留分子量为100?500Da，纳滤的压力范围是 1.0 ?4.0Mpa08.根据权利要求1所述的尿液中甲基马尿酸的检测方法，其特征在于:步骤4中高效液相的色谱条件为色谱柱C18反相色谱柱，柱温35°C，流动相甲醇:0.lv/v%冰乙酸=30:.70，流速0.8mL/min，测定波长230nm，进样量10 μ L0
【专利摘要】本发明提供了一种尿液中甲基马尿酸的检测方法，先取尿样，加入对氯苯甲酸、对苯二酚、3，4-二对羟基苯丙氨酸，振荡混合，离心；再在离心所得上清中加入盐酸溶液、氯化钠和乙酸乙酯，振荡混合，离心；然后取离心所得上清，旋转蒸发；最后将步骤3所得残渣加至蒸馏水中，纳滤浓缩，浓缩液进高效液相分析。本发明提供的检测方法灵敏度高、精密度好、回收率高、稳定性好，各项方法学指标均符合职业卫生标准制定指南第五部分-生物材料中化学物质测定方法的相关要求，可用于职业接触二甲苯工人以及非职业接触二甲苯人群尿中甲基马尿酸3种同分异构体的测定。
【IPC分类】G01N30/89, G01N30/12
【公开号】CN104991026
【申请号】CN201510365202
【发明人】熊开胜, 张海防, 谢建庭
【申请人】苏州东辰林达检测技术有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月29日