公开的方法应与临床参数一起使用。犬尿氨酸的相对值优选可与其他临床参数一起解译。本发明实质性地有助于诊断的预后价值。经常地，可通过将要诊断的患者中测量的犬尿氨酸值与获自不患有该病的人的可比分组的平均值比较来改进本发明的方法。
[0046]用于实施如本文中公开的体外方法的试剂盒可基于不同原理。优选的原理之一称为横向流动免疫层析测定(Lateral Flow Immunochromatographic Assay)。这类横向流动免疫层析测定可由患者容易地实施，无需医生或其他医学受训人员的帮助。
[0047]横向流动检验，也称为横向流动免疫层析测定，是意图检测靶分析物样品的存在(或不存在)而无需专门和昂贵设备的简单装置，尽管存在许多得到阅读设备支持的基于实验室的应用。这些检验典型用于医学诊断，用于家庭检验、医护点检验(point of caretesting)或实验室使用。广泛使用且公知的一种应用是家庭妊娠检验。
[0048]该技术基于一系列毛细管床，如多孔纸或烧结聚合物的片。这些元件的每一个都具有自发转运液体(例如唾液)的能力。头一个元件(样品床)充当海绵且存置过量的样品液体。一旦浸透，流体就迀移到第二元件(缀合垫)，其中制造商已储存了所谓的缀合物，在盐-糖基质中的生物活性颗粒的干燥形式(见下文)，其含有固定化于颗粒表面上的保证靶分子(例如犬尿氨酸)及其化学配偶体(例如抗体)之间优化的化学反应的一切。当样品流体溶解盐-糖基质时，它在流过多孔结构时还溶解颗粒且在一个组合的输运行为中样品和缀合物混合。通过这种方式，分析物结合颗粒，同时更远地迀移到第三毛细管床。该材料具有一个或多个区域(常称为条(stripes))，其中制造商已固定化有第三分子。当样品-缀合物混合物到达这些条时，分析物已结合在颗粒上且该第三“捕捉”分子结合该复合物。不久后，当越来越多的液体通过了该条时，颗粒积累且条区域改变颜色。通常有至少两种条:一种捕捉任何颗粒且由此显示反应条件和技术正常工作的条(对照)，第二种含有特异性捕捉分子且仅捕捉那些上面已经固定化有分析物分子的颗粒。在穿过这些反应区后，流体进入最终多孔材料，纱布条(wick)，其简单充当废物容器。横向流动检验可作为竞争性或夹心测定法运行。
[0049]从原理上讲，可以使用任何颜色的颗粒，然而，最普遍使用的是乳胶(蓝色)或纳米大小的金颗粒(红色)。由于局部化的表面等离振子共振，金颗粒颜色是红的。还可以使用荧光或磁性标记的颗粒，然而这些需要使用电子读数器来评估检验结果。
[0050]样品首先遇到带色颗粒，其用针对靶分析物生成的抗体标记。检验线(line)还将含有针对相同靶物的抗体，尽管它能结合分析物上的不同表位。检验线将在阳性样品中显示为带色条带。夹心测定法的一个例子是夹心ELISA。
[0051]尽管不是严格必需的，但大多数检验试剂盒优选纳入第二线，其含有挑取游离胶乳/金的抗体以确认检验正确运行。
[0052]在一个优选的实施方案中，以下述方式改编横向流动测定的单一构件使得仅当样品中存在超过一定阈值的犬尿氨酸时指示犬尿氨酸的存在。
[0053]优选的检验试剂盒由以下构件组成:
[0054]1.样品垫-对其上施加检验样品(唾液)的吸收垫
[0055]2.缀合物或试剂垫-其含有特异于缀合至带色颗粒(通常是胶体金颗粒或胶乳微球)的靶(犬尿氨酸)分析物的抗体
[0056]3.反应膜-典型为疏水性硝酸纤维素或醋酸纤维素膜，其上在跨越膜的线内固定化有抗靶分析物抗体作为捕捉带或检验线(对照带也可以存在，其含有特异于缀合物抗体的抗体)
[0057]4.纱布条或废液储器(Wick or waste reservoir)-设计为通过毛细管作用吸引样品跨越反应膜并收集它的一个另外的吸附垫。
[0058]条的各构件通常固定至惰性基底材料(backing marterial)，并且可以以简单的浸渍片形式或者在具有样品口和显示捕捉和对照带的反应窗的塑料铸件内呈现。
[0059]在本发明的方法中使用两种优选的检验试剂盒的实施方案(横向流动免疫测定):
[0060]a.双抗体夹心测定法
[0061]在该形式中，样品从样品垫迀移到缀合物垫，在该处任何存在的靶分析物将结合缀合物。然后样品继续迀移过膜，直至其达到捕捉带，在该处靶物/缀合物复合物将结合固定化的抗体，从而在膜上产生可见的线。接着，样品进一步沿条迀移直至其达到对照带，在该处过量的缀合物将结合且在膜上产生第二条可见的线。该对照线指示样品已经如意图的那样迀移通过膜。膜上两条清楚的线显示阳性结果。在对照带中的单个线是阴性结果。双抗体夹心测定法是最适宜于较大分析物如细菌病原体和病毒(具有多个抗原性位点)的。对于本发明，必须选择一对适宜的抗体，其结合犬尿氨酸上的不同表位。
[0062]当适用于实施这类方法的检验方法或试剂盒使用特异性结合犬尿氨酸的抗体时，术语“抗体”不仅意指人工产生例如通过免疫实验室动物如家兔、绵羊或山羊产生的抗体。在一个优选的实施方案中，它还包含根据杂交瘤技术产生的单克隆抗体。而且，术语“抗体”还包括抗体的抗原结合片段如重组产生的抗原结合片段。这类构建体可通过噬菌体展示及自其衍生的技术产生。
[0063]b.竞争测定法
[0064]竞争性测定法主要用于检验小分子且与双抗体夹心形式的不同之处在于，缀合物垫含有已经结合于靶分析物或其类似物的抗体。如果靶分析物存在于样品中，其因而将不与缀合物结合而是保持未标记。当样品沿膜迀移且到达捕捉带时，过量的未标记的分析物将结合固定化的抗体并阻断缀合物的捕捉，从而不产生可见线。未结合的缀合物然后将结合对照带中的抗体，从而产生可见的对照线。膜上的单个对照线是阳性结果。在捕捉和对照带中的两条可见线是阴性结果。然而，如果不存在过量的未标记的靶分析物，就可能在捕捉带中产生微弱的线，从而指示不确定结果。竞争测定法最适用于检验小分子，如真菌毒素，其不能同时结合超过一种抗体。横向流动技术有许多改变形式。根据靶分析物，膜上的捕捉带可以含有固定化的抗原或酶而不是抗体。还可以应用多个捕捉带以创造多重检验。
[0065]横向流动免疫测定可简单地由未受训练的操作者使用且一般在15分钟内产生结果。它们非常稳定和稳健(robust)，具有较长保质期且通常不需要冷冻存放。它们的生产也相对便宜。这些特征使其对于医护点使用和实地检验样品以及在实验室中使用为理想的。然而，它们的灵敏性有限，没有另外的浓缩或培养规程。已存在可用的定量检验，但我们的目标是对唾液在一定范围进行定性检验。因此，优选的试剂盒被调整为仅在超过一定浓度存在时测量犬尿氨酸。低于这类浓度，检验试剂盒将显示阴性结果。
[0066]本发明的方法优选使用唾液进行。唾液是一种临床上提供信息的生物学流体，其可用于预后、实验室或临床诊断、和监测及管理患者的新办法。唾液含有多种生物标志物，且对唾液腺分泌的原理的概论、收集方法和一般用途论述可见于在Annals of the NewYork Academy of Sciences Malamud D, Niedbala RS Oral-based diagnostics NY AcadSci 2007 ；Boston Mass上发表的会议报告中。
[0067]最近，由于逐渐出现的生物技术和唾液诊断学的组合，也逐渐显示出唾液中的大量医学有价值的分析物且其中一些代表不同疾病(癌症、病毒疾病、HIV)的生物标志物。
[0068]这些进展拓展了基于唾液的诊断学的范围，将其简单口腔拓展到全生理学系统。
[0069]通过本发明的方法，满足了提供无痛、便宜、比基于具有分子诊断学的影响的血清或尿的办法容易和安全的检验的目的。在一个实施方案中，通过使用干燥方法(冻干)和随后稀释使灵敏性降至0.2 μΜ来修改所述方法。所述方法与HPLC技术比较，发现了可比的结果。
[0070]已有的结果是令人惊讶的。在移植的患者和健康志愿者之间在血清和唾液中有显著差异。此外，在比使用其他参数如CRP或甚至临床症状更早(多至5天)的阶段检测到炎性应答。
[0071]本发明由下图例示:
[0072]图1显示色氨酸降解的途径和由此形成的犬尿氨酸及其它中间体的结构。色氨酸到丙氨酸和乙酰乙酸的降解由色氨酸_2，3-双加氧酶启动。
[0073]图2是对健康对照的血清中正常犬尿氨酸值的估测。在不同性别之间没有观察到差异。健康人的血清中犬尿氨酸的平均值为2.5至3.0 μΜ犬尿氨酸。
[0074]图3是血液供体的正常健康对照的两个独立分组的比较。在第一分组(老)中，检验了 174份血清，而在第二分组(新)中，检查了 117份血液供体血清。在两个组之间没有统计学差异。测量到几乎相同值。
[0075]图4显示在来自患有感染如例如UTI (泌尿道感染)、支