一种荧光免疫层析检测试纸及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及检测试纸领域，尤其设及一种巧光免疫层析检测试纸及制备方法。
【背景技术】
[0002] 临床上所用的试纸大部分是由4部分构成，即依次由样品垫、结合垫、抗体承载 膜、吸水纸依次通过有粘合剂的底板依次互相搭接而成，或者样品垫直接用玻璃纤维膜，省 去结合垫。其中，在结合垫靠近抗体承载膜一侧涂或喷上带有巧光微球分别与抗体1和生 物素偶联标记物的混合物。在抗体承载膜上包被检测项目的抗体（或抗原）的T线和质控 C线，检测原理即向样品垫加入样品，样品中的待检物层析到结合线，待检物与结合线上的 巧光微球与抗体1偶联标记物的混合物特异性反应后形成复合物，层析至T线，形成双抗夹 屯、或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用巧光定量 检测系统检测T线和C线区域的富集的巧光强度，反映样本中待测物的含量。
[0003] 运种方法有3个缺点：1，由于玻璃纤维膜材质因素，只能把巧光微球分别与抗体 1和生物素偶联标记物的混合物喷上去，或者浸泡，如果是喷上去，会有不均匀的缺点，影响 精密度，不适用于定量检测；如果是浸泡，不仅不均匀且会浪费大量的微球和抗体，增加成 本；2,喷在玻璃纤维膜上的标记物混合物部分会勾到玻璃纤维素膜的立体空间，导致每次 层析均一性较差，每次均有不同程度的标记物混合物滞留在玻璃纤维膜上，使得精密度和 准确度变大。3,喷膜工艺的均一性比不上包被工艺，导致抗体-巧光结合物的均一性差。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种提高巧光值、精密度，节省材料并简化工艺的巧光免 疫层析检测试纸。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供一种巧光免疫层析检测试纸，包括样品垫（1)，抗体 承载膜（2)，吸水纸（3)，依次通过带有粘合剂的底板（4)互相搭接而成，所述抗体承载膜 (2)上从靠近样品垫（1) 一端分别依次包被标记物的混合物结合线巧）、检测线（6)和质控 线（7)，其特征在于，所述标记物的混合物结合线（5)是将巧光微球分别与抗体1和生物素 偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域（8)内。
[0006] 进一步，所述抗体承载膜预处理为在靠近样品垫（1)的一端用划膜喷金仪包被上 宽度1. 8-2. 2mm的预处理液；优选的，为在靠近样品垫（1) 一端且距边缘4mm的抗体承载膜 (2)膜上用划膜喷金仪包被；所述预处理液为PH7. 4的0. 01MPBS加入20质量体积％薦糖， 2质量体积％BSA和0. 02质量体积％NaNj;
[0007] 进一步，所述标记物的混合物结合线（5)位于抗体承载膜预处理过的预处理区域
[8] 的居中位置。
[000引进一步，所述检测线（6)包被被检测项目的抗体2或抗原。
[0009] 进一步，所述预处理区域（8)的宽度大于标记物的混合物结合线巧）宽度；优选 地，预处理区域（8)的宽度是标记物的混合物结合线巧）宽度的2倍。
[0010] 进一步，所述巧光微球是采用稀±元素館或巧光素包裹在二氧化娃颗粒或者乳胶 颗粒上；优选地，所述巧光微球为采用稀上元素館或巧光素包裹在二氧化娃颗粒。
[0011] 进一步，所述标记物的混合物结合线（5)位于靠近样本垫（1) 一端且距边缘4mm 的抗体承载膜（2)膜上，标记物的混合物结合线（5)与检测线（6)相隔10mm，标记物的混合 物结合线（5)距离质控线（7) 15mm。
[0012] 另一方面，本发明还提供一种所述巧光免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在 于，步骤为，
[0013] 预处理液制备：取PH为7. 4的0. 01MPBS溶液加入20质量体积％薦糖，加入2质 量体积比％BSA和0. 02质量体积％NaNs，充分混匀后；
[0014] 标记物的混合物的制备：选用巧光微球的氨基和葡聚糖的醒基偶联后，按质量比 1:1加入抗体1混合，葡聚糖上其他醒基可与抗体1上的氨基偶联，形成巧光微球与抗体 1偶联标记物的混合物；优选的，选用巧光微球和抗体1按质量比1:1混合，形成巧光微球 与抗体1偶联标记物的混合物；W同样方法，用巧光微球的氨基和葡聚糖的醒基偶联后，按 质量比1:1加入生物素混合，葡聚糖上其他醒基可与生物素上的氨基偶联，形成巧光微球 和生物素偶联的标记物；将所述两种标记物按体积比1:1混合，并用含1质量比％BSA的 pH7. 4,0. 01MPBS500倍稀释混合物；
[0015]T线包被液的配制：用抑7. 4,0. 01MPBS稀释液将鼠抗检测项目的单克隆抗体稀 释至工作浓度；
[0016]C线包被液的配制：用抑7. 4,0. 01MPBS稀释液将亲和素稀释至工作浓度；
[0017] 抗体承载膜（2)的预处理：选用硝酸纤维膜作为抗体承载膜，在靠近将要贴玻璃 纤维膜的一端用划膜喷金仪包被上宽度约2mm的上述制备好的预处理液，该宽度约2mm的 区域称为预处理区域；45°C化烘干；
[0018] 包被线：将上述预处理后的硝酸纤维膜通过划膜喷金仪将巧光微球分别与抗体1 和生物素偶联标记物的混合物巧光、T线包被液、C线包被液同时包被上去，形成标记物的 混合物结合线、T线、C线，所述3条线，线宽均为1mm;标记物的混合物结合线（5)与检测线 (6)距离约10mm，标记物的混合物结合线妨与质控线（7)距离约15mm;之后将该包被后 的NC膜于45°C化烘干；所述标记物的混合物结合线（5)位于预处理区域的居中位置；
[0019] 组装成检测卡：将玻璃纤维膜和烘干包被后的硝酸纤维膜、吸水纸依次粘贴组装， 组装完成后用切条机切成每条宽度为4mm的试条，装进试条卡，压卡，制备成检测卡即可。
[0020] 还一方面，本发明还提供一种所述巧光免疫层析检测试纸用于抗原或抗体的检测 的用途。
[0021] 进一步，加样品于权利要求1所述巧光免疫层析检测试纸的样品垫上，样品中的 待检物层析到结合线，待检物与所述巧光免疫层析检测试纸的结合线上的抗体1标记物特 异性反应后形成复合物，层析至T线，形成双抗夹屯、或竞争，结合线上的生物素标记物层析 至C线与亲和素形成特异性反应，利用巧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的巧 光强度，将T/C巧光强度值处理后带入标准曲线即得出样品中待测物的含量；
[002引优选的，所述标准曲线得到的方法为，用抑7. 4,0. 01MPBS稀释国家或国际标准品 到所需的线性浓度，用巧光免疫层析检测试纸测试各浓度相应的巧光强度值，标准品浓度 和巧光强度值比值拟合得到相关趋势线。
[0023] 本发明的巧光免疫层析检测试纸用于抗原、抗体的检测，包括人体、动植物、中的 抗原抗体检测，食品、食品添加剂中抗原抗体检测等。
[0024] 所述样品垫（1)可W是玻璃纤维素膜；带有粘合剂的底板（4)可W是带粘合剂的 衬板（PVC板）。所述标记物的混合物结合线（5)所在的预处理区域（8)离T线（6)位置保 持有一定距离，保证预处理液不影响T线。
[0025] 本发明所述检测线（6)又称为T线化）。
[0026] 所述标记物的混合物结合线巧），所在的膜部位置上在包被前经过预处理，T线 (6)为检测线包被检测项目的抗体2 (或抗原），C线为质控线（7)包被亲和素，通过待检物 与结合线上的巧光微球与抗体1偶联标记物的混合物特异性反应后形成复合物，层析至T 线化），形成双抗夹屯、或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反 应，利用巧光定量检测系统