)上涂覆一层2-3皿 厚铭层（2)和一层45-50nm厚金膜（3)，获得了裸金忍片。
[0037] 2)裸金忍片预处理
[0038] 将步骤1)获得的裸金忍片浸入98%浓硫酸与30%双氧水（体积比7:3)混合溶 液中，常溫下浸泡化。然后取出用去离子水清洗3次，用氮气吹干。
[0039] 3)两性离子屯肤CRERERE修饰 阳040] 用十二水合憐酸氨二钢和憐酸二氨钟配制pH=7.4的lOmM憐酸盐缓冲液。用预 先脱气的憐酸盐缓冲液配制浓度为4mg/mL的两性离子屯肤CRERERE溶液。将步骤2)获得 的忍片浸入上述两性离子屯肤溶液中，常溫下浸泡1化后取出。用乙醇和去离子水依次清 洗3次，并用氮气吹干，即获得两性离子屯肤（如附图1中的4所示）修饰的SH?忍片。
[0041] 4)两性离子屯肤SPR忍片表面蛋白吸附量检测
[0042] 将步骤3)获得的两性离子屯肤CRERERE修饰的SPR忍片用柏油贴合到SPR系统 的棱镜上。W抑为7. 4的憐酸缓冲液为流动相，流速为10μL/min。待基线平稳后，往定量 环中注入100μΙImg/mL的牛血清白蛋白或溶菌酶或β-乳球蛋白或Img/mL蛋白浓度的 血清、豆浆、牛奶稀释液，经流动相推动蛋白溶液到达忍片表面，由SPR系统测定共振角实 时变化曲线，20min后读取Sra共振角变化值，如附图2、3所示，表面非特异性吸附量分别为 4. 80ng/cm2、l. 97ng/cm2、4. 97ng/cm2、48. 38ng/cm2、90. 98ng/cm2、30. 74ng/cm2。远低于裸金 表面各蛋白的非特异性吸附量，见表1。
[0043] 表1蛋白在SPR裸金忍片表面的非特异性吸附量
[0044]
W45] 实施例3
[0046] 具体操作方法如下：
[0047] 1)裸金忍片制备
[0048] 如附图1所示，采用电子束蒸发锻膜技术在BK7玻璃基底（1)上涂覆一层2-3nm 厚铭层（2)和一层45-50nm厚金膜（3)，获得了裸金忍片。
[0049] 2)裸金忍片预处理
[0050] 将步骤1)获得的裸金忍片浸入98%浓硫酸与30%双氧水（体积比7:3)混合溶 液中，常溫下浸泡化。然后取出用去离子水清洗3次，用氮气吹干。
[0051] 3)两性离子屯肤CRERERE修饰
[0052] 用十二水合憐酸氨二钢和憐酸二氨钟配制pH=7.4的lOmM憐酸盐缓冲液。用预 先脱气的憐酸盐缓冲液配制浓度为lOmg/血的两性离子屯肤CRERERE溶液。将步骤2)获 得的忍片浸入上述两性离子屯肤溶液中，常溫下浸泡1化后取出。用乙醇和去离子水依次 清洗3次，并用氮气吹干，即获得两性离子屯肤（如附图1中的4所示）修饰的SH?忍片。
[0053] 4)两性离子屯肤SPR忍片表面蛋白吸附量检测
[0054] 将步骤3)获得的两性离子屯肤CRERERE修饰的SPR忍片用柏油贴合到SPR系统 的棱镜上。W抑为7. 4的憐酸缓冲液为流动相，流速为10μL/min。待基线平稳后，往定量 环中注入100μLImg/血的牛血清白蛋白或溶菌酶或β-乳球蛋白或Img/血蛋白浓度的 血清、豆浆、牛奶稀释液，经流动相推动蛋白溶液到达忍片表面，由SPR系统测定共振角实 时变化曲线，20min后读取SPR共振角变化值，并计算非特异性吸附量。 阳0对实施例4
[0056] 具体操作方法如下：
[0057] 1)裸金光纤制备
[0058] 采用电子束蒸发锻膜技术在光纤基底上涂覆一层2-3nm厚铭层和一层45-50nm厚 金膜，获得了裸金光纤。
[0059] 2)裸金光纤预处理
[0060] 将步骤1)获得的裸金光纤浸入98 %浓硫酸与30 %双氧水（体积比7:3)混合溶 液中，常溫下浸泡化。然后取出用去离子水清洗3次，用氮气吹干。
[0061] 3)两性离子屯肤CRERERE修饰 阳062] 用十二水合憐酸氨二钢和憐酸二氨钟配制pH=7.4的lOmM憐酸盐缓冲液。用预 先脱气的憐酸盐缓冲液配制浓度为4mg/mL的两性离子屯肤CRERERE溶液。将步骤2)获得 的光纤传感区浸入上述两性离子屯肤溶液中，常溫下浸泡1化后取出。用乙醇和去离子水 依次清洗3次，并用氮气吹干，即获得两性离子屯肤修饰的光纤SH?传感器。
[0063] 4)两性离子屯肤光纤SPR表面蛋白吸附量检测
[0064] 将上述3)制得的光纤SPR传感器通过SMA905等接头安装到SPR谱仪测控系统。 设定积分时间、平均次数、平滑度，待信号稳定后保存暗光谱；打开光源，待信号稳定后保存 参考光谱；将界面调节至反射率模式，将制备的传感器浸入PBS缓冲液中，待信号稳定后叠 加活动光谱，得到传感器在PBS缓冲液中的SPR反射谱图；然后将传感器浸入ImgAiL牛血 清白蛋白或溶菌酶或β-乳球蛋白或ImgAiL蛋白浓度的血清、豆浆、牛奶稀释液中，得到 传感器在蛋白溶液中的SPR反射谱图，由反射谱图的波长偏移量计算蛋白的非特异性吸附 量。
[0065] 本发明公开和提出的一种基于两性离子屯肤修饰的表面等离子共振仪忍片的制 备方法，本领域技术人员可通过借鉴本文内容，适当改变条件路线等环节实现，尽管本发明 的方法和制备技术已通过较佳实施例子进行了描述，相关技术人员明显能在不脱离本发明 内容、精神和范围内对本文所述的方法和技术路线进行改动或重新组合，来实现最终的制 备技术。特别需要指出的是，所有相类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见 的，他们都被视为包括在本发明精神、范围和内容中。
【主权项】
1. 一种基于两性离子七肽修饰的表面等离子共振仪芯片抗污染表面制作方法，其特征 是：用十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制pH= 7. 4的10mM磷酸盐缓冲液；用磷酸盐缓 冲液配制浓度为1-lOmg/mL的两性离子七肽CRERERE溶液；将清洗干净的SPR芯片浸入上 述两性离子七肽溶液中，常温下浸泡5-24h后取出；用乙醇和去离子清洗使芯片表面清洗 洁净，并用氮气吹干即可。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是在金膜表面修饰两性离子七肽CRERERE，但同 样适用于银/金复合膜表面。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是SPR芯片清洗方法是：将芯片浸入体积比为 7:3的98%浓硫酸与30%双氧水混合溶液中，常温下浸泡2h;然后取出用去离子水清洗多 次，用氮气吹干。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征是磷酸盐缓冲液进行预先脱气处理。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征是基底为玻璃片或光纤。
【专利摘要】本发明涉及一种基于两性离子七肽修饰的表面等离子共振仪芯片及其制备方法。用十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾配制pH＝7.4的10mM磷酸盐缓冲液；用磷酸盐缓冲液配制浓度为1-10mg/mL的两性离子七肽CRERERE溶液；将清洗干净的SPR芯片浸入上述两性离子七肽溶液中，常温下浸泡5-24h后取出；用乙醇和去离子清洗使芯片表面清洗洁净，并用氮气吹干即可。本发明的芯片在单一蛋白(牛血清蛋白、溶菌酶、β-乳球蛋白)，稀释的复杂体系(1mg/mL蛋白浓度的血清、豆浆、牛奶)均具有优良的抗污染性能。本发明的芯片具有优良的抗污染性能，且制备方法简便，原料易于合成与调控，有很好的可行性和实用性。
【IPC分类】G01N21/552
【公开号】CN105403540
【申请号】CN201510885048
【发明人】黄仁亮, 叶慧君, 苏荣欣, 齐崴
【申请人】天津大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月4日