魔芋中神经酰胺含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种魔芋中神经酷胺含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 魔芋化onjac)属于天南星科（Araceae)魔芋属（Amo巧ho地alius)多年生宿根草 本植物，其中神经酷胺的含量很高，可达0. 15%~0. 2%。魔芋作为一种富含神经酷胺类物 质的资源植物引起人们极大的兴趣，神经酷胺（ceramide)，即N-脂酷神经銷胺醇，是一种 广泛存在于真核生物细胞中的信号传导物质，作为一种脂质分子W细胞膜的结构组成成份 或胞内自由分子形式存在，参与调节细胞的生长、抑制、分化、衰老和调亡等。近些年来，神 经酷胺类物质已成为新兴的功能性医药保健品、食品和化妆品的重要活性成分，具有极大 的应用价值。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种魔芋中神经酷胺含量测定方法。
[0004] 本发明采用如下技术方案： 阳〇化]一种魔芋中神经酷胺含量测定方法：
[0006] 分别取标准品溶液、供试品溶液，按照色谱条件进样，通过高效液相色谱采集谱 图，标准品溶液包括神经酷胺乙酸乙醋提取液和神经酷胺乙醇提取液，其中：
[0007] 神经酷胺乙酸乙醋提取液：精密量取经乙酸乙醋工艺制备的提取物，置于蒸发皿 中，于70°C水浴蒸干，加甲醇超声溶解并定容，过0. 45μm微孔滤膜，即得；
[0008] 神经酷胺乙醇提取液：精密量取加有乙醇夹带剂经超临界提取的提取物，加体积 分数95%乙醇稀释定容，再从中精密量取，加体积分数95%乙醇稀释定容，过0. 45μm微孔 滤膜，即得；
[0009] 标准品溶液的配制：精密称定神经酷胺C6标准品，置容量瓶中，加甲醇超声溶解 并定容至刻度，过0. 45μm微孔滤膜，即得。
[0010] 优选的，所述高效液相色谱的色谱条件：流动相溶剂流速0. 8-1. 2ml/min;醋酸缓 冲液-甲醇等度洗脱；色谱柱柱溫25~40°C;蒸发光散射检测器。
[0011] 优选的，所述流动相溶剂为体积分数0. 1 %醋酸：甲醇=7 :93。
[0012] 优选的，所述流动相溶剂为体积分数36%乙酸：甲醇=7 :93。
[0013] 优选的，所述流动相溶剂流速Iml/min。
[0014] 优选的，谱图采集时间为30分钟。
[0015] 本发明提供的魔芋中神经酷胺含量测定方法具有灵敏、快捷、重现性好的特点。
【附图说明】
[0016] 图1是本发明乙酸乙醋提取液色谱图；
[0017] 图2是本发明乙醇提取液色谱图； 阳01引图3是本发明神经酷胺C6标准曲线图。
【具体实施方式】
[0019] 下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
[0020] 1实验仪器及材料
[0021] 1.1实验仪器
[0022]高效液相色谱仪（型号：U3000 ;厂家：ThermoFisherScientific)，蒸发光散射 检测器（型号：M100);色谱柱：Kromasil100-5C18 巧μπι，250Χ4. 6mm);甲醇（色谱级）； 36 %乙酸（分析纯）
[0023] 1. 2 材料
[0024] 乙酸乙醋提取液，乙醇提取液。 阳〇2引 2实验内容 阳0%] 2. 1色谱条件 W27] 流动相：0. 1%醋酸（36%乙酸）：甲醇=7 :93 ;等度洗脱；采集30min;柱溫35°C; 流速Iml/min;蒸发光散射检测器。
[0028] 备注：1、色谱柱：Kromasil100-5C18巧μπι，250Χ4. 6mm);洗脱系统：醋酸缓冲 液-甲醇；采集30min;柱溫25-40°C;流速0. 8-1. 2ml/min;蒸发光散射检测器.
[0029] 2、经比较KromasilC18 色谱柱、Kromasil100-5C18 色谱柱、InnovalC18 色谱 柱Ξ根不同键合方式的反相C18硅胶色谱柱的色谱图可W得出：KromasilC18色谱柱与 Kromasil100-5C18色谱柱的峰响应一致，仅在各峰的保留时间上存在差异。但对于经纳米 技术制成的InnovalC18色谱柱，其出峰时间与峰响应都与上述两种色谱柱存在有较大的 差别。
[0030] 2. 2供试品溶液的制备
[0031] (1)神经酷胺乙酸乙醋提取液：精密量取2血经乙酸乙醋工艺制备的提取物，置于 蒸发皿中，于70°C水浴蒸干，加甲醇超声溶解并定容至lOmU过0. 45μm微孔滤膜，即得。
[0032] (2)神经酷胺乙醇提取液：精密量取0.2mL加有乙醇夹带剂经超临界提取的提取 物，加95%乙醇稀释定容至1〇1^，再从中精密量取21^，加95%乙醇稀释定容至1〇1^，过 0.45μm微孔滤膜，即得。
[0033] 2. 3标准品溶液的配制
[0034] 精密称定神经酷胺C6标准品5. 04mg，置10血容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至 刻度，过0. 45μm微孔滤膜，即得。
[0035] 2. 3测定方法
[0036] 分别取标准品溶液、供试品溶液，按照色谱条件进样，采集谱图。
[0037] 3实验结果及结论
[0038] 3. 1色谱峰的指认
[0039] (1)乙酸乙醋提取液：如图1所示，从上述色谱图中，得出乙酸乙醋提取液中仅存 在神经酷胺C6。 W40] 似乙醇提取液：如图2所示，从上述色谱图中，得出乙醇提取液中仅存在神经酷 胺C6。
[0041] 3. 2提取液中神经酷胺C6的含量测定
[0042] 3. 2. 1标准曲线的绘制
[0043] 如图3所示，精密量取已配制好的标准品溶液，分别进样2、6、10、12、14、18化，分 别W进样量的对数值与峰面积对数值建立线性方程，Y= 1. 3785X+巧.4958 ;R2= 0. 9985。
[0044]
[0047] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可W 理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可W对运些实施例进行多种变化、修改、替换 和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于： 分别取标准品溶液、供试品溶液，按照色谱条件进样，通过高效液相色谱采集谱图，标 准品溶液包括神经酰胺乙酸乙酯提取液和神经酰胺乙醇提取液，其中： 神经酰胺乙酸乙酯提取液：精密量取经乙酸乙酯工艺制备的提取物，置于蒸发皿中，于 70°C水浴蒸干，加甲醇超声溶解并定容，过0. 45μm微孔滤膜，即得； 神经酰胺乙醇提取液：精密量取加有乙醇夹带剂经超临界提取的提取物，加体积分数 95%乙醇稀释定容，再从中精密量取，加体积分数95 %乙醇稀释定容，过0. 45μm微孔滤 膜，即得； 标准品溶液的配制：精密称定神经酰胺C6标准品，置容量瓶中，加甲醇超声溶解并定 容至刻度，过0. 45μm微孔滤膜，即得。2. 如权利要求1所述的魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于所述高效液相色 谱的色谱条件：流动相溶剂流速0. 8-1. 2ml/min;醋酸缓冲液-甲醇等度洗脱；色谱柱柱温 25~40°C;蒸发光散射检测器。3. 如权利要求2所述的魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于：所述流动相溶剂 为体积分数0. 1%醋酸：甲醇=7 :93。4. 如权利要求2所述的魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于：所述流动相溶剂 为体积分数36%乙酸：甲醇=7 :93。5. 如权利要求2所述的魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于：所述流动相溶剂 流速lml/min〇6. 如权利要求2所述的魔芋中神经酰胺含量测定方法，其特征在于：谱图采集时间为 30分钟。
【专利摘要】本发明公开了一种魔芋中神经酰胺含量测定方法：分别取神经酰胺乙酸乙酯提取液、神经酰胺乙醇提取液、标准品溶液，按照色谱条件进样，通过高效液相色谱采集谱图。本发明提供的魔芋中神经酰胺含量测定方法具有灵敏、快捷、重现性好的特点。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105403633
【申请号】CN201510718360
【发明人】马晋芳, 吕海池, 葛发欢, 张湘东
【申请人】广州中大南沙科技创新产业园有限公司, 中山大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年10月28日