一种祖师麻的有效成分测定方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种药物的检测方法，特别涉及一种祖师麻的有效成分测定方法
【背景技术】：
[0002] 祖师麻为瑞香科瑞香属植物黄瑞香的根皮及茎皮，别名为祖师麻、黄瑞香、大救 驾、金腰带、黄狗皮。本品为非常用中药材，但制成中成药后应用较广泛，民间广泛用于治疗 疼痛、跌打损伤、风湿性关节炎和支气管炎等症。
[0003]现有祖师麻制剂包括祖师麻片，性状:本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后，片心呈棕 色;味微苦。
[0004] 功能与主治:祛风除湿，活血止痛。用于风湿闭阻，淤血阻络所致的痹病，症见肢体 关节肿痛、畏寒肢冷;类风湿关节炎见上述症候者。
[0005]用法与用量：口服。一次3片，一日3次。
[0006]注意:孕妇及风湿热痹者慎用;有胃病者可饭后服用，并配合健胃药使用。
[0007]规格：（1)薄膜衣片每片重0.3g(2)糖衣片(片芯重0.29g)
[0008] 贮藏:密封。
[0009]现有的祖师麻的制剂的鉴别方法包括：
[0010] 理化鉴别
[0011] (1)样品水浸出液适量，蒸干，冷后加乙酸酥1ml，微热溶解，加浓硫酸1滴，溶液呈 红色。（检查皂戒）
[0012](2)薄层色谱取本品粉末lg，加乙醇5ml，冷浸24h，滤过，滤液浓缩至lml，供点样 用。以7,8_二羟基香豆素作对照。点于硅胶G板上，用氯仿-丙醇(4:1)为展开剂，展距10cm， 置紫外光灯(254nm)下观察。样品与对照品色谱的相对应的位置处显相同的荧光斑点。
[0013]近年来，关于祖师麻质控的文献有很多，但对于指纹图谱的研究尚无任何报道，本 发明经过研究找到一种特别适合祖师麻制剂的含量测定方法，建立了一种检测更加全面、 更快速的祖师麻质量评价方法。
【发明内容】
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[0014]本发明提供一种祖师麻制剂的有效成分测定方法，本发明所述的祖师麻制剂，包 括任何一种以祖师麻为原料药的药物制剂，包括片剂，胶囊，丸剂，颗粒等，优选片剂，所述 片剂制备方法如下：
[0015]取祖师麻1 l〇〇g，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次，第三次1小时，合并煎液，滤 过，滤液浓缩至相对密度为1.22~1.26(50°C)的清膏，加乙醇使含醇量达75%，静置使沉 淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至适量，加入碳酸钙l〇g、淀粉、糊精适量，混匀，制成颗粒，干 燥，压制成1 〇〇〇片，包薄膜衣或糖衣，即得。
[0016]本发明所述的祖师麻制剂的有效成分测定方法，包括以下步骤：
[0017]1)对照品溶液的制备取祖师麻甲素、7-羟基香豆素对照品，制成含祖师麻甲素、7- 羟基香豆素的混合溶液。
[0018] 2)供试品溶液的制备取祖师麻片，研细，加入溶剂超声处理，滤过，得到续滤液。
[0019] 3)测定法取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图 计算供试品中相应成分的含量。
[0020]优选的，本发明的有效成分测定方法，包括以下步骤：
[0021 ] 1)对照品溶液的制备取祖师麻甲素、7-羟基香豆素对照品适量，精密称定，加80- 90 %甲醇制成每0.5-2ml含祖师麻甲素0.08-0.12mg、7-羟基香豆素18-22yg的混合溶液，即 得。
[0022] 2)供试品溶液的制备取祖师麻片18-22片，除去包衣，研细，取0.55-0.65g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入80-90 %甲醇45-55ml，密塞，称定重量，超声处理25-35分钟， 放冷，再称定重量，用80-90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0023] 3)测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8_12μ1，注入液相色谱仪，得到色 谱图，根据色谱图计算供试品中相应成分的含量。
[0024]最优选的，本发明的有效成分测定方法，包括以下步骤：
[0025] 1)对照品溶液的制备取祖师麻甲素、7-羟基香豆素对照品适量，精密称定，加85 % 甲醇制成每lml含祖师麻甲素0.1mg、7-羟基香豆素20yg的混合溶液，即得。
[0026] 2)供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.6g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入85 %甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率 40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用85 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得。
[0027] 3)测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，得到 色谱图，根据色谱图计算供试品中相应成分的含量。
[0028]其中，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以 0.1 %冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长327nm。理论板数按 祖师麻甲素峰计算应不低于4000。
[0029]梯度洗脱表
[0030]
[0031]本发明进一步包括祖师麻制剂的鉴别方法，所述方法，包括以下步骤：
[0032] 1)取祖师麻片剂2片，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，超声处理20 分钟，滤过，滤液浓缩至约lml，作为供试品溶液。
[0033] 2)取祖师麻对照药材lg，同法制成对照药材溶液。
[0034] 3)再取祖师麻甲素对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。
[0035] 4)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2 ~5μ1，对照提取物溶液5μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-冰醋酸 (7:1:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显一个相同颜色的主斑点；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的主斑点
[0036]本发明进一步包括祖师麻药材的指纹图谱建立方法，所述方法，包括以下步骤：
[0037] 1)取祖师麻对照药材，加水煎煮，滤过，滤液浓缩，加甲醇使成为甲醇溶液，摇匀， 滤过，取续滤液，即得。
[0038] 2)测定取取续滤液，注入液相色谱仪，得到色谱图。
[0039 ]优选的，本发明的指纹图谱建立方法，包括以下步骤：
[0040] 1)取祖师麻对照药材1.8-2.2g，加水煎煮0.5-2小时，滤过，滤液浓缩至约8-12ml， 加甲醇使成为65-75 %的甲醇溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0041] 2)测定法吸取续滤液8_12μ1，注入液相色谱仪，得到色谱图，
[0042]最优选的，本发明的有效成分测定方法，包括以下步骤：
[0043] 1)取祖师麻对照药材2g，加水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至约10ml，加甲醇使成为 70 %的甲醇溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0044] 2)测定法精密吸取续滤液10μ1，注入液相色谱仪，测定，得到色谱图。
[0045]其中，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以 0.1 %冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长327nm。理论板数按 祖师麻甲素峰计算应不低于4000。
[0046]梯度洗脱表
[0047]
[0048] 经过不同批次，10次以上的测定，经过处理得到一种呈现八个特征峰的标准指纹 图谱(图19)
[0049]本发明所述的指纹图谱，可以用于评价祖师麻药材的质量，如:对生产过程中的祖 师麻药材进行指纹图谱测定，将测定结果和本发明上述标准指纹图谱进行对照，按中药色 谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于 0.90。从而确定药材是否合格。上述标准指纹图谱的建立使用的均为合格的祖师麻药材作 为对照药材，经过多批次测定，得到。
[0050]经过本发明方法检测，对于祖师麻制剂，如对于每片片剂，其中含祖师麻以祖师麻 甲素(C9H604)计，不得少于2 ·Omg;含7-羟基香豆素(C9H603)计，不得少于0 · 30mg。为合格产 品。
[0051]本发明方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
[0052] 1实验仪器
[0053]高效液相色谱仪:Agilent1260、Ultimate3000、ShimadzuLC20A
[0054]色谱柱：ShiseidoCapcell