平稳，所以选择水相为 0.1 %冰醋酸溶液，经试验，峰形对称，分离度好。
[0130]经多次试验，综合考虑各成分峰的分离度，确定以下表进行梯度洗脱，A为甲醇，B 为0.1 %冰醋酸溶液。
[0131]梯度洗脱表
[0132]
[0133] 3.3提取溶剂的选择
[0134]取同一批样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号：20131206)，取约0.6g， 分别用70%甲醇、85%甲醇、甲醇超声处理30分钟，结果用85%甲醇做溶剂时含量结果最 高，故选择提取溶剂为85 %甲醇(结果见表4)。
[0135]表4不同提取溶剂考察结果
[0136]
[0137] 3.4超声时间的选择
[0138]取同一批样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号：20131206)，按拟定方法 分别超声处理(功率500W，频率40kHz) 30、45、60min，按拟定色谱条件测定。
[0139] 结果表明超声时间对含量测定结果没有明显影响，为节省能源和提取时间，故选 择超声30分钟(结果见表5)。
[0140] 表5不同提取时间的含量测定结果
[0141]
[0142] 3.5专属性试验
[0143] 按处方比例和制法制备不含祖师麻的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴 性样品溶液，分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液与阴性对照溶液各?〇μ1，注入高效液相 色谱仪，记录色谱峰。结果表明，方中的辅料不干扰祖师麻甲素和7-羟基香豆素的测定，见 图15。
[0144] 图15对照、样品、阴性色谱图
[0145] 3.6峰纯度测定
[0146] 采用二极管阵列检测器对供试品色谱中的祖师麻甲素和7-羟基香豆素峰10%、 50%峰高处进行峰纯度检测，峰纯度均大于950,认为供试品色谱中的祖师麻甲素和7-羟基 香豆素均为单一成分峰。
[0147] 3.7线性关系考察
[0148] 精密吸取不同体积的祖师麻甲素、7-羟基香豆素对照品溶液，注入液相色谱仪，测 定峰面积。以进样量(yg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明祖师麻甲素 在0.0856~10.7yg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为：y= 4172091.078x+ 173246.557，r= 0.9999; 7-羟基香豆素在0.019984~4.996yg的范围内呈良好的线性关系， 回归方程为：y= 5510638 · 2880x+64890 · 2102，r= 0 · 9999。
[0149] 表6标准曲线测定结果
[0150]
[0151] 3.8重复性试验
[0152] 取同一批样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号：20131206)9份，分别为 0. 3g、0.6g、0.9g各三份，按正文方法制备样品，按拟定色谱条件测定。分别测定含量，结果 见表7，表明重复性良好。
[0153] 表7重复性测定结果
[0154]
[0155] 3.9回收率试验
[0156] 取同一批已知含量的样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号:20131206， [0157]含量:祖师麻甲素10.3148mg/g，7-羟基香豆素1.4235mg/g)，取约0.3g，精密称定， 共取9份，每三份为一组，每组溶液分别加入祖师麻甲素浓度为1.52694mg/ml的对照品溶液 1、2、3ml和7-羟基香豆素浓度为0.216mg/ml的对照品溶液1、2、3ml，按正文方法制备样品， 按拟定色谱条件分别测定含量，计算回收率，结果见表8,表明本方法回收率较好。
[0158] 表8祖师麻甲素回收率试验结果
[0159]
[0161] 表9 7-羟基香豆素回收率试验结果
[0162]
[0163] 3.10稳定性试验
[0164] 取同一份供试品溶液，间隔一段时间进样一次，考察样品溶液的稳定性。结果表 明，供试品溶液室温下放置，至少在24小时内稳定(结果见表10)。
[0165] 表10稳定性试验结果
[0166]
[0167] 3.11耐用性试验
[0168] 3.11.1液相色谱柱耐用性试验
[0169] 取同一批样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号：20131206)。分别采用不 同品牌及规格的色谱柱，按拟定标准测定方法测定，并计算含量，结果表明，不同品牌色谱 柱均分离较好(见图16)，祖师麻甲素和7-羟基香豆素含量测定结果见表11，RSD值为2.5%， 表明色谱柱耐用性好。
[0170] 表11色谱柱耐用性试验结果
[0171]
[0172J 图16不同色谱柱样品色谱图
[0173] 3.11.2仪器的影响分别试验了四个不同厂家仪器，按拟定标准测定方法测定，
[0174] 并计算含量，结果表明，不同品牌色谱仪均分离度较好(见图17)，祖师麻甲素和7-羟基香豆素含量测定结果见表12，RSD值为3.3%，表明仪器耐用性好。
[0175] 表12仪器耐用性试验结果
[0176]
[0177] 图17不同仪器色谱图
[0178] 3.11.3不同条件耐用性试验
[0179] 取同一批样品（秦皇岛市山海关药业有限责任公司，批号：20131206)考察不同PH 值、不同流速、不同柱温下样品的含量是否稳定，结果表明，本检测方法在不同条件下耐用 性较好。（见表13)
[0180] 表13不同条件测定祖师麻甲素、7-羟基香豆素结果
[0181]
[0182]图18不同色谱条件下样品色谱图
[0183] 3.12样品测定与限度制定
[0184]取不同批号样品，按正文方法测定含量，结果见表14。现行标准规定每片含祖师麻 以祖师麻甲素计，不得少于2.Omg，综合现行标准和含量测定结果暂定本品
[0185]每片含祖师麻甲素不得少于2.Omg。6批样品平均每片含7-羟基香豆素为 0.4371mg，测定含量的70%为0.3060mg，综合含量测定结果暂定本品每片含祖师麻甲素不 得少于〇.30mg。
[0186]表14样品测定结果
[0187]
【附图说明】：
[0188]图1对照药材、对照品、样品色谱图
[0189]图2祖师麻甲素、7-羟基香豆素对照品波长扫描图
[0190]图3样品色谱图
[0191]图4不同批号祖师麻色谱图
[0192] 图5色谱柱I、ShimadzuLC20A色谱（上为混合对照药材，下为样品），相似度为 0.969
[0193] 图6色谱柱Π、Agilent1260色谱(上为对照药材，下为样品），相似度为0.966
[0194] 图7色谱柱ΙΠ、ShimadzuLC20A色谱(上为对照药材，下为样品），相似度为0.970
[0195] 图8仪器I、ShiseidoCapcellpakC18MGII色谱柱（上为对照药材，下为样品），相 似度0.972
[0196] 图9仪器Π、ShiseidoCapcellpakC18MGII色谱柱(上为对照药材，下为样品）， 相似度为0.970
[0197]图10仪器m、Thermo120A-C18色谱柱(上为对照药材，下为样品），相似度为0.966
[0198]图11不同柱温下样品色谱图
[0199] 图12 6批样品HPLC色谱图 [0200]图13 6批样品相似度评价结果
[0201]图14祖师麻甲素和7-羟基香豆素对照品波长扫描图
[0202]图15对照、样品、阴性色谱图
[0203]图16不同色谱柱样品色谱图
[0204]图17不同仪器色谱图
[0205]图18不同色谱条件下样品色谱图
[0206] 图19标准指纹图谱
【具体实施方式】：
[0207]以下通过实施例进一步说明本发明。
[0208] 实施例1
[0209]本发明所述的祖师麻片剂，制备方法如下：
[0210]取祖师麻1l〇〇g，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次，第三次1小时，合并煎液，滤 过，滤液浓缩至相对密度为1.22~1.26(50°C)的清膏，加乙醇使含醇量达75%，静置使沉 淀，取上清液，回收乙醇并浓缩至适量，加入碳酸钙l〇g、淀粉、糊精适量，混匀，制成颗粒，干 燥，压制成1 〇〇〇