O.lg
[0136] 流速：1 .Oml/min;
[0137] 检测波长：349nm〇
[0138] 4.4专属性试验
[0139] 取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按4.3.3项下色谱条件进行测定，结 果在与对照品盐酸小檗碱相同的保留时间位置，无其他干扰峰出现，表明除黄柏外的其他 药材和辅料对盐酸小檗碱的测定无干扰，结果参见图16、17、18。
[0140] 精密吸取对照品溶液A为0.6545mg · ml-1各2、5、10、15以1，对照品溶液財农度为 65.45yg · πιΓ1各2、5、10、15μ1，注入液相色谱仪，按4.3.3项下色谱条件分别测定其峰面积。 以对照品质量X为横坐标，峰面积积分值Υ为纵坐标，绘制标准曲线。计算，得直线回归方程： Y = 4070.73X+52.22，相关系数r2 = 1.0000。表明盐酸小檗碱在0.98~9.82yg范围内与峰面 积积分值有良好的线性关系。测定数据见表2。
[0141] 表2盐酸小檗碱线性关系考察
[0142]
[0143]
[0144] 4.5稩密度试验
[0145] 按4.3.3项下色谱条件，精密吸取浓度为65.45yg · πιΓ1对照品溶液B，连续进样6 次，每次5μ1，依法进行高效液相测定，测定峰面积积分值分别为1351.80、1352.20、 1355.76、1358.87、1359.88、1351.92。平均值为 1355.07，RSD(相对标准差）为0.27%。
[0146] 4.6重复性试验
[0147] 取治疗血尿的中药组合物的批号：2012010243，按4.2.2项下方法制备供试品溶液 6份。按4.3.3项下色谱条件，取盐酸小檗碱对照品溶液同法测定，分别计算出盐酸小檗碱含 量，测定结果参见表3。对照品溶液浓度为65.45yg · πιΓ1，平均峰面积为：1355.07。
[0148] 表3盐酸小檗碱重复性试验结果
[0149]
[0150] 结果平均值为9.3987mg/g，RSD为0.14%，说明本方法重复性好。
[0151] 4.7稳定性试验
[0152] 取治疗血尿的中药组合物的批号：2012010243供试品溶液，按4.3.3项下色谱条件 分别在〇，5，10，15，20，25小时进样测定，结果盐酸小檗碱峰面积分别为1147.15，1146.53， 1147 · 71，1152 · 82，1148 · 52和 1149 · 63，平均峰面积为 1148 · 73，RSD为0 · 20 %，表明供试品溶 液在25小时内稳定。
[0153] 4.8准确度试验-加样回收试验
[0154] 精密量取盐酸小檗碱对照品A为0.6545mg · mrk份，每份2mL，分别置锥形瓶中，低 温挥干，精密称取4.7项下重复性试验已知含量的治疗血尿的中药组合物的批号： 2012010243，取约0.15g，分别加入6个锥形瓶中，按4.2.2项下的方法处理制成供试溶液，再 按4.3.3项下色谱条件测定含量，同时取对照品溶液浓度为65.45yg · πιΓ1，平均峰面积为： 1355.07进行计算。得盐酸小檗碱的平均回收率为104.6%，结果参见表4。
[0155] 表4盐酸小檗碱加样回收试验结果
[0156]
[0157] 试验结果，平均回收率为100.6 % ; RSD = 0.69 %。表明本法适用于治疗血尿的中药 组合物的中盐酸小檗碱的含量测定，并获得良好的结果。
[0158] 4.9样品含量
[0159] 分别取20批不同批号的治疗血尿的中药组合物，按4.3.3项下色谱条件，测定盐酸 小檗碱含量。同时取对照品溶液浓度为65.45yg · πιΓ1，平均峰面积为：1355.07，进行计算。 试验结果参见表5。
[0160]表5样品含量测定结果 [0161]
[0162] 试验结果，平均含量为3.76mg/粒。原标准中盐酸小檗碱的含量规定为不得少于 2.5mg/粒，此20批治疗血尿的中药组合物的含量均在限度内。
[0163] 实施例5
[0164] 迷迭香酸的含量测定
[0165] 根据傣族医学对此处方的论述，认为肾茶性凉味苦，功在于清泻塔菲即火毒、利 水、止血消肿，为治肾炎水肿，尿血、血尿之要药。即肾茶为该制剂的君药。因此增加肾茶的 含量测定项，是保证制剂的有效性的关键。迷迭香酸为肾茶中的主要成分，现运用高效液相 色谱法对制剂中的迷迭香酸进行测定。
[0166] 5.1仪器及试药
[0167] 5.1.1仪器及试验条件
[0168] 高效液相色谱仪:Agilent 1200型高效液相色谱仪。
[0169] Agilent ZORBAX SB-Cis高效液相色谱柱。
[0170] 乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
[0171] 天平:赛多利斯电子天平、TB_21f5D电子分析天平。
[0172] 超声仪：AS 7240A Ultrasonic Cleaner。
[0173] 5.1.2试药及样品
[0174] 迷迭香酸对照品：中国食品药品检定研究院，批号111871 -201404，供含量测定用， 含量以98.6%计，使用前无需处理。
[0175] 治疗血尿的中药组合物的：样品均由云南理想药业有限公司提供。批号： 20150101、2150102、20150103、20141011、20141012、20141013、20141014、20141015、 20150104、20140304。
[0176] 制备阴性对照的药材:均由云南理想药业有限公司提供。
[0177] 5.2色谱条件
[0178] 5.2.1最大吸收波长的确证
[0179] 取对照品溶液，用紫外分光光度法在190nm-400nm的波长范围内进行扫描，结果显 示其在330nm波长处具有最大吸收。因此选择330nm为检测波长。
[0180] 5.2.2色谱条件的确定
[0181] 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Ci8(150mmX4.6mm，5ym);
[0182] 流速：1 .Oml/min;
[0183] 检测波长：330nm〇
[0184] 流动相：
[0185]
[0186] 5.3溶液制备
[0187] 5.3.1对照品溶液的制备
[0188] 取迷迭香酸对照品0.02312g，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，即得浓度为 0.9119mg · πιΓ1的对照品溶液A。另取对照品溶液A 5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 摇匀，即得浓度为〇.45595mg · ml-1对照品溶液B。另取对照品溶液A lml置50ml量瓶中，加甲 醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为18.238yg · πιΓ1对照品溶液C。
[0189] 5 · 3 · 2供试品溶液的制备
[0190] 5.3.2.1供试品溶液提取溶媒和提取方法的选择
[0191] 取治疗血尿的中药组合物的批号：20150101，混匀，取约lg，精密称定，置具塞锥形 瓶中，分别精密加甲醇和50%甲醇溶液50ml，称定重量，分别置水浴上加热回流30分钟或超 声处理30分钟，放冷，用相应溶剂补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤 液，制得供试品溶液。
[0192] 表6提取溶媒和提取方法的选择结果表
[0193]
[0194]
[0195] 结果显示，采用50%甲醇为提取溶剂，加热回流的提取方法所测得迷迭香酸含量 最高。
[0196] 5.3.2.2供试品溶液提取时间的考察
[0197] 取治疗血尿的中药组合物的批号：20150101治疗血尿的中药组合物，混匀，取约 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50 %甲醇溶液50ml，称定重量，分别置水浴上加热回 流30、40、60、90分钟，放冷，用50 %甲醇溶液补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤 过，取续滤液，制得供试品溶液。按5.2色谱条件测定，结果参见表7。
[0198] 表7提取时间的考察结果表
[0199]
[0200]结果显示，加热回流60分钟能够完全的提出治疗血尿的中药组合物的中的迷迭香 酸。
[0201] 5.3.2.3供试品溶液取样量的考察
[0202] 取治疗血尿的中药组合物的批号：20150101，混匀，取约1 g、2g、3g、4g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，分别精密加50%甲醇溶液50ml，称定重量，分别置水浴上加热回流60分 钟，放冷，用50 %甲醇溶液补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取续滤液，制得 供试品溶液。按5.2色谱条件测定，结果参见表8。
[0203]表8提取时间的考察结果表
[0204]
[0205]测定结果显示，取样量为lg和2g的测定结果高，但取样量为lg的峰面积积分值低， 误差大，选择2g为最终取样量。
[0206] 5.3.2.4供试品溶液制备的小结
[0207] 经以上试验比较，确定供试品溶液的提取方法为：取治疗血尿的中药组合物，混 匀，取约2g，精密称定，放置具塞锥形瓶中，精密加50 %甲醇溶液50ml，称定重量，置水浴上 加热回流1小时，放冷，用50%甲醇溶液补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，取 续滤液，即得供试品溶液。
[0208] 5.3.3阴性样品溶液的制备
[0209]取处方中除肾茶外的其它药材，按处方剂量及制法和工艺要求制备不含肾茶的空 白样品，照5.3.