径为1-1OOnm的胶体金纳米颗粒，取10mL浓度为0.01 %的氯金酸溶液，置于干净的回流圆底烧瓶中，200-250°C恒温回流油浴加热低速搅拌30min，达到沸腾状态，迅速一次性加入1.5mL浓度为I %的柠檬酸三钠溶液，继续恒温回流，高速搅拌，保持沸腾状态，溶液由浅黄-黑色-紫色-酒红色，颜色稳定后低速搅拌，保持1min，冷却至室温，获得胶体金纳米颗粒；
[0028]S2、胶体金标记抗人AMH抗体的制备步骤:取1mL的胶体金纳米颗粒，用0.2M的碳酸钾缓冲溶液调节胶体金溶液的pH值;加入150yg的鼠抗人AMH第一抗体，搅拌Ih;加入ImL浓度为5%~10%的BSA溶液，搅拌30min;最后加入ImL浓度为I %-5%的PEG-20000溶液，搅拌30min，4°C，8000rpm离心30min，去上清，加入ImL的重悬液复溶，得到免疫胶体金溶液，和人AMH特异性反应；
[0029]S3、胶金垫的处理步骤:胶金垫由玻璃纤维垫和固定在上面的免疫金溶液组成，首先要对玻璃纤维垫进行处理，用pH 8.5,0.1M且含I %BSA，0.5 %的Tween-20的Tris-HCl缓冲溶液浸泡处理，置于37°C鼓风干燥箱，6h烘干，将标记了鼠抗人AMH第一抗抗体的免疫胶体金溶液使用XYZ三维点样仪，喷到处理好的玻璃纤维垫上，37°C真空干燥2h以上，密封保存待用；
[0030]S4、样本垫的制备步骤:样本垫为吸水性玻璃纤维垫，对样本垫做预处理，使用pH0.5，0.IM并含I%PEG-20000(聚乙二醇20000)，0.5%的Tween-20的Tris-HCl缓冲溶液浸泡处理，置于37°C鼓风干燥箱，6h烘干，密封备用；
[0031]S5、检测垫上检测线及质控线的包被步骤:使用Milliporel35的硝酸纤维素膜，使用XYZ三维点样仪，将浓度为0.5-1.5mg/mL的鼠抗人AMH第二抗体包被到检测线上，将浓度为0.5-1.0mg/mL的驴抗鼠第三抗体包被到质控线上，上述抗体包被速度均为0.75yL/cm，包被了抗体后的检测垫，37°C条件下真空干燥2h，密封备用；
[0032]S6、人AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的组装步骤:将上述制备准备好的材料，依次将样本垫、免疫胶金垫、检测垫、吸水纸黏贴在PVC底板上，贴好后，使用试纸条切割机，将其切割成3.9mm宽的试纸条，装卡，将制备好的人AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒装入铝箔袋中，加干燥剂，铝箔袋封口，密封保存；
[0033]S7、绘制AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的检查区间标准曲线步骤:购买人AMH抗苗勒管氏激素，购买65岁以上女性阴性血清混合以后做空白样本，使用阴性血清做标准AMH抗原稀释液，终浓度在Ι-lOOOng/mL之间，取每份浓度样品，加入到AMH胶体金免疫层析试纸条上，15min后，用胶体金读取仪测定光度信号，每份浓度样品做3-5组平行实验，以不同的AMH标准蛋白含量浓度做横坐标X，以相应的T线光度信号强度做纵坐标Y，绘制的标准曲线，取线性范围内AMH浓度与T线信号强度，做标准曲线，Y= 14.33x+10.20，其中检测线性范围为0.5-10ng/mL;
[0034]S8、评估AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的灵敏度步骤:以30份65岁以上的女性血清做空白样本，加入到30个胶体金免疫层析试纸条上，15min后测定其T线信号光度值，取均值及标准差，以公式LOD = LD(空白)+3SD，所得T信号强度值；
[0035]S9、检测临床血清样本的步骤:以30份正常女性血清为样本，取10yL加入到胶体金试纸条加样孔中，反应15min后，将胶体金免疫层析试剂盒结合胶体金读取仪检测血清样本中含有的AMH的浓度水平。
[0036]SlO、AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的稳定性步骤:将AMH胶体金免疫层析定量检测试纸条，放置4°C保存I年时间内，定期抽检，比较与放置前标准品的各个光度信号强度及阴性血清的光度信号强度值，检测各个批次AMH试剂盒的信号强度值，与初始光度信号强度值做比较。
[0037]与现有技术相比，本发明的有益效果至少在于:
[0038]1、试剂盒中，作为检测标记物AMH的单克隆抗体，采用目前被广泛使用的胶体金作为标记物质，标记条件成熟稳定无毒，试剂盒本身分辨率、灵敏度、稳定较强，可以选择用肉眼做半定量检测，也可配合胶体金读取仪的使用做定量检测。
[0039]2、本发明的AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒及检测系统，操作简单(直接加血清样本)、检测时间短(15min)，适合于推广使用，克服了现有酶联免疫方法及化学发光法，价格昂贵，检测耗时且需要投入专业操作人员的缺点。
[0040]3、本发明结合了胶体金读取仪体积小、重量轻、便于携带、并能独立处理数据从而定量检测的优点，特别适合女性血清AMH水平在基层医院的检测，如若结合目前可供家庭使用的采血管，甚至可以家庭中自行检测，便于女性自行监控自己的卵巢功能情况。
[0041]4、本发明针对卵巢功能的评价，使用目前国际认可而国内并未广泛使用的人抗苗勒管氏激素AMH为检测指标，与国际接轨。符合我国二胎政策开放的相关国情。
【附图说明】
[0042]下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述:
[0043]图1为本发明中胶体金纳米颗粒电镜扫描图；
[0044]图2为本发明的结构原理图，且反映阳性结果；
[0045]图3为本发明的结构原理图，且反映阴性结果；
[0046]图4为本发明中胶体金读取仪的工作原理图；
[0047]图5为本发明的检查区间曲线图；
[0048]图6为本发明的校正后的曲线图。
【具体实施方式】
[0049]实施例:如图1-6所示，本发明提供一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测试剂盒的第一实施例，其包括:试剂卡壳、设置在试剂卡壳内的底板、设置在底板一端的样本垫、一端与样本垫抵靠接触的胶金垫、一端与胶金垫另一端抵靠接触的检测垫、以及与检测垫另一端接触的吸收垫。其中胶金垫上包含胶体金纳米颗粒以及结合了鼠抗人AMH的第一抗体，又称免疫胶体金溶液。而检测垫上分布了不重合的检测线和质控线，其中检测线上包含了鼠抗人AMH的第二抗体，质控线上包含了抗第一抗体的第三抗体。其中第二抗体可为只有在有AMH存在的情况下才和AMH及第一抗体特异性结合，而第三抗体在任何情况下都能和第一抗体结合，其中上述抗AMH的第一第二抗体和抗第一抗体的第三抗体均来自可溯源的商业化抗体，具体而言，本实验中使用的两种鼠抗人AMH抗体分别购自美国My b i ο sour c e公司和美国Abcam公司，而用于质控线的羊抗鼠IgG抗体购自杭州启泰生物公司，其它公司也有类似抗体出售。样本垫边缘和胶金垫有一部分重叠，胶金垫另一边缘和检测垫有一部分重合。其中胶体金粒径为1-1OOnm，固定在胶金垫上后，可以稳定保存一年。
[0050]检测线靠近胶金垫一端，质控线靠近吸收垫一端，检测线和质控线相隔距离在
0.5-1.5cm 之间。
[0051]卡壳包括相互匹配并扣合的上下半卡壳，卡壳具有加样孔和观察孔，加样孔位于胶金垫和样本垫处并局部裸露样本垫，而观察孔位于检测垫上方并裸露检测线和质控线。即加样孔在卡壳上方有一定开口可以暴露出样本垫，而卡壳的观察孔位于检测垫上方有一定开口可暴露出检测线和质控线。
[0052]进一步的，女性血清样本加样15min后，胶体金免疫层析试剂盒结合胶体金读取仪检测血清样