本中含有的AMH的浓度水平。
[0053]进一步的，如图4所示，胶体金读取仪采用胶体金免疫层析定量读取仪，属于一种由光、机、电组成的精密仪器，扫描读取检测线和质控线的信号强度值，将信号强度值通过光电及模/数转换，转为数字信号，内置优化好的AMH光度-浓度标准曲线，数字信号在标准曲线中计算后，获得所检测得到的浓度值。胶体金读取仪扫描检测线与质控线时，吸收光扫描范围根据胶体金粒径大小，光密度扫描波长在450-550nm之间。
[0054]进一步的，AMH浓度-光度标准曲线，采用60岁以上妇女血清做阴性血清，人AMH抗原标准品购买自可溯源的商业化抗原，使用阴性血清做稀释液混合AMH标准品测定胶体金免疫层析试纸条检测线信号值，并根据信号值与浓度关系绘制光度-浓度标准曲线。
[0055]进一步的，分别调整反应中所述的第一抗体标记到ImL胶体金上的方法，pH值6-9之间、第一抗体蛋白量位5_15yg、BSA添加量为l-10mg、PEG添加量为l-10mg，分别调整了检测线上第二抗体的浓度，质控线上第三抗体的浓度，并调整金标第一抗体在胶金垫上的用量。
[0056]进一步的，其还包括
[0057]抗体稀释液:0.0 IM的磷酸缓冲溶液;胶金垫处理缓冲溶液:pH 8.5,0.1M且含I %BSA,0.5%的Tween-20的Tr i s_HCl缓冲溶液;AMH标准品稀释液:65岁以上女性阴性血清样品O
[0058]本发明提供一种人抗苗勒氏管激素胶体金免疫层析检测方法的第二实施例，其包括:
[0059]1、制备胶体金纳米颗粒步骤[ΟΟ?Ο] 将氯金酸溶液还原成粒径为1-1OOnm的胶体金纳米颗粒。例如，制备40nm的胶体金颗粒:取10mL浓度为0.01 %的氯金酸溶液，置于干净的回流圆底烧瓶中，200-250°C恒温回流油浴加热低速搅拌30min，达到沸腾状态，迅速一次性加入1.5mL浓度为I %的柠檬酸三钠溶液，继续恒温回流，高速搅拌，保持沸腾状态。溶液由浅黄-黑色-紫色-酒红色，颜色稳定后低速搅拌，保持lOmin，冷却至室温，获得胶体金纳米颗粒。如附图1所示。
[0061 ] 2、胶体金标记抗人AMH抗体的制备步骤
[0062]取一定量的，例如1mL的胶体金纳米颗粒，用0.2M的碳酸钾缓冲溶液调节胶体金溶液的pH值；加入一定量的，例如150yg的鼠抗人AMH第一抗体，搅拌Ih;加入ImL浓度为5 % -10%的BSA溶液，搅拌30min；最后加入ImL浓度为I %~5%的PEG-20000溶液，搅拌30min。40C，8000rpm离心30min，去上清，加入一定量的，例如ImL的重悬液复溶，得到免疫胶体金溶液，可以和人AMH特异性反应。
[0063]3、胶金垫的处理步骤
[0064]胶金垫由玻璃纤维垫和固定在上面的免疫金溶液组成。首先要对玻璃纤维垫进行处理，例如pH 8.5，0.1M的Tris-HCl缓冲溶液(含I%BSA，0.5%的Tween-20)浸泡处理，置于37°C鼓风干燥箱，6h烘干。将标记了鼠抗人AMH第一抗抗体的免疫胶体金溶液使用XYZ三维点样仪，喷到处理好的玻璃纤维垫上，37°C真空干燥2h以上，密封保存待用。
[0065]4、样本垫的制备步骤
[0066]样本垫为吸水性玻璃纤维垫，可增加保湿性和粘接性，并过滤除去大分子杂质。需要对样本垫做预处理，例如使用pH 0.5,0.1M的Tri s-HCl缓冲溶液(含I % PEG-20000，0.5%的Tween-20)浸泡处理，置于37°C鼓风干燥箱，6h烘干。密封备用。
[0067]5、检测垫上检测线(T)及质控线(C)的包被步骤
[0068]检测垫可以选用硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜含有不同的品牌和型号，例如可以使用Mi 11 iporel35的硝酸纤维素膜，使用XYZ三维点样仪，将浓度为0.5-1.5mg/mL的鼠抗人AMH第二抗体包被到检测线(T线)上，将浓度为0.5-1.0mg/mL的驴抗鼠第三抗体包被到质控线(C线)上。上述抗体包被速度均为0.75yL/cm。包被了抗体后的检测垫，37°C条件下真空干燥2h，密封备用。
[0069]6、人AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的组装步骤
[0070]将上述制备准备好的材料，按照图2-3顺序，依次将样本垫、免疫胶金垫、检测垫、吸收垫黏贴在PVC底板上，贴好后，使用试纸条切割机，将其切割成3.9_宽的试纸条，装卡。将制备好的人AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒装入铝箔袋中，加干燥剂，铝箔袋封口，密封保存。
[0071]7、绘制AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的检查区间标准曲线步骤
[0072]购买人AMH抗苗勒管氏激素，购买65岁以上女性阴性血清混合以后做空白样本，使用阴性血清做标准AMH抗原稀释液，终浓度在l-1000ng/mL之间，取每份浓度样品，加入到AMH胶体金免疫层析试纸条上，15min后，用胶体金读取仪测定光度信号，每份浓度样品做3-5组平行实验。以不同的AMH标准蛋白含量浓度做横坐标X，以相应的T线光度信号强度做纵坐标Y，绘制的标准曲线如图5-6所示。取线性范围内AMH浓度与T线信号强度，做标准曲线如图6所示，Y= 14.33x+10.20，其中检测线性范围为0.5_10ng/mL，符合文献报道中，正常女性血清中AMH水平在3.5±2.5ng/mL左右，因此本发明符合实际使用需要的线性范围。
[0073]8、评估AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的灵敏度步骤
[0074]以30份65岁以上的女性血清做空白样本(不含AMH)，加入到30个胶体金免疫层析试纸条上，15min后测定其T线信号光度值，取均值及标准差。以公式LOD = LD(空白)+3SD，所得T信号强度值3.15。获得本发明的最低检测限为0.56ng/mL。研究表明，闭经过渡期女性(45-47)，女性血清AMH水平评价低于0.98 ± 0.25ng/mL，因此，本发明的检测灵敏度，可以用于诊断卵巢功能水平下降的女性血清AMH水平。
[0075]9、检测临床血清样品的步骤
[0076]以30份无生殖障碍的女性血清临床样本，加入到30个胶体金免疫层析试纸条上，15min后测定其T线信号光度值，从而获得AMH浓度，其测得AMH浓度水平均大于闭经期女性血清AMH平均浓度水平:0.98 ± 0.25ng/mL，因此，本发明可用于女性血清AMH的临床检测。
[0077]10、AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒的稳定性步骤
[0078]将本发明中涉及的AMH胶体金免疫层析定量检测试纸条，放置4°C保存I年时间内(37°C放置一周)，定期抽检，比较与放置前标准品的各个光度信号强度及阴性血清的光度信号强度值，检测各个批次AMH试剂盒的信号强度值，与初始光度信号强度值做比较，结果显示与放置前不存在明显差异。
[0079]综上所述，利用AMH胶体金免疫层析定量检测试剂盒女性血清AMH浓度水平与购买的酶联免疫AMH试剂盒检测女性血清AMH水平的检测值及检测时间进行比较。
[0080]商业化酶联免疫检测AMH试剂盒，灵敏度一般在0.Ι-lng/mL之间，检测时间至少为2h。而本发明检测时间为15-10min。本发明和所购买商业化酶联免疫检测AMH试剂盒，共同用于检测相关血清样本，AMH浓度水平结果基本一致，不存在明显差异。
[0081]当然上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人能够了解本发