，10ppb)Fe2+和(0.1，0.5，l，2，5ppb)Cu2+，在室温下反应半小时。
[0045](3)电位信号的采集
[0046]将工作电极放入50mM HEPES(pH = 7.4)溶液中记录初始电位值，而后加入上述反应的产物，使上述反应的产物稀释3300倍，记录电位的变化值。
[0047](4)标准工作曲线的绘制
[0048]以不同待测物产生的聚离子的电位信号为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，实验结果见图2。
[0049](5)按照(1)-(4)的步骤对实际样品进行测试，根据标准工作曲线计算样品中待测物的浓度值。
[0050]由图2可以看出使用该传感器可实现Fe2+和Cu2+的高灵敏检测。
[0051 ] 实施例3
[0052]本发明以N-氨基丙基甲基丙烯酰胺为阳离子单体，以二壬基萘磺酸掺杂的聚合物膜电极为指示电极，实现了对过氧化氢酶的检测。其操作步骤如下:
[0053](I)聚合物膜电极的制备
[0054]称取196mg聚氯乙烯、196mg邻硝基苯辛醚、4.0mg 二壬基萘磺酸溶于3.0mL四氢呋喃中，搅拌均匀后倒入固定在玻璃板上的内径为3.5cm的玻璃环中。待四氢呋喃挥发完毕后，使用打孔器将膜切割为内径为3mm的小圆片并粘贴到底部套有PVC管的移液枪枪头上。使用的HEPES溶液作为内充液及活化液活化电极，待用。
[0055](2)自由基反应的引发
[0056]使用50mM HEPES缓冲溶液(pH = 7.4)中加入葡萄糖氧化酶(200nM)，葡萄糖(1mM)，N-氨基丙基甲基丙烯酰胺(0.5M)，乙酰丙酮(2.0mM)和不同浓度的(2 X 10—7、5 X 10—7、1X10—6、2X10—6、5X10—6U/mL)过氧化氢酶，在室温下反应半小时。
[0057](3)电位信号的采集
[0058]将工作电极放入50mM HEPES(pH = 7.4)溶液中记录初始电位值，而后加入上述反应的产物，使上述反应的产物稀释3300倍，记录电位的变化值。
[0059](4)标准工作曲线的绘制
[0060]以不同待测物产生的聚离子的电位信号为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，实验结果见图3。
[0061](5)按照(1)-(4)的步骤对实际样品进行测试，根据标准工作曲线计算样品中待测物的浓度值。
[0062]由图3可知，使用该传感器可实现对过氧化氢酶的高灵敏检测，线性范围为5X10—6?2 X I O—7U/mL，检出限为 I X I O—7U/mL。
[0063]实施例4
[0064]本发明以甲基丙烯酸为阴离子单体，以三十二烷基一甲基氯化铵掺杂的聚合物膜电极为指示电极，实现了对G-四联体核酸酶的检测。其操作步骤如下:
[0065](I)聚合物膜电极的制备
[ΟΟ??] 称取196mg聚氯乙稀、196mg邻硝基苯辛醚、4.0mg三十二烧基一甲基氯化钱溶于3.0mL四氢呋喃中，搅拌均匀后倒入固定在玻璃板上的内径为3.5cm的玻璃环中。待四氢呋喃挥发完毕后，使用打孔器将膜切割为内径为3mm的小圆片并粘贴到底部套有PVC管的移液枪枪头上。使用的HEPES溶液作为内充液及活化液活化电极，待用。
[0067](2)自由基反应的引发
[0068]使用50mM HEPES缓冲溶液(pH = 7.4)中加入葡萄糖氧化酶(200nM)，葡萄糖(101^)，甲基丙烯酸(0.510，乙酰丙酮(0.51^)和不同浓度的(5\10—9、1\10—9、5\10—1<)、1X 10—1()、5X 10—nM)G-四联体/血红素，在室温下反应半小时。
[0069](3)电位信号的采集
[0070]将工作电极放入50mM HEPES(pH = 7.4)溶液中记录初始电位值，而后加入上述反应的产物，使上述反应的产物稀释4300倍，记录电位的变化值。
[0071](4)标准工作曲线的绘制
[0072]以不同待测物产生的聚离子的电位信号为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，实验结果见图4。
[0073](5)按照(1)-(4)的步骤对实际样品进行测试，根据标准工作曲线计算样品中待测物的浓度值。
[0074]由图4可知，使用该传感器可实现对G-四联体核酸酶的高灵敏检测，线性范围为5X 10—9?5 X KT11M，检出限为2 X KT11M0
【主权项】
1.一种对自由基反应的检测方法，其特征在于:利用通过自由基反应聚合阳离子或阴离子单体，以对聚阳离子或聚阴离子敏感的聚合物膜电极为指示电极，进而对自由基反应与可引发自由基反应的物质的检测。2.按权利要求1所述的自由基反应的检测方法，其特征在于: 所述的阳离子单体为可发生自由基聚合反应并在酸度为中性条件下带正电荷的物质； 所述的阴离子单体为可发生自由基聚合反应并在酸度为中性条件下带负电荷的物质。3.按权利要求2所述的自由基反应的检测方法，其特征在于: 所述的阳离子单体为N-氨基丙基甲基丙烯酰胺、N-氨基乙基甲基丙烯酰胺、N-氨基丁基甲基丙烯酰胺、N-氨基乙基丙烯酰胺、N-氨基丙基丙烯酰胺、N-氨基丁基丙烯酰胺或丙烯酰胺； 所述的阴离子单体为甲基丙烯酸、丙烯酸、甲基丁烯酸、丁烯酸或乙基丙烯酸。4.按权利要求1所述的所述的自由基反应的检测方法，其特征在于:所述的对聚阳离子敏感的聚合物膜电极为掺杂有阳离子交换剂的电极；阳离子交换剂为四(4-氟苯基)硼酸钠、四(4-氯苯基)硼酸钠、四(4-甲基苯基)硼酸钠、四(4-三氟甲基苯基)硼酸钠、四(3，5_二(三氟甲基)苯基)硼酸钠或四苯基硼酸钠。5.按权利要求1所述的所述的自由基反应的检测方法，其特征在于:所述的对聚阴离子敏感的聚合物膜电极为掺杂有阴离子交换剂的电极；阴离子交换剂为二壬基萘磺酸、二壬基萘磺酸钠、二壬基二萘磺酸、二壬基二萘磺酸钠、三十二烷基一甲基氯化铵、四十二烷基氯化铵、三十二烷基一甲基溴化铵或四十二烷基溴化铵。6.按权利要求1所述的自由基反应的检测方法，其特征在于: (1)以对聚阳离子或聚阴离子敏感的聚合物膜电极为工作电极、饱和甘汞电极为参比电极进行电位检测； (2)在50mMHEPES(pH= 7.4)溶液中添加与阳离子或阴离子单体，加入不同浓度的待测物引发自由反应； (3)将工作电极放入50mMHEPES(pH = 7.4)溶液中记录初始电位值，而后将步骤(2)入不同浓度的待测物引发自由反应的产物加入50mM HEPES(pH=7.4)溶液中记录不同待测物产生的聚离子电位的变化值； (4)以不同待测物产生的聚离子的电位信号为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线； (5)按照(1)-(4)的步骤对实际样品进行测试，根据标准工作曲线计算样品中待测物的浓度值。
【专利摘要】本发明属于分析测试技术领域，具体涉及一种对自由基反应的检测方法。利用通过自由基反应聚合阳离子或阴离子单体，以对聚阳离子或聚阴离子敏感的聚合物膜电极为指示电极，进而对自由基反应与可引发自由基反应的物质的检测。本发明方法灵敏度高，可用于多种化学及生物目标物的检测。
【IPC分类】G01N27/26
【公开号】CN105548302
【申请号】CN201610069328
【发明人】秦伟, 李龙
【申请人】中国科学院烟台海岸带研究所
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年2月1日