L的金杂化石墨烯水溶液，干燥；
(3)继续将6仙浓度为20yg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净；
(4)用3此浓度为20mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净；
(5)将6yL浓度为0.0001?10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白抗原用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净；
(6)将6yL浓度为3 mg/mL的介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。
[0016]实施例4介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将铂钛铝合金薄片置入浓度为0.5 mol/L的NaOH溶液中，室温下放置36 h，随后放入浓度为2 mol/L的HNO3溶液中，室温下放置2 h，用超纯水清洗多次后，干燥得到介孔铂钛；
将I mL的I mg/mL介孔铂钛水溶液和I mL的I mg/mL中性红溶液混合，震荡12 h后离心，重新分散在I mL的水中，得到介孔铂钛负载中性红水溶液；
将I mL的I mg/mL的介孔铂钛负载中性红溶液和I mL浓度为10 yg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液，于4 °C冰箱中储存备用。
[0017]实施例5介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将铂钛铝合金薄片置入浓度为0.5 mol/L的NaOH溶液中，室温下放置48 h，随后放入浓度为2 mol/L的HNO3溶液中，室温下放置2.5 h，用超纯水清洗多次后，干燥得到介孔铂钛；
将I mL的2 mg/mL介孔铂钛水溶液和I mL的2 mg/mL中性红溶液混合，震荡12 h后离心，重新分散在I mL的水中，得到介孔铂钛负载中性红水溶液；
将I mL的2 mg/mL的介孔铂钛负载中性红溶液和1.5 mL浓度为10 yg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。
[0018]实施例6介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备
将铂钛铝合金薄片置入浓度为0.5 mol/L的NaOH溶液中，室温下放置60 h，随后放入浓度为2 mol/L的HNO3溶液中，室温下放置3 h，用超纯水清洗多次后，干燥得到介孔铂钛；
将I mL的3 mg/mL介孔铂钛水溶液和I mL的3 mg/mL中性红溶液混合，震荡12 h后离心，重新分散在I mL的水中，得到介孔铂钛负载中性红水溶液；
将I mL的3 mg/mL的介孔铂钛负载中性红溶液和2 mL浓度为10 yg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液，于4 °C冰箱中储存备用。
[0019]实施例7甲胎蛋白的检测方法
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2)选择差分脉冲伏安法对甲胎蛋白抗原进行检测，选择在-0.8?-0.4V电压下进行扫描，记录电流变化；
(3)将待测样品溶液代替甲胎蛋白抗原标准溶液进行检测。
[0020](4)该生物传感器对甲胎蛋白抗原检测线性范围为0.0001?10 ng/mL，检测限
0.01 pg/mLo
【主权项】
1.一种基于介孔铂钛负载中性红构建的生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下: (1)依次用1.0、0.3、0.05 pm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干； (2)在电极表面滴加6口口农度为I?2 mg/mL的金杂化石墨烯水溶液，干燥； (3)继续将6UL浓度为5?20 ug/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净； (4)用3此浓度为5?20mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净； (5)将6yL浓度为0.0001?10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白抗原用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净； (6)将6此浓度为I?3mg/mL的介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。2.如权利要求1所述的一种基于介孔铂钛负载中性红构建的生物传感器的制备方法，所述介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备，其特征在于，步骤如下: 将铂钛铝合金薄片置入浓度为0.5 mol/L的NaOH溶液中，室温下放置36?60 h，随后放入浓度为2 mol/L的HNO3溶液中，室温下放置2?3 h，用超纯水清洗多次后，干燥得到介孔销钦; 将I mL的I?3 mg/mL介孔铂钛水溶液和I mL的I?3 mg/mL中性红溶液混合，震荡12h后离心，重新分散在I mL的水中，得到介孔铂钛负载中性红水溶液； 将I mL的I?3 mg/mL的介孔铂钛负载中性红溶液和I?2 mL浓度为10 yg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到介孔铂钛负载中性红标记的甲胎蛋白检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于介孔铂钛负载中性红构建的生物传感器对甲胎蛋白的检测方法，其特征在于，步骤如下: (1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试； (2)选择差分脉冲伏安法对甲胎蛋白抗原进行检测，选择在-0.8?-0.4V电压下进行扫描，记录电流变化； (3 )将待测样品溶液代替甲胎蛋白抗原标准溶液进行检测。
【专利摘要】本发明涉及一种基于介孔铂钛负载中性红构建的生物传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。基于介孔铂钛良好的催化性能和大的比表面积，显著提高了生物传感器的灵敏度，对甲胎蛋白的检测具有重要的意义。
【IPC分类】G01N27/48, G01N27/26, G01N27/327
【公开号】CN105628754
【申请号】CN201510987736
【发明人】魏琴, 吴丹, 孙旭, 范大伟, 闫涛, 马洪敏, 张勇, 庞雪辉, 胡丽华, 杜斌
【申请人】济南大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月27日