度的前列腺特异抗原用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净；
(6)将6yL浓度为3 mg/mL的金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。
[0015]实施例4金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液的制备
将0.5 g氯化镁和1.35 g氯化铁溶解在40 mL乙二醇中，随后加入3.6 g醋酸钠和1.0 g聚二乙醇20000，搅拌溶解后，将混合溶液转入反应釜中，200 °C条件下反应6 h，离心洗涤，真空干燥，得到铁酸镁；
在10 mL无水乙醇中分散0.1 g铁酸镁，超声5 11，加入0.2 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，70°C回流1.5 h，离心洗涤，真空干燥，制得氨基化的铁酸镁，将8 mg氨基化的铁酸镁溶于10 mL超纯水中，加入到25 mL金纳米粒子溶液中，震荡12 h，离心洗涤，真空干燥，制得金杂化的铁酸镁；
将I mL的I mg/mL的金杂化的铁酸镁溶液和I mL浓度为10 yg/mL前列腺特异抗原检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。
[0016]实施例5金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液的制备将I g氯化镁和2.7 g氯化铁溶解在40 mL乙二醇中，随后加入7.2 g醋酸钠和2.0 g聚二乙醇20000，搅拌溶解后，将混合溶液转入反应釜中，200°C条件下反应6 h，离心洗涤，真空干燥，得到铁酸镁；
在10 mL无水乙醇中分散0.2 g铁酸镁，超声5 11，加入0.4 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，70°C回流1.5 h，离心洗涤，真空干燥，制得氨基化的铁酸镁，将16 mg氨基化的铁酸镁溶于10 mL超纯水中，加入到50 mL金纳米粒子溶液中，震荡12 h，离心洗涤，真空干燥，制得金杂化的铁酸镁；
将I mL的2 mg/mL的金杂化的铁酸镁溶液和1.5 mL浓度为10 yg/mL前列腺特异抗原检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。
[0017]实施例6金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液的制备
将2 g氯化镁和5.4 g氯化铁溶解在40 mL乙二醇中，随后加入14.4 g醋酸钠和4.0 g聚二乙醇20000，搅拌溶解后，将混合溶液转入反应釜中，200°C条件下反应6 h，离心洗涤，真空干燥，得到铁酸镁；
在10 mL无水乙醇中分散0.4 g铁酸镁，超声5 11，加入0.8 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，70°C回流1.5 h，离心洗涤，真空干燥，制得氨基化的铁酸镁，将32 mg氨基化的铁酸镁溶于10 mL超纯水中，加入到100 mL金纳米粒子溶液中，震荡12 h，离心洗涤，真空干燥，制得金杂化的铁酸镁；
将I mL的3 mg/mL的金杂化的铁酸镁溶液和2 mL浓度为10 yg/mL前列腺特异抗原检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。
[0018]实施例7前列腺特异抗原的检测方法
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2)选择计时电流法对癌胚抗原进行检测，将输入电压设置为-0.4V，取样间隔设置为0.1 S，运行时间设置为400 S；
(3)当背景电流趋于稳定后，每隔50s向磷酸盐缓冲溶液中注入10此浓度为5 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线；
(4)将待测样品溶液代替前列腺特异抗原标准溶液进行检测。
[0019](5)该生物传感器对前列腺特异抗原检测线性范围为0.0005?50 ng/mL，检测限0.25 pg/mL0
【主权项】
1.一种基于金杂化的铁酸镁构建的生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下: (1)依次用1.0、0.3、0.05 pm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干； (2)在电极表面滴加6口口农度为I?2 mg/mL的金杂化石墨烯水溶液，干燥； (3)继续将6HL浓度为5?20 ug/mL的前列腺特异抗原捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净； (4)用3此浓度为5?20mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净； (5)将6yL浓度为0.0005?50 ng/mL的一系列不同浓度的前列腺特异抗原用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净； (6)将6yL浓度为I?3 mg/mL的金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。2.如权利要求1所述的一种基于金杂化的铁酸镁构建的生物传感器的制备方法，所述金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液的制备，其特征在于，步骤如下: 将0.5?2 g氯化镁和1.35?5.4 g氯化铁溶解在40 mL乙二醇中，随后加入3.6?.14.4g醋酸钠和1.0?4.0 g聚二乙醇20000，搅拌溶解后，将混合溶液转入反应釜中，200°C条件下反应6 h，离心洗涤，真空干燥，得到铁酸镁； 在10 mL无水乙醇中分散0.1?0.4 g铁酸镁，超声5 11，加入0.2?0.8 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，70°C回流1.5 h，离心洗涤，真空干燥，制得氨基化的铁酸镁，将8?32 mg氨基化的铁酸镁溶于10 mL超纯水中，加入到25?100 mL金纳米粒子溶液中，震荡12 h，离心洗涤，真空干燥，制得金杂化的铁酸镁； 将I mL的I?3 mg/mL的金杂化的铁酸镁溶液和I?2 mL浓度为10 yg/mL前列腺特异抗原检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后分散于I 1^、？!1为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到金杂化的铁酸镁标记的前列腺特异抗原检测抗体溶液，于4°C冰箱中储存备用。3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于金杂化的铁酸镁构建的生物传感器对前列腺特异抗原的检测方法，其特征在于，步骤如下: (1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试； (2)选择计时电流法对癌胚抗原进行检测，将输入电压设置为-0.4V，取样间隔设置为.0.1 S，运行时间设置为400 S； (3)当背景电流趋于稳定后，每隔50s向磷酸盐缓冲溶液中注入10此浓度为5 mo I/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线； (4)将待测样品溶液代替前列腺特异抗原标准溶液进行检测。
【专利摘要】本发明涉及一种基于金杂化的铁酸镁构建的生物传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。基于金杂化的铁酸镁具有良好的电化学催化性能和良好的生物相容性，显著提高了生物传感器的灵敏度，对前列腺特异抗原的检测具有重要的意义。
【IPC分类】G01N27/403
【公开号】CN105628767
【申请号】CN201510988195
【发明人】魏琴, 孙旭, 闫涛, 吴丹, 范大伟, 马洪敏, 张勇, 庞雪辉, 胡丽华, 杜斌
【申请人】济南大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月27日