一种荷叶中荷叶碱的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种荷叶中荷叶碱的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将荷叶粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液稀释离心后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种荷叶中荷叶碱的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。
【专利说明】
一种荷叶中荷叶碱的测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及实验室检测领域，特别是一种荷叶中荷叶碱的测定方法。
【背景技术】
[0002] 2015年药典记录了荷叶中的荷叶碱的提取方法:取本品粗粉约0.5g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
[0003] 液相色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一水一三乙胺 冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)为流动相;检测波长为270nm。理论板数按荷叶碱峰计算应不低 于2000。
[0004] 药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种荷叶中荷叶碱的测定方法，该方法操作简单，检测精度 尚。
[0006] 本发明提供的技术方案为:一种荷叶中荷叶碱的测定方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤1:将荷叶粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0008] 步骤2:将萃取液稀释离心后，得到上清液；
[0009] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0010] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[0011] a)仪器:双三元液相色谱仪
[0012] b)色谱柱Cis 5wn 4.6X 150mm
[0013] c)柱温:40°C
[0014] d)流速:0.5mL/min
[0015] e)流动相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)
[0016] f)检测波长：270nm
[0017] 在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，所述的步骤1具体为：
[0018] S11:将荷叶粉碎后，过筛；
[0019] S12:称取0.5重量份罗汉果粉，与0.5重量份硅藻土混合均匀待用；
[0020] S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达 到萃取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0021] 萃取条件为：萃取溶剂为甲醇；萃取温度90°C;静态萃取时间5min;冲洗体积 100%;静态循环次数2次。
[0022]在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，所述的萃取池的体积为10ml。
[0023] 在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，所述的静态萃取的压力为1500psi。
[0024] 在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时间为60s。
[0025]在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，步骤2具体为：将萃取液用甲醇稀释后在 15000r/min下离心5min，取上清液。
[0026]在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，液相色谱分析所用的仪器为：Thermo U-3000双三元液相色谱仪。
[0027]在上述的荷叶中荷叶碱的测定方法中，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350 快速溶剂萃取仪。
[0028]本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0029]本发明的检测方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
【附图说明】
[0030] 图1为本发明的色谱分析荷叶碱有效性验证的直角坐标图；
[0031] 图2为本发明的色谱图。
【具体实施方式】
[0032]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0033] 实施例1:
[0034]将荷叶经粉碎机粉碎，过三号筛，约0.5g，精密称定，与0.5g硅藻土混合均匀，待 用，移入到预先放好过滤膜的ASE?L0ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之与池口 在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于25ml容量瓶中，用甲醇稀 释至刻度，在15000r/min下离心5min，取上清液，进入LC测定。
[0035]萃取条件(见表1)为：
[0036]表1
[0039]分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0040] a)仪器:Thermo 双三元液相(U-3000)
[0041 ] b)色谱柱Eclipse XDB(Cis 5wn 4.6X150mm，即碳 18色谱柱，直径4.6mm，长度 150mm，粒径 5ym)
[0042] c)柱温:40°C
[0043] d)流速:0.5mL/min
[0044] e)流动相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(体积比27:70.6:1.6:0.78)
[0045] f)检测波长：270nm [0046] 色谱分析有效性验证：
[0047] 取荷叶碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含16yg的溶液，即得。
[0048] 取荷叶碱对照品溶液(浓度:0.1587mg/ml)，分别精密吸取该溶液lyl、2yl、4yl、5y 1、10yl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表2。以绝对进样量(yg)-平均峰面积进 行线性回归，求得回归方程:7 = 5.7934义-0.0315，1?2 = 0.9997。荷叶碱在0.1587~0.9122吨 范围内呈良好的线性关系，该线性关系的直角坐标图见图1。荷叶碱对照品的采用上述的液 相色谱法分析得到的色谱图，详见图2中的标号为S-1所对应的图谱。
[0049] 表2荷叶碱线性关系
[00511实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0052]取相同批号的样品（批号：150820)0.5g，共6份，精密称定，按ASE提取方法提取供 试品溶液，进样量为如1，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中荷叶碱的含量见表2，RSD 为3.5 %，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见表3。
[0053]表 3
[0055] 实施例1的萃取方法的精确度测试
[0056] 采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对荷叶进行萃取，荷叶为4批，批号 分别为 1512008,20150501,150820,1508144;
[0057]实施例1的ASE萃取方法对同一批次的荷叶采用相同型号规格但是不同的机器进 行平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表示。
[0058]图2中标号114-2-1所对应的图谱为样品1508144按照药典所记载的方法得到的色 谱图；
[0059]图2中标号为正交8-1所对应的图谱为样品1508144按照实施例1所记载的方法得 到的色谱图。
[0060] 具体测试结果见下表4;
[0061] 表 4
[0063]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将荷叶粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步骤2:将萃取液稀释离心后，得到上清液； 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:双三元液相色谱仪 b) 色谱柱Cis 5ym 4.6X1 50mm (：)柱温:40°〇 d) 流速:0 · 5mL/min e) 流动相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78) f) 检测波长：270nm 〇2. 根据权利要求1所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，所述的步骤1具体为： Sl 1:将荷叶粉碎后，过筛； S12:称取0.5重量份罗汉果粉，与0.5重量份硅藻土混合均匀待用； S13:将S12中的混合物移入预先放好过滤膜的萃取池中，加入适量的硅藻土至达到萃 取池的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为:萃取溶剂为甲醇；萃取温度90°C;静态萃取时间5min;冲洗体积100%;静 态循环次数2次。3. 根据权利要求2所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，所述的萃取池的体积 为10ml。4. 根据权利要求2所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的压 力为 1500psi。5. 根据权利要求2所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，所述的静态萃取的吹 扫时间为60s。6. 根据权利要求1所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，步骤2具体为:将萃取 液用甲醇稀释后在15000r/min下离心5min，取上清液。7. 根据权利要求1所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，液相色谱分析所用的 仪器为:Thermo U-3000双三元液相色谱仪。8. 根据权利要求1所述的荷叶中荷叶碱的测定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所 采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/06GK105911174SQ201610234643
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月15日
【发明人】陈学松, 王丽丽, 韦涛, 梁美艳, 黄新惠
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所