液质联用法检测3种紫外吸收剂特定迁移量的方法
【专利摘要】本发明提供一种液质联用法检测3种紫外吸收剂特定迁移量的方法，所述的3种紫外吸收剂是存在于塑料类食品接触材料中的2?氰基?3,3?二苯基丙烯酸乙酯、2?氰基?3,3?联苯基丙烯酸2?异辛酯、紫外吸收剂UV?1164。本发明通过高效液相色谱?串联质谱法同时测定3种紫外吸收剂特定迁移量，色谱分离和线性关系好，回收率和准确度高，完全满足欧盟法规的要求。本发明方法设计合理，具有灵敏、准确、快速、简便的特点，解决了塑料类食品包装材料及容器中有害2?氰基?3,3?二苯基丙烯酸乙酯、2?氰基?3,3?联苯基丙烯酸2?异辛酯、紫外吸收剂UV?1164这3种紫外吸收剂特定迁移量检测的难题。
【专利说明】
液质联用法检测3种紫外吸收剂特定迁移量的方法
技术领域
[0001] 本发明属于化学物检测领域，涉及食品接触材料中有害2-氰基-3,3-二苯基丙烯 酸乙酯、2-氰基_3,3_联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164三种紫外吸收剂特定迀 移量的检测方法，尤其涉及一种使用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法检测此3种紫 外吸收剂特定迀移量的方法。
【背景技术】
[0002] 2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收 剂UV-1164这3种紫外吸收剂常作为紫外吸收剂类功能助剂，可广泛应用于聚氯乙烯、聚乙 烯膜、聚丙烯膜、聚甲醛、聚酰胺等塑料的生产。塑料类食品接触材料相关制品中残留或降 解出来的紫外吸收剂，在使用的过程中也会迀移到食物中，直接危害人体健康。紫外吸收剂 多为低毒类化合物，但是长期接触可能会致癌。由于这三种紫外吸收剂的毒副作用，欧盟在 2011年发布的(EU)NO 10/2011法规，将这三种紫外吸收剂的特定迀移量均限定在0.05mg/ kg〇
[0003] 目前，国内外有关2_氰基_3,3_二苯基丙稀酸乙酯、2_氰基_3,3_联苯基丙稀酸-2-异辛酯和紫外吸收剂UV-1164的检测主要集中在化妆品类样品中，使用的检测方法有高效 液相色谱紫外法(HPLC-UV)。林睿等建立了HPLC-UV法检测了 UV-1164在水、3 %乙酸、10 %乙 醇、20%乙醇、50 %乙醇、65%乙醇、95 %乙醇和异辛烷模拟物中的迀移量，但并未研究(EU) N0 10/2011法规所规定的D2--植物油食品模拟物中UV-1164的迀移量检测方法，且该方 法对UV-1164的定量限仅为0.5mg/kg，不能满足(EU)NO 10/2011法规UV-1164 0.05mg/kg的 限量要求。可见已有的检测方法无法对欧盟(EU)NO 10/2011法规中2-氰基-3，3_二苯基丙 烯酸乙酯、2-氰基_3,3_联苯基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸收剂UV-116的特定迀移量进行法 规限量下的定量检测。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种液质(HPLC-MS/MS)联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移 量的方法，所述的3种紫外吸收剂为2-氰基_3,3_二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基_3,3_联苯基丙 烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164。这3种紫外吸收剂存在于塑料类食品接触材料中。该方 法具有灵敏、准确、快速、简便的特点，解决了塑料类食品包装材料及容器中有害2-氰基-3， 3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164这3种紫外 吸收剂特定迀移量检测的难题。
[0005] 本发明的检测方法，通过以下步骤实现：
[0006] -、迀移试验
[0007] ①食品模拟物:根据(EU)N0 10/2011法规规定，食品模拟物A: 10%乙醇水溶液(v/ v)，用于模拟pH>4.5的水性食品；食品模拟物B: 3%乙酸水溶液(w/v)，用于模拟pH<4.5的 酸性食品；食品模拟物C:20%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量不超过20%的 食品；食品模拟物D1: 50%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量大于20 %的食品 以及油水乳化液;食品模拟物D2:植物油，用于模拟表面含有游离脂肪的食品。
[0008] ②迀移条件:按下表1所示根据产品实际用途选择合适的迀移试验条件：
[0009] 表 1
[0011]③表面积体积比：对于<500mL，> 10L容器类塑料制品或不可盛装的扁平制品， [0012]所述的表面积体积比为:对于<500mL，>10L容器类塑料制品或不可盛装的扁平 制品，将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对应1L食品 模拟物的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距容器边缘 4/5 处。
[0013]④迀移:根据食品接触塑料制品的实际用途，按照"③表面积体积比"将选用的"① 食品模拟物"注入到塑料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行密 封后，在烘箱或培养箱中按"②迀移条件"设定迀移温度和时间进行迀移试验。完毕后冷却 至室温，将其中的食品模拟物转移到干净玻璃器皿中待后续处理。
[0014]二、食品模拟试液的处理
[0015]①食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，移取1~2mL试液至1.5 或2mL离心管中，以彡10000g的离心速度，离心5min，上清转移至进样瓶中，待测。
[0016]②食品模拟物D2试液的处理:称取食品模拟物D2试液10g(精确至O.lg)于50mL具 塞玻璃离心管中，分别加入10.OmL正庚烷和4.00mL乙腈，旋紧塞子，在涡旋振荡器上混匀 后，再置于分液漏斗振荡器上300rpm震荡15min，再将离心管置于离心机中，以彡10000g的 离心速度，离心15min，乙腈上清液转移至进样瓶中，待测。
[0017] 三、空白试验
[0018] 按照二中①、②方法处理没有与待测样品接触的食品模拟试液。
[0019] 四、高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定
[0020]按确定的仪器条件以空白样品、校准曲线点、空白样品、待测样品的顺序分别依次 进样。校准曲线点以1〇.〇、20.0、40.0、80.0、160.0、200.0 yg/L或yg/kg低浓度至高浓度的浓 度顺序分别依次进样，以各种2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸-2_异辛酯和紫外吸收剂UV-1164色谱峰面积对浓度作线性回归，校准曲线外标法定量。测定 条件：
[0021 ]色谱柱:Jupiter C4色谱柱（250 X4.6mm，5iim)或相当者；
[0022] 流动相A:0.1 %甲酸铵水溶液；
[0023] 流动相B:甲醇；
[0024] 梯度洗脱程序：〇~6min，71 ~76%B;6~7min，76~92%B;7~15min，92~92%B; 15~16min，71%B;16~20min 71%B;
[0025] 进样量:2yL;
[0026] 流速：1 .OmL/min;
[0027]电喷雾离子源工作模式:正离子；
[0028]数据采集模式:多反应监测(MRM);
[0029]帘气：40.0yL/min;
[0030]碰撞气：中等(Medium);
[0031] 电喷雾离子源电压：5500V;
[0032]温度（TEM):70(TC;
[0033] 离子源气体 l:70.0yL/min;
[0034] 离子源气体 2:70.0yL/min;
[0035]作为进一步的改进，上述的步骤二①中处理方式是移取1~2mL试液至1.5或2mL离 心管中，以彡l〇〇〇〇g的离心速度，离心5min，转移至进样瓶中的是上清液。
[0036]作为进一步的改进，上述的步骤二②中食品模拟物D2植物油称取的量为10g;脱酯 溶剂正庚烷、提取溶剂乙腈加入的量分别为10mL和4mL;震荡提取的速度为300rpm;震荡提 取时间为15min;震荡后的离心管离心速度为彡10000g ;离心时间为15min;转移至进样品中 的是上清液。
[0037]作为进一步的改进，上述步骤四中高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法的测定 条件如下表2。
[0038]表2
[0040] 2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3,3-联苯基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸 收剂UV-1164的保留时间及在多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压参数 如下表3。
[0041] 表 3
[0044]本发明由于采用了上述的技术方案，食品模拟物A、B、C、D1采用高速离心去除溶液 中的颗粒成分，食品模拟物D2采用乙腈和正庚烷液液分配去除甘油酯，可以高效、简便、快 速的测定塑料类食品包装材料及容器中2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯 基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸收剂UV-1164特定迀移量。
[0045] 本发明对2-氰基_3,3_二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基_3,3_联苯基丙烯酸-2-异辛酯 和紫外吸收剂UV-1164的测定低限如下表4所示。
[0046] 表 4
[0048] 本发明通过高效液相色谱-串联质谱法同时测定3种紫外吸收剂特定迀移量，色谱 分离和线性关系好，回收率和准确度高，完全满足欧盟(EU)NO 10/2011法规附表1中2-氰 基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164的特 定迀移量限量要求，并已应用于实际样品的检测。本发明方法设计合理，具有灵敏、准确、快 速、简便的特点，解决了塑料类食品包装材料及容器中有害2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸乙 酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164这3种紫外吸收剂特定迀移量 检测的难题。
【具体实施方式】
[0049] 本发明结合实施例作进一步的说明。
[0050] 实施例1
[0051] 一、样品前处理方法 [0052] 1、迀移试验
[0053] 1.1食品模拟物：根据(EU)NO 10/2011法规规定，食品模拟物A: 10 %乙醇水溶液 (v/v)，用于模拟pH>4.5的水性食品；食品模拟物B: 3 %乙酸水溶液(w/v)，用于模拟pH< 4.5的酸性食品；食品模拟物C:20%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量不超过 20%的食品；食品模拟物Dl:50%乙醇水溶液(v/v)，用于模拟含酒精且酒精含量大于20% 的食品以及油水乳化液;食品模拟物D2:植物油，用于模拟表面含有游离脂肪的食品。
[0054] 1.2迀移条件:按下表5所示根据产品实际用途选择合适的迀移试验条件：
[0055] 表 5
[0057] 1.3表面积体积比：对于<500mL，>10L容器类塑料制品或不可盛装的扁平制品， 将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对应1L食品模拟物 的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距容器边缘4/5处。
[0058] 1.4迀移:根据食品接触塑料制品的实际用途，按照"③表面积体积比"将选用的 "①食品模拟物"注入到塑料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行 密封后，在烘箱或培养箱中按"②迀移条件"设定迀移温度和时间进行迀移试验。完毕后冷 却至室温，将其中的食品模拟物转移到干净玻璃器皿中待后续处理。
[0059] 2、食品模拟试液的处理
[0060] 2.1食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，移取1~2mL试液至 1.5或2mL离心管中，以彡10000g的离心速度，离心5min，上清转移至进样瓶中，待测。
[00611 2.2食品模拟物D2食品模拟物试液的处理:称取橄榄油模拟物10g(精确至0. lg)于 50mL具塞玻璃离心管中，分别加入10.0 mL正庚烷和4. OOmL乙腈，旋紧塞子，在涡旋振荡器上 混勾后，再置于分液漏斗振荡器上300rpm震荡15min，再将离心管置于离心机中，以彡 lOOOOg的离心速度，离心15min，乙腈上清液转移至进样瓶中，待测。
[0062] 3、空白试验
[0063]按照二中2.1、2.2方法处理没有与待测样品接触的食品模拟试液。
[0064]二、液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定条件：
[0065]高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法液相色谱条件和部分质谱条件参数见表 6〇
[0066]表6液相色谱条件和部分质谱条件
[0068] 2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸 收剂UV-1164在多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压见表7。
[0069] 表7多反应监测模式下的母离子、子离子、碰撞能和去簇电压
[0070]
[0071]三、线性关系和测定低限 [0072]本方法的测定低限见表8。
[0073]表8方法的测定低限
[0075]取不同浓度的2-氰基_3,3_二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基_3,3_联苯基丙烯酸-2-异 辛酯和紫外吸收剂UV-1164混合标准溶液(见表9)，按本方法所确定的仪器条件以及低浓度 至高浓度的顺序分别依次进样，以各种2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯 基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸收剂UV-1164色谱峰面积对浓度作线性回归，其浓度与色谱峰 面积线性关系良好，相关系数r 2>0.99956，结果见表10。
[0076]表9标准溶液系列浓度单位:yg/L或yg/kga
[0079] a橄榄油食品模拟物
[0080]表10线性范围、校准曲线、相关系数
[0081]
[0082]四、回收率和精密度试验
[0083]阴性样品中分别添加三个不同浓度水平的2-氰基_3,3_二苯基丙烯酸乙酯、2-氰 基_3,3_联苯基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸收剂UV-1164混合标准溶液，六次重复试验的平 均加标回收率和精密度数据见表11。
[0084]表11五种食品模拟物中的平均加标回收率和精密度(n = 6)
【主权项】
1. 一种液质谱联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移量的方法，所述的3种紫外吸收剂特 定来自于塑料类食品包装材料及容器中，分别为2-氰基-3,3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸2-异辛酯、紫外吸收剂UV-1164，其特征在于，通过以下步骤实现： 一、 迀移试验 根据食品接触塑料制品的实际用途，按照表面积体积比将选用的食品模拟物注入到塑 料制品或玻璃器皿中，在器皿口或容器口以表面皿或铝箱纸进行密封后，在烘箱或培养箱 中按迀移条件设定迀移温度和时间进行迀移试验，完毕后冷却至室温，将其中的食品模拟 物试液转移到干净玻璃器皿中待后续处理;其中食品模拟物分为食品模拟物A、B、C、D1、D2; 二、 食品模拟物试液的处理 (1) 食品模拟物A、B、C、D1试液的处理:将各试液充分混匀后，移取1~2mL试液至1.5或 2mL离心管中，以彡1000 Og的离心速度，离心5min，上清转移至进样瓶中，待测； (2) 食品模拟物D2试液的处理:称取食品模拟物D2试液IOg于50mL具塞玻璃离心管中， 分别加入10.0 mL正庚烷和4. OOmL乙腈，在涡旋振荡器上混匀后，再置于分液漏斗振荡器上 300rpm震荡15min，再将离心管置于离心机中，以彡1000 Og的离心速度，离心15min，乙腈上 清液转移至进样瓶中，待测； 三、 空白试验 按照步骤二中（1)、（2)的方法处理未与待测样品接触的食品模拟物A、B、C、D1、D2。四、 液相色谱串联质谱法测定 按确定的仪器条件以空白样品、校准曲线点、空白样品、待测样品的顺序分别依次进 样。校准曲线点以10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、200.0 yg/L或yg/kg的浓度顺序分别依次进 样，以各种2-氰基-3，3-二苯基丙烯酸乙酯、2-氰基-3，3-联苯基丙烯酸-2-异辛酯和紫外吸 收剂UV-1164色谱峰面积对浓度作线性回归，校准曲线外标法定量； 测定条件： 测定条件如下： 色谱柱:Jupiter C4色谱柱(250 X 4.6mm，5μπι)或相当者； 流动相A: 0.1 %甲酸铵水溶液； 流动相Β:甲醇； 梯度洗脱程序：〇~6min，71 ~76%Β;6~7min，76~92%Β;7~15min，92~92%Β;15~ 16min，71%B;16~20min 71%Β; 进样量:2yL; 流速：I .OmL/min; 电喷雾离子源工作模式:正离子； 数据采集模式:多反应监测(MRM); 帘气:40.0yL/min; 碰撞气：中等(Medium); 电喷雾离子源电压:5500V; 温度(TEM): 700 °C; 离子源气体1:70.0 yL/min; 离子源气体2:70.0yL/min。2. 根据权利要求1所述的一种液质谱联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移量的方法，其 特征在于，食品模拟物A: IO %乙醇水溶液，食品模拟物B: 3 %乙酸水溶液，食品模拟物C: 20 %乙醇水溶液，食品模拟物D1:50 %乙醇水溶液，食品模拟物D2:植物油。3. 根据权利要求1所述的一种液质谱联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移量的方法，其 特征在于，步骤一中所述的表面积体积比为:对于<500mL，>10L容器类塑料制品或不可盛 装的扁平制品，将塑料制品剪切好放入干净的玻璃器皿中，以6dm2食品接触面的表面积对 应IL食品模拟物的比例;对于>500mL，<10L的容器类塑料制品，则将食品模拟物注入至距 容器边缘4/5处。4. 根据权利要求1所述的一种液质谱联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移量的方法，其 特征在于，步骤二（1)中处理方式是移取1~2mL试液至1.5或2mL离心管中，以彡1000 Og的离 心速度，离心5min，转移至进样瓶中的是上清液。5. 根据权利要求1所述的一种液质谱联用法检测3种紫外吸收剂特定迀移量的方法，其 特征在于，步骤二(2)中食品模拟物D2植物油称取的量为10g，脱酯溶剂正庚烷、提取溶剂乙 腈加入的量分别为IOmL和4mL，震荡提取的速度为300rpm，震荡提取时间为15min，震荡后的 离心管进行离心，离心速度为多l〇〇〇〇g，离心时间为15min，转移至进样瓶中的是上清液。
【文档编号】G01N30/88GK105911205SQ201610265936
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】王建玲, 肖晓峰, 何军, 陈彤, 刘艇飞, 杨娟娟, 王佳
【申请人】中华人民共和国台州出入境检验检疫局