专利名称：一种脱落细胞保存液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种脱落细胞保存液及其制备方法，尤其涉及一种适合ACP酶显示的 脱落细胞保存液及其制备方法。
背景技术：
目前对妇女宫颈细胞的筛查，大多采用液基薄层细胞检测技术。具体方法使用专 门的取样器，在妇女宫颈移行区刷取脱落细胞，再将细胞洗入液基细胞保存液中，经保存液 消化后，将脱落细胞转移到载玻片上制成均勻的细胞涂片，涂片上有5000-50000个宫颈脱 落细胞，经过巴氏或者HF染色后，病理医生在显微镜下观察这些细胞的形态，寻找异常的 细胞，并根据TBS报告要求作出诊断报告，供妇科临床医生参考。液基薄层细胞检测技术采用的是巴氏或HE染色，虽然一张优良的细胞涂片能够 做到细胞薄层、均勻，便于医师阅片，但相对于需要从数万个细胞中找出阳性细胞，对镜检 医师仍然存在工作量大和要求经验水平高的问题，因人为因素造成漏检的现象非常常见， 因此，寻找一种能够提示阳性细胞的染色方法将具有十分重大的社会意义。经最新研究发 现，当细胞遭受HPV病毒感染或鳞状细胞表现CIN变化时，一种叫ACP的酶可以出现显著的 活性，而正常的细胞不出现这种酶的表达。利用这一研究发现，通过特殊的方法将阳性细胞 ACP酶显示出来，可以大大减少误诊率。在液基薄层细胞检测技术中加入ACP酶的显示技术，符合目前用户的使用习惯， 但这一技术对脱落细胞保存液要求更高，除了保存细胞、消化杂质外，还必须对ACP酶具有 良好的保存效果。脱落细胞的液基保存，并不适合用完全固定细胞的方法，否则可能影响去 除没有诊断价值的红细胞、粘液和细胞碎片等杂质。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种适合ACP酶显示的脱落细胞保存液，用于解决目 前的液基细胞保存液不能有效的保存ACP酶的问题。为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，终于获得了如下技术方案—种脱落细胞保存液，含有氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨 酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠，各成分的重量百分比分别为氯化钠0. 6%
氯化钾0. 06%
葡萄糖2%
乙醇20%
1-3丙二醇3%
甘油2%
甘氨酸0. 15%
粘液溶解剂0. 1%
细胞保护剂 0.2%肝素钠0.1%所述脱落细胞保存液的PH为5. 8。上述的脱落细胞保存液，它还含有0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液。上述的脱落细胞保存液，优选用1 %的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH至5. 8。上述的脱落细胞保存液，所述氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙醇、1-3丙二醇、甘油、甘 氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠为离子状。上述任一一种的脱落细胞保存液，其中所述粘液溶解剂优选为二硫苏糖醇(DTT)。上述任一一种的脱落细胞保存液，其中所述细胞保护剂优选为多聚甲醛。本发明的另一个目的是提供上述脱落细胞保存液的制备方法，该方法包括如下步 骤(1)用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护 剂、肝素钠，备用；(2)将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；(3)配制0. 05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；(4)在步骤C3)的苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡 萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠溶液，混勻后加入步骤O)的混合溶液，混 勻后用去离子水稀释至终浓度，边稀释边搅拌，并用1 %的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值 至 5. 8。本发明提供的脱落细胞保存液，以科学合理的比例增加了多种化学成分，细胞保 存率高，细胞核清晰、细胞质舒展，能有效去除红细胞和粘液，使细胞分散平铺的同时，更能 很好地保存ACP酶，适合做ACP酶染色。
图1经过本发明的细胞保存液保存后制成细胞涂片的显微照片1、异常细胞 2、正常细胞
具体实施例方式以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明 的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发 明的保护范围之内。宫颈脱落细胞保存液的制备1、根据最终溶液的容量，计算出各组分的用量，氯化钠0. 6%，氯化钾0. 06%，葡 萄糖2 %，乙醇20 %，1-3丙二醇3 %，甘油2 %，甘氨酸0.15%，粘液溶解剂0.1%，细胞保护 剂0. 2 %，肝素钠0.1%，保持终浓度达到所需要求；2、用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护 剂、肝素钠备用；3、将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；4、配制0. 05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；
5、在苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨 酸、二硫苏糖醇、多聚甲醛、肝素钠溶液混勻；6、将步骤3的混合溶液加入步骤5的溶液中混勻；7、用去离子水将6稀释到终浓度，边稀释边搅拌；8、测定PH值，用的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值到5. 8。9、各组分溶解，都呈现无色。经过上述制备方法制备的细胞保存液保存的宫颈脱落细胞，在转移到载玻片上 制成均勻的细胞涂片时，经过酶染色后，异常细胞的细胞质中含有的大量ACP酶颗粒被染 成红色，而正常细胞因不含ACP酶颗粒，故细胞质不着色，从而使异常细胞被清晰的标示出 来，具体效果参见图1。
权利要求
1.一种脱落细胞保存液，其特征在于含有如下重量百分比的组分氧化钠 0.6%氯化钾 0.06%葡萄糖 2%乙醇 20%1-3丙二醇 3%甘油 2%甘氨酸 0.15%粘液溶解剂 0.1%细胞保护剂 0.2%肝素钠 0.1%所述脱落细胞保存液的PH为5. 8。
2.如权利要求1所述的脱落细胞保存液，其特征在于还含有0.05Ν苯甲酸钠-苯甲 酸缓冲液。
3.如权利要求2所述的脱落细胞保存液，其特征在于PH为5.8。
4.如权利要求2所述的脱落细胞保存液，其特征在于所述氯化钠、氯化钾、葡萄糖、乙 醇、1-3丙二醇、甘油、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠为离子状。
5.如权利要求1-4任一所述的脱落细胞保存液，其特征在于所述粘液溶解剂为二硫 苏糖醇。
6.如权利要求1-4任一所述的，其特征在于所述细胞保护剂为多聚甲醛。
7.权利要求1-4任一所述的脱落细胞保存液的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)用去离子水分别溶解氯化钠、氯化钾、葡萄糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝 素钠，备用；(2)将乙醇、1-3丙二醇、甘油混合，并用去离子水稀释一倍；(3)配制0.05Ν苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液；(4)在步骤(3)的苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液浓缩液中，依次加入氯化钠、氯化钾、葡萄 糖、甘氨酸、粘液溶解剂、细胞保护剂、肝素钠溶液，混勻后加入步骤O)的混合溶液，混勻 后用去离子水稀释至终浓度，边稀释边搅拌，并用1 %的氢氧化钠或盐酸溶液调整PH值至
全文摘要
本发明涉及一种脱落细胞保存液及其制备方法，该保存液的各组分的重量百分比分别为氯化钠0.6％，氯化钾0.06％，葡萄糖2％，乙醇20％，1-3丙二醇3％，甘油2％，甘氨酸0.15％，粘液溶解剂0.1％，细胞保护剂0.2％，肝素钠0.1％，0.05N苯甲酸钠-苯甲酸缓冲液，并用1％的氢氧化钠或盐酸溶液调整pH值，以确保保存液的pH＝5.8。本发明的脱落细胞保存液能较好的保存细胞，保存时间可达10天以上，细胞核清晰、细胞质舒展，有效去除红细胞和粘液，使细胞分散平铺的同时，更能很好地保存ACP酶，适合做ACP酶染色。
文档编号A01N1/02GK102113481SQ20101060895
公开日2011年7月6日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者黄生明 申请人:厦门迈威生物科技有限公司