专利名称：一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法，尤其是应用于婴幼儿配方乳中。
背景技术：
婴幼儿肠道中婴儿双歧杆菌的减少，会导致有害菌的增长繁殖，引发痢疾、便秘等肠道相关疾病。婴儿双歧杆菌经过人体胃液这种极端酸性的条件考验之后，进入肠道的活菌数量会大幅度减少。因此，有效的对婴儿双歧杆菌进行包埋并添加到婴幼儿配方乳中成为研究的热点。采用食用明胶-树胶为壁材，酶为交联剂，制备无毒无害的婴儿双歧杆菌微胶囊，适用于婴幼儿这个特殊群体，有利于增加有婴儿体内婴儿双歧杆菌的活菌量，促进婴幼儿健康成长。国内尚未有应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供了一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法。为解决上述技术问题，提供如下技术方案
1)食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液在500 rpm的转速下混勻，食用明胶溶液和菌悬液的比例为1:3。2)在步骤1)得到的混合溶液中搅拌3 min后，加入阿拉伯胶溶液，相同转速下继续搅拌:3min，使用乙酸将混合液的pH调节为3.8 4.0，继续搅拌10 25 min,降温至10°C以下；
3)用碱液调节步骤2)得到的混合液的pH为6. (Γ7. 0，加入转谷氨酰胺酶反应，经洗涤、 过滤得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。所述明胶溶液浓度为1%1%，其与婴儿双歧杆菌菌悬液的优选比例为3:1。所述阿拉伯胶溶液浓度为1%1%，其与食用明胶溶液优选比例为1:1。所述转谷氨酰胺酶浓度与明胶的比例为l(Tl5U/g。步骤3)采用碱液调节pH值的目的在于调节至转谷氨酰胺酶反应的最适pH附近， 反应时间与转谷氨酰胺酶的添加量有关，一般酶反应的交联时间为Γ8 h。所述转谷氨酰胺酶的交联反应温度优选15°C。 采用本发明方法包埋婴儿双歧杆菌，粒径大小比较均勻，约为85 μ m左右，微胶囊表面光滑，无缝隙，微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性，有效隔绝了婴儿双歧杆菌与外界环境的接触，在4°C的条件下保存30 d后，存活率依旧可以保存到94. 16%。
图1是本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊放于倒置显微镜下的图片； 图2是本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的扫描电镜照片； 图3是本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的粒径分布图片；图4是未微胶囊化和微胶囊化婴儿双歧杆菌在4°C条件下储存活性 〇微胶囊化婴儿双歧杆菌，□未微胶囊化婴儿双歧杆菌； 图5、图6、图7和图8为不同实施方案下婴儿双歧杆菌微胶囊的固化效果图。
具体实施例方式实施例一
取食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液在500 rpm的转速下混勻，食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液的比例为1:3，食用明胶溶液浓度为1.5%，加入阿拉伯胶溶液，阿拉伯胶溶液浓度为1.5%，相同转速下搅拌3 min后，阿拉伯胶溶液和食用明胶溶液比例为1:1，双歧杆菌菌悬液的浓度为14. 29%0使用10%的乙酸将混合液的pH调节为3. 8^4. 0，继续搅拌 20 min，将制备液放于冰浴中冷却，直至温度低于10°C以下时。使用10%的NaOH将混合液的PH调节为6.0，加入转谷氨酰胺酶，酶浓度为10 U/g gelatin，继续搅拌3 min，温度为 10°C条件下处理6 h，经过洗涤、过滤等工序即可得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。放于倒置显微镜下观察见图1。经过真空冷冻干燥机将湿的微胶囊冻干，使用扫描电镜观察见图2。使用激光粒度分析仪测定复合凝聚微胶囊的粒径分布，见图3。将婴儿双歧杆菌微胶囊放置于4°C条件下储存，贮存稳定性见图4。取新制备微胶囊的悬浮液，将pH 调节为2，在倒置显微镜下观察并拍照片，在强酸条件下，微胶囊依旧完整，交联效果良好， 见图5。采用本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的包埋率为83. 27%。实施例二
取食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液在400 rpm的转速下混勻，食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液的比例为1:3，食用明胶溶液浓度为2%，加入阿拉伯胶溶液，阿拉伯胶溶液浓度为洲，相同转速下搅拌3 min后，阿拉伯胶溶液和食用明胶溶液比例为1:1，双歧杆菌菌悬液的浓度为14. 29%0。使用10%的乙酸将混合液的pH调节为3. 8^4. 0，继续搅拌20 min,将制备液放于冰浴中冷却，直至温度低于10°C以下时。使用10%的NaOH将混合液的pH 调节为6. 5，加入转谷氨酰胺酶，酶浓度为10 U/g gelatin,继续搅拌3 min，温度为15°C条件下处理6 h，经过洗涤、过滤等工序即可得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。取新制备微胶囊的悬浮液，将pH调节为2，在倒置显微镜下观察并拍照片，在强酸条件下，微胶囊依旧完整，交联效果较好，见图6。采用本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的包埋率为81. 25%。实施例三
取食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液在450rpm的转速下混勻，食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液的比例为1:3，食用明胶溶液浓度为2%，加入阿拉伯胶溶液，阿拉伯胶溶液浓度为洲，相同转速下搅拌3 min后，阿拉伯胶溶液和食用明胶溶液比例为1:1，双歧杆菌菌悬液的浓度为14. 29%0。使用10%的乙酸将混合液的pH调节为3. 8^4. 0，继续搅拌20 min,将制备液放于冰浴中冷却，直至温度低于10°C以下时。使用10%的NaOH将混合液的 pH调节为6.0，加入转谷氨酰胺酶，酶浓度为15 U/g gelatin，继续搅拌3 min，温度为15°C 条件下处理8 h，经过洗涤、过滤等工序即可得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。取新制备微胶囊的悬浮液，将pH调节为2，在倒置显微镜下观察并拍照片，在强酸条件下，微胶囊依旧完整，交联效果较好，见图7。采用本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的包埋率为82. 89%。实施例四
取食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液在500 rpm的转速下混勻，食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液的比例为1:3，食用明胶溶液浓度为1%，加入阿拉伯胶溶液，阿拉伯胶溶液浓度为1%，相同转速下搅拌3 min后，阿拉伯胶溶液和食用明胶溶液比例为1:1双歧杆菌菌悬液的浓度为14. 29%0使用10%的乙酸将混合液的pH调节为3. 8^4. 0，继续搅拌20 min,将制备液放于冰浴中冷却，直至温度低于10°C以下时。使用10%的NaOH将混合液的 PH调节为7.0，加入转谷氨酰胺酶，酶浓度为15 U/g gelatin，继续搅拌3 min，温度为20°C 条件下处理4 h，经过洗涤、过滤等工序即可得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。取新制备微胶囊的悬浮液，将pH调节为2，在倒置显微镜下观察并拍照片，在强酸条件下，微胶囊芯材依旧完整，壁才有少许溶解，交联效果一般，见图8。采用本发明方法制备的婴儿双歧杆菌微胶囊的包埋率为78. 56%。
权利要求
1.一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法，其特征在于，采用转谷氨酰胺酶对婴儿双歧杆菌、明胶以及阿拉伯胶的混合溶液进行交联反应。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，具体步骤如下1)食用明胶溶液和婴儿双歧杆菌菌悬液混勻；2)在步骤1)得到的混合溶液中加入阿拉伯胶溶液后，使用乙酸将混合液的PH调节为 3. 8 4.0，降温至10°C以下；3)用碱液调节步骤2)得到的混合液的pH值，加入转谷氨酰胺酶反应，经洗涤、过滤得到湿的婴儿双歧杆菌微胶囊。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述明胶溶液浓度为19Γ2%。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述阿拉伯胶溶液浓度为1%1%。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述转谷氨酰胺酶浓度与明胶的比例为 l(Tl5U/g。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，婴儿双歧杆菌菌悬液浓度为14.29%0
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，碱液调节pH至6.(Γ7. 0。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，转谷氨酰胺酶反应温度为1(T20°C。
全文摘要
本发明公开了一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法，其是以食用明胶和树胶为微胶囊壁材，以婴儿双歧杆菌为芯材，经过水相分离法制成的。本发明涉及使用酶作为交联剂制备微胶囊，制备的微胶囊耐胃酸性强。本方法具有工艺简单，食用安全等优点。本发明提高了婴儿双歧杆菌的利用率，保证其在调节婴幼儿肠道内菌群平衡、促进婴幼儿健康成长等方面的重要作用，可有效促进婴儿双歧杆菌在婴幼儿配方乳领域的应用。
文档编号A23P1/04GK102302160SQ20111026235
公开日2012年1月4日 申请日期2011年9月7日 优先权日2011年9月7日
发明者刘宁, 张微, 满朝新, 王贺楠 申请人:黑龙江省乳品工业技术开发中心