杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法

杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法
【专利摘要】提供能够提高杀菌效果的杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法。使包含过氧化氢、以及含有黄芩或绿茶的过氧化氢酶活性抑制剂的杀菌剂接触口腔内的牙齿、假牙等杀菌对象。然后，利用包含半导体激光器的发光单元，对杀菌对象照射具有350nm～500nm的波长的光。从而，过氧化氢发生光分解、产生羟自由基，能够利用所产生的羟自由基进行杀菌。
【专利说明】杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法

【技术领域】
[0001]本发明涉及杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法。

【背景技术】
[0002]作为现有的杀菌方法，有使过氧化氢等氧化剂接触杀菌对象、对杀菌对象照射400nm~100nm的波长的光的方法(参照例如专利文献I)。根据该方法，对过氧化氢照射400nm~100nm的波长的光、使其产生轻自由基,能够利用该轻自由基进行杀菌。
[0003]现有技术文献
[0004]专利文献
[0005]专利文献1:日本特开2008-284312号公报


【发明内容】

[0006]本发明要解决的技术问题
[0007]专利文献I所述的方法存在如下课题:在存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶作用下，部分过氧化氢发生分解，因此对这些细胞、微生物的杀菌效果下降。
[0008]本发明正是着眼于这样的课题而做出的，目的在于提供能够提高杀菌效果的杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法。
[0009]解决技术问题的技术手段
[0010]本发明人等发现，存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶，使生成具有高抗菌性的羟自由基的基质即过氧化氢分解。本发明人等使用为过氧化氢酶阳性的细菌及真菌的金黄色葡萄球菌(Streptococcus aureus)ATCC12693及白色念珠菌(Candidaalbicans) JCM9061，对于它们与羟自由基的反应测定DMPO-OH的变化并通过双倒数作图(Lineweaver-Burk Plot)进行解析。将其结果不于图1。
[0011]如图1所示，发现:菌的细胞数不同的所有直线在1/DMP0浓度的负数侧相交，不仅金黄色葡萄球菌及白色念珠菌与羟自由基反应，而且这些微生物所具有的过氧化氢酶也与过氧化氢反应。予以说明，若金黄色葡萄球菌及白色念珠菌仅与羟自由基反应则菌的细胞数不同的所有直线在1/DMP0-OH浓度轴上相交，若过氧化氢酶仅与过氧化氢反应则菌的细胞数不同的所有直线应当平行。
[0012]需要说明的是，图1所示的实验如下实施，即，在对金黄色葡萄球菌及白色念珠菌的细胞数进行各种改变的200 μ L(微升)菌液的各试样中，加入25~300mM的自由基捕捉剂:DMP0 (5, 5-Dimethyl-pyrrolin-N-oxide, 5，5- 二甲基-吡咯啉-N-氧化物)50 μ L,再加入0.5Μ的过氧化氢450 μ L，然后照射波长400±20nm的LED光I分钟，I分钟后进行ESR (电子自旋共振)测定。
[0013]本发明人等由图1所示的结果，获得了通过加入过氧化氢酶活性抑制剂来降低细胞、微生物的过氧化氢酶活性，从而能够进行有效的羟自由基杀菌的见解，直至完成本发明。
[0014]即，本发明的杀菌剂的特征为，包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂。
[0015]本发明的口腔用杀菌剂的特征为，包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂。
[0016]本发明的杀菌剂及口腔用杀菌剂按照下述方式使用。首先，将本发明的杀菌剂及口腔用杀菌剂涂布或喷雾到杀菌对象上使其接触杀菌对象。此时，由于包含过氧化氢酶活性抑制剂，因此即使杀菌对象中存在过氧化氢酶阳性细菌和真菌等细胞、微生物，也能够降低它们的过氧化氢酶活性，能够防止过氧化氢酶与过氧化氢反应。
[0017]然后，对杀菌对象照射规定波长的光。从而，过氧化氢发生光分解、产生羟自由基，因此能够利用所产生的羟自由基进行杀菌。此时，能够通过过氧化氢酶活性抑制剂降低存在于杀菌对象中的细胞、微生物的过氧化氢酶活性，因此能够防止通过过氧化氢酶与过氧化氢反应而产生的羟自由基减少。
[0018]由此，本发明的杀菌剂及口腔用杀菌剂，能够通过过氧化氢酶活性抑制剂防止产生羟自由基的过氧化氢与存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶反应而减少，结果防止由过氧化氢产生的羟自由基的减少，因此能够提高利用羟自由基实现的杀菌效果。
[0019]本发明的杀菌方法的特征为，使过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂接触杀菌对象，对前述杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光。
[0020]本发明的杀菌方法，在使过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂接触杀菌对象时，SP使杀菌对象中存在过氧化氢酶阳性细菌、真菌等细胞、微生物，也能够通过过氧化氢酶活性抑制剂降低它们的过氧化氢酶活性，能够防止过氧化氢酶与过氧化氢反应。
[0021] 此外，通过对杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光,过氧化氢发生光分解、产生羟自由基，因此能够利用所产生的羟自由基进行杀菌。此时，由于能够通过过氧化氢酶活性抑制剂降低存在于杀菌对象中的细胞、微生物的过氧化氢酶活性，因此能够防止过氧化氢酶与过氧化氢反应而产生的轻自由基的减少。
[0022]从而，根据本发明的杀菌方法，能够通过过氧化氢酶活性抑制剂，防止产生羟自由基的过氧化氢与存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶反应而减少，结果防止由过氧化氢产生的羟自由基的减少，因此能够提高利用羟自由基实现的杀菌效果。
[0023]本发明的杀菌方法中，使过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂接触杀菌对象的方法可以为涂布或喷雾本发明的杀菌剂及口腔用杀菌剂的方法、将杀菌对象浸溃在本发明的杀菌剂的溶液中的方法等任意方法。
[0024]本发明的杀菌装置的特征为，具有过氧化氢、过氧化氢酶活性抑制剂和发光单元，所述发光单元设置为能够对接触了前述过氧化氢和前述过氧化氢酶活性抑制剂的杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光。
[0025]本发明的杀菌装置能够适当实施本发明的杀菌方法。根据本发明的杀菌装置，能够通过过氧化氢酶活性抑制剂，防止产生羟自由基的过氧化氢与存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶反应而减少，结果防止由过氧化氢产生的羟自由基的减少，因此能够提高利用羟自由基实现的杀菌效果。
[0026]本发明的杀菌装置中，过氧化氢及过氧化氢酶活性抑制剂也可以由本发明的杀菌剂或口腔用杀菌剂构成。此外，本发明的杀菌装置中，杀菌对象包括口腔内的牙齿、假牙等，过氧化氢酶活性抑制剂也可以由包含过氧化氢酶活性抑制剂的牙膏、漱口水等构成。此时，在用该牙膏刷牙等、或用漱口水漱口之后，使杀菌对象接触过氧化氢、利用发光单元照射光，从而使用。
[0027]本发明的杀菌方法及杀菌装置中，照射光的发光单元只要能够照射具有350nm~500nm的波长的光即可，可以是任意发光单元，例如发热灯、荧光灯、卤素灯、氙灯、LED (发光二极管)、半导体激光器等。所照射的光只要具有350nm~500nm的波长即可，既可以为单一波长，也可以包含多种波长，还可以由规定带宽的波长构成。
[0028]本发明的杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法及杀菌装置中，过氧化氢酶活性抑制剂优选包含例如黄芩、绿茶、茴香、枇杷、甘草、芦荟、鼠尾草、金缕梅、洋甘菊、迷迭香、蜜蜂花或桃。特别优选包含过氧化氢酶活性抑制效果高的黄芩或绿茶。
[0029]本发明的杀菌剂的评价方法的特征为，对采集自接触了本发明的杀菌剂后的杀菌对象的试样和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，进行电子自旋共振(ESR)测定，基于所获得的电子自旋共振(ESR)谱的线宽，测定前述试样中包含的细胞或微生物的过氧化氢酶活性，对前述杀菌剂的杀菌效果进行评价。
[0030]由于过氧化氢酶催化过氧化氢分解为水和氧的反应，因此本发明的杀菌剂的评价方法中，利用ESR测氧法测定该反应所产生的氧，从而测定过氧化氢酶活性。此外，由于TEMPOL的ESR谱的线宽和过氧化氢酶浓度之间可以视为正相关关系，因此可以基于ESR谱的线宽测定试样中包含的细胞或微生物的过氧化氢酶活性，对杀菌剂的杀菌效果进行评价。需要说明的是，杀菌剂可以为本发明的口腔用杀菌剂。
[0031]发明效果
[0032]根据本发明，可以提供能够提闻杀菌效果的杀菌剂、口腔用杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法。

【专利附图】

【附图说明】
[0033]图1为示出通过过氧化氢的光分解而生成的羟自由基和(a)金黄色葡萄球菌的反应动态解析、与(b)白色念珠菌的反应动态解析的图。
[0034]图2为示出基于本发明的实施方式的杀菌剂评价方法的、过氧化氢酶浓度和TEMPOL的ESR谱的线宽的关系的图。
[0035]图3为示出研究作为本发明的实施方式的杀菌剂的过氧化氢酶活性抑制剂的用途的各种生药的、过氧化氢酶活性的抑制作用的图。
[0036]图4为示出本发明的实施方式的杀菌剂的过氧化氢酶活性抑制剂的、对金黄色葡萄球菌的基于黄芩的杀菌效果的增强效果的图(图中的H表示过氧化氢、L表示激光照射、O表示黄岑(lmg/mL)、+表示有、-表示无)。
[0037]图5为表示本发明的实施方式的杀菌剂的过氧化氢酶活性抑制剂的、对金黄色葡萄球菌的基于黄芩浓度的杀菌效果的图。
[0038]图6为表示本发明的实施方式的杀菌剂的过氧化氢酶活性抑制剂的对(a)金黄色葡萄球菌、(b)白色念珠菌的基于黄芩浓度的杀菌效果的图，对(C)金黄色葡萄球菌、(d)白色念珠菌的基于绿茶浓度的杀菌效果的图(图中的H表示过氧化氢、L表示激光照射、+表不有、-表不无)。

【具体实施方式】
[0039]下面对本发明的实施方式的杀菌剂、杀菌方法、杀菌装置及杀菌剂的评价方法进行说明。
[0040]本发明的实施方式的杀菌装置具有本发明的杀菌剂和发光单元。
[0041]杀菌剂包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂。过氧化氢酶活性抑制剂包含黄芩或绿茶。
[0042]发光单元包含能够照射具有350nm~500nm的波长的光的半导体激光器。
[0043]本发明的实施方式的杀菌方法优选利用本发明的实施方式的杀菌装置来实施。首先，使包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂的杀菌剂接触杀菌对象。此时，即使杀菌对象中存在过氧化氢酶阳性细菌、真菌等细胞、微生物，也能够通过过氧化氢酶活性抑制剂降低它们的过氧化氢酶活性，能够防止过氧化氢酶与过氧化氢反应。
[0044]然后,利用发光单元对杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光。从而,过氧化氢发生光分解、产生羟自由基，因此能够利用所产生的羟自由基进行杀菌。此时，由于能够通过过氧化氢酶活性抑制剂降低存在于杀菌对象中的细胞、微生物的过氧化氢酶活性，因此能够防止过氧化氢酶与过氧化氢反应而产生的羟自由基的减少。
[0045]从而，根据本发明的实施方式的杀菌剂、杀菌方法及杀菌装置，能够通过过氧化氢酶活性抑制剂，防止产生羟自由基的过氧化氢与存在于杀菌对象中的细胞、微生物所具有的过氧化氢酶反应而减少，结果防止由过氧化氢产生的羟自由基的减少，因此能够提高利用羟自由基实现的杀菌效果。
[0046]实施例1
[0047]进行求出过氧化氢酶活性和TEMPOL的ESR谱的线宽之间的关系的试验。将100 μ L的过氧化氢酶(和光纯药工业株式会社制)、25 μ L的TEMPOL (西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich Corporat1n)制)和125 μ L的过氧化氢(三德化学工业株式会社制)分别用超纯水稀释并按照达到表1所示的最终浓度的方式混合，制备过氧化氢酶的最终浓度为0、0.25,0.5、1.0,2.0U/mL的5种混合液。对制备的混合液进行ESR测定，将其测定结果示于图2。
[0048][表 I]
份量敁终浓设
过氧化氢酶 100 μ!_ O, 0.25, 0.5, 1.0, and 2.0 U/m L
[0049]
TEMPOL25 μΙ_200 μΜ
过氧化氢125 μΙ_250 mM
[0050]如图2所示，确认TEMPOL的ESR谱的线宽和过氧化氢酶浓度之间可视为高的正相关关系。可以由该结果基于ESR谱的线宽测定被测试样的过氧化氢酶活性。
[0051]实施例2
[0052]使用图2的结果，对过氧化氢酶活性抑制剂带来的过氧化氢酶活性的抑制作用进行测定。将50 μ L的过氧化氢酶、25 μ L的TEMPOL、认为具有过氧化氢酶活性的抑制作用的50 μ L生药和125 μ L的过氧化氢分别用超纯水(Mill1-Q水)稀释并按照达到表2所示的最终浓度的方式混合，制备混合液。作为生药，使用黄岑、绿茶、蜜蜂花(lemon balm)。此外，生药使用的是为了去除不溶于水的物质而用0.22 μ m的过滤器过滤后的物质。此外，为了进行比较，还制备了不加生药的混合液试样(Mill1-Q水:MQ)。
[0053][表2]

【权利要求】
1.一种杀菌剂，其特征在于，包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂。
2.根据权利要求1所述的杀菌剂，其特征在于，前述过氧化氢酶活性抑制剂包含黄芩或绿茶。
3.—种口腔用杀菌剂，其特征在于，包含过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂。
4.一种杀菌方法，其特征在于，使过氧化氢和过氧化氢酶活性抑制剂接触杀菌对象，对前述杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光。
5.一种杀菌装置，其特征在于，具有:过氧化氢、过氧化氢酶活性抑制剂和发光单元，所述发光单元设置为能够对接触了前述过氧化氢和前述过氧化氢酶活性抑制剂的杀菌对象照射具有350nm~500nm的波长的光。
6.一种杀菌剂的评价方法，其特征在于， 对采集自接触了权利要求1或2所述的杀菌剂的杀菌对象的试样和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧化物(TEMPOL)的混合液，进行电子自旋共振(ESR)测定，基于所获得的电子自旋共振(ESR)谱的线宽，测定前述试样中包含的细胞或微生物的过氧化氢酶活性，对 前述杀菌剂的杀菌效果进行评价。
【文档编号】A01N25/22GK104053363SQ201180075289
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2011年12月1日 优先权日:2011年12月1日
【发明者】菅野太郎, 中村圭祐, 猪饲纮代, 河野雅弘, 庭野吉己 申请人:株式会社Az