专利名称：一种牛冻精生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及牛冷冻精液生产技术领域，尤其是一种牛冻精生产エ艺。
背景技术：
我国自上世纪七十年代开展牛冷冻精液生产，迄今已有三十多年的历史。虽然生产设备不断更新、エ艺流程不断改进、自动化水平不断提高，但随着改良范围逐渐扩大、改良目的要求逐渐提高，市场对公牛冻精生产需求也逐渐多量化、优质化。这就要求，在原有鲜精生产的基础上，在維持并提高原有产量的情况下，优化牛冻精生产的エ艺流程，并进ー步可提高产量、质量。例如在生产冻精过程中，通过采用不同的稀释液、稀释方法、平衡降温时间及冷冻的方法，我们发现，对生产冻精的品质起着重要的决定作用，通过进行评定、对比，以及对冻后精子的活力、定义的完整率和畸形率的研究对比，针对性的优化生产エ艺流程可大大提高牛冻精的生产品质与产量。
发明内容
本发明的目的在于提供ー种操作方便、经济实用，利于提高种公牛的精液品质和年产精液量的牛冻精生产エ艺。本发明公开了ー种牛冻精生产エ艺，其特征在于包括以下エ艺步骤
(1)配制牛冻精稀释液A液与B液备用；
(2)将接入的牛鲜精先置于29.5 30. 5°C水浴锅内，检测、记录、计算得出所需添加稀释液A液与B液的量，时间需1 2min，之后再将接入的牛鲜精放置于24°C 26°C水浴锅内；
(3)待上述精液降温至24.5°C 25. 5 V吋，添加等温的稀释A液，然后置于常温21. 5°C 22. 5°C水浴中经5-10min渗透互溶；
(4)将第(3)步骤得到的互溶好的精液内添加稀释B液，稀释B液为22-25°C，之后降温至3. 5°C 4. 5°C并平衡3. 5 5小时，即可封装打印；
上述A液与B液分别为
(a)其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2. 5 3. 4g,庆大霉素0. 1 0. 2g、环丙沙星0. 03 0. lg、氨苄西林钠和链霉素各5 10万単位、果糖1 2g、卵黄10 15ml，余量为蒸馏水；
(b)其中B液为取自体积比84% 88%的A液作为基础液，在其中加入12 16ml的甘油或こニ醇配制而成。所述A液中每100ml稀释液中各原料的含量的最佳值为
柠檬酸三钠或柠檬酸钠2. 9g、庆大霉素0. 16g、环丙沙星0. 04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万単位、果糖1. lg、卵黄12ml，余量为蒸馏水；
其中B液最好为取自体积比85%的A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油或こニ醇配制而成，即其中的主要原料含量的最佳值包括朽1檬酸三钠或朽"檬酸钠2. 465g、庆大霉素0. 136g、环丙沙星0. 34g、氨节西林钠为6. 8万单位、链霉素为4. 25万单位、果糖0. 935g、卵黄10. 2ml、甘油或こニ醇为15ml,余量为蒸馏水。所述的牛冻精稀释液A液与B液主要由以下步骤配制而成
(1)称取各种原料朽1檬酸三钠或朽"檬酸钠2.5 3. 4g,庆大霉素0. 1 0. 2g、环丙沙星0. 03 0. lg、氨节西林钠和链霉素各5 10万单位、果糖1 2g、卵黄10 15ml,甘油或こニ醇为12 16ml及蒸馏水备用；
(2)每100ml蒸馏水用2.5 3. 4g的柠檬酸三钠或柠檬酸钠配 制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤；
(3)A液的配制在上述基础液中加入庆大霉素0.1 0. 2g、环丙沙星0. 03 0. lg、氨节西林钠和链霉素各5 10万单位、果糖1 2g、卵黄10 15ml配制而成；
(4)B液的配制以上述备用的取自体积比84% 88%的A液作为基础液，加入甘油或こニ醇12 16ml配制而成；
上述(3) (4)步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。与现有技术相比，本发明所提供的牛冻精生产エ艺的优点
1、温度、时间的优化
调整稀释温度在牛冻精生产中，我们沿用的是二次稀释法，即鲜精接入后先置于35°C水浴锅内，经过记录、计算得出所需添加稀释A、B液的量后，首先添加等温(即35°C)A液，然后直接置于常温(即22-25°C)水浴中降温30-60min后，添加B液(22_25°C )，最后连同水浴(22-25°C)放入低温操作柜内降温平衡后，封装打印。这样做优点在于鲜精采出后首先接触的温度与附睾内的温度相仿，添加A液B液中间间隔时间比较长，避免稀释冲击，让精子适应稀释液环境，使甘油对精子的毒害降低。但是，①鲜精采出后，首先要与内胎，集精杯接触，在这ー过程中，虽然有保温套保温，但毕竟不能做到绝对保温，鲜精与外界温差越大，精液降温速度越快(尤其在冬天)，再从采精现场到实验室接精窗ロ这ー时间段，精子一直在持续降温。可见，鲜精从采出那一刻，到放置于水浴锅内，温度已经降低了很多，一般在30-33°C，与附睾内的温度有差异，如果在放入35で水浴锅内，鲜精温度将会再次提高。因而精子反复回温，易遭受打击致使死亡。所以，将鲜精采出后放置的水浴温度降低到29. 5-30. 5°C，得到良好的效果。②稀释温度常规稀释流程中，稀释后降温速度过快，从35°C直接降至22°C左右，精子易受到冷打击，本发明采用下列方式在29. 5-30. 5°C水浴锅记录、计算完毕后，放置于24-26°C水浴锅，待精液逐步降温至24. 5-25. 5°C时，添加等温的稀释A液，然后再放到常温21. 5-22. 5°C水浴中经过5-10min滲透互溶后，添加稀释B液、放置低温操作柜中平衡。增加这ー步骤，可以有效地使精子逐步适应下降的温度，減少死亡。如下图表格所示鲜精在不同流程时的温度
I附睾内I接入时放置温度I稀释A液温度I稀释B液温f 鲜精温度 37-38°C 30-33°C
优化前不同流程 37-38°C 35 °C35 °C22 °C
优化后不同流程 [37-38°C I30°C[25°C122 °C
2、优化稀释液
稀释液作为冷冻精液的保护机制，不仅为精液提供能量，也对精子有着保护的作用。它的成分有糖类、卵黄、抗冻剂、缓冲剂、抗菌素及非电解质。其中糖类和抗冻剂尤为重要。
在冻精生产流程中，二次稀释时，糖类和抗冻剂是添加在稀释B液中的。糖类具有补充精子的能量消耗，对精子在低温情况下有保护的作用。抗冻剂的作用当精液冷冻时，主要受到危害是冰晶从精子细胞原生质中抽去水，使精子细胞造成脱水状态，发生不可逆的变化死亡。而甘油可減少和降低这种对精细胞的危害。如下表所示稀释B液优化前后果糖和甘油的含量
权利要求
1.一种牛冻精生产工艺，其特征在于包括以下工艺步骤 (1)配制牛冻精稀释液A液与B液备用； (2)将接入的牛鲜精先置于29.5 30. 5°C水浴锅内，检测、记录、计算得出所需添加稀释液A液与B液的量，时间需I 2min，之后再将接入的牛鲜精放置于24°C 26°C水浴锅内； (3)待上述精液降温至24.5°C 25. 5 V时，添加等温的稀释A液，然后置于常温21. 5°C 22. 5°C水浴中经5-10min渗透互溶； (4)将第(3)步骤得到的互溶好的精液内添加稀释B液，稀释B液为22-25°C，之后降温至3. 5°C 4. 5°C并平衡3. 5 5小时，即可封装打印； 上述A液与B液分别为 (a)其中A液为每IOOml稀释液中各原料的含量主要包括 柠檬酸三钠或柠檬酸钠2. 5 3. 4g,庆大霉素O. I O. 2g、环丙沙星O. 03 O. lg、氨苄西林钠和链霉素各5 10万单位、果糖I 2g、卵黄10 15ml，余量为蒸馏水； (b)其中B液为取自体积比84% 88%的A液作为基础液，在其中加入12 16ml的甘油或乙二醇配制而成。
2.如权利要求I所述的牛冻精生产工艺，其特征在于所述A液中每IOOml稀释液中各原料的含量为 柠檬酸三钠或柠檬酸钠2. 9g、庆大霉素O. 16g、环丙沙星O. 04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖I. lg、卵黄12ml，余量为蒸馏水； 其中B液为取自体积比85%的A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油或乙二醇配制而成，即其中的主要原料含量包括 朽1檬酸三钠或朽1檬酸钠2. 465g、庆大霉素O. 136g、环丙沙星O. 34g、氨节西林钠为6. 8万单位、链霉素为4. 25万单位、果糖O. 935g、卵黄10. 2ml、甘油或乙二醇为15ml,余量为蒸馏水。
3.如权利要求I或2所述的牛冻精生产工艺，其特征在于所述的牛冻精稀释液A液与B液主要由以下步骤配制而成 (1)称取各种原料朽1檬酸三钠或朽1檬酸钠2.5 3. 4g,庆大霉素O. I O. 2g、环丙沙星O. 03 O. lg、氨节西林钠和链霉素各5 10万单位、果糖I 2g、卵黄10 15ml,甘油或乙二醇为12 16ml及蒸馏水备用； (2)每IOOml蒸馏水用2.5 3. 4g的柠檬酸三钠或柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤； (3)A液的配制在上述基础液中加入庆大霉素O.I O. 2g、环丙沙星O. 03 O. lg、氨节西林钠和链霉素各5 10万单位、果糖I 2g、卵黄10 15ml配制而成； (4)B液的配制以上述备用的取自体积比84% 88%的A液作为基础液，加入甘油或乙二醇12 16ml配制而成； 上述(3) (4)步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。
全文摘要
本发明涉及牛冷冻精液生产技术领域，尤其是一种牛冻精生产工艺。包括以下工艺步骤(1)配制牛冻精稀释液A液与B液备用；(2)将接入的牛鲜精先置于29.5～30.5℃水浴锅内，检测、记录、计算出稀释液A液与B液的量，之后再将接入的牛鲜精放置于24℃～26℃水浴锅内；(3)待上述精液降温至24.5℃～25.5℃时，添加等温的稀释A液，然后置于常温21.5℃～22.5℃水浴中经渗透互溶；(4)将第(3)步骤得到的互溶好的精液内添加稀释B液，稀释B液为22-25℃，之后降温至3.5℃～4.5℃并平衡3.5～5小时，即可封装打印，其操作方便、经济实用。
文档编号A01N1/02GK102948414SQ20121047156
公开日2013年3月6日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者朱兵山, 孙锦霞, 陈蕾, 王宁 申请人:新疆天山畜牧生物工程股份有限公司