专利名称：一种富硒冬虫夏草菌丝体的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种富硒冬虫夏草菌丝体的制备方法。
背景技术：
虫草(Cordyc印s)为我国特有的名贵药用真菌。虫草中含有多种生理活性物质，中医药文献认为冬虫夏草味甘性温，有秘精益气、保肺补肾、止血化痰的功效。近代医学临床研究表明，冬虫夏草能治疗劳咳痰血、盗汗、阳痿、遗精、黄胆病、肺结核及老年衰弱、慢性咳喘等症，有强壮兼收敛镇静的效果。冬虫夏草所含虫草素能明显增强红细胞粘附肿瘤细胞的能力，抑制肿瘤生长和转移 ，能明显提升白血球和血小板数量，迅速改善放化疗后的呕吐恶心、胃口差、头发脱落、失眠等症状。但天然的冬虫夏草产量十分稀少，因此，人们采用培养冬虫夏草菌丝体来替代天然冬虫夏草。目前，人工虫草菌丝体的生产多以液体深层发酵为主。硒是人和动物体内必需的一种元素，缺硒可以导致多种症状。例如人体缺硒会诱发心血管疾病、癌症、克山病及大骨节病等，而动物缺硒主要表现为白肌病和生长缓慢等。例如牛缺硒时，会出现骨骼肌和心肌变性，生长缓慢，消瘦，犊牛腹泻，猪缺硒时，表现为肝营养不良；仔猪出现白肌病，桑堪心，胃溃疡等，鸡缺硒则会出现胰腺变性坏死，脑软化，成年鸡产蛋率和孵化率都下降等。期刊《湖北大学学报(自然科学版)》2006年03期文章《富硒虫草菌丝体的发酵培养及其生物学功能研究》采用菌种Cordyceps Sinensis,以鹿糖、大豆粉和玉米粉为基质进行液体发酵，在发酵培养基中添加微量Na2SeO3,虫草菌丝体收得率达2.52%，其中硒含量达7.90 mg/kg。该文献中，虽然得到了富硒菌丝体，但是该法使用的基质是蔗糖、大豆粉等，成本增高，不具备经济优势。啤酒糟(豆柏、麸皮)等因原料不同、生产工艺不同、水分含量不同，使得营养价值有差异，但从技术、质量、环保、投资、效益及市场几方面综合考虑，通过微生物将这类糟渣转化为营养丰富、适口性好、附加值高、经济效益显著的食品添加剂或者微生物饲料是最经济有效的方法之一。废渣中含有大量的营养物质，经微生物发酵后，可转变成更加有效的生物活性物质，作为动物饲料不仅能够提高饲料的营养价值，更能提高畜禽的抗病能力和生产能力。如果将这些活性成分进一步分离纯化，可以作为食品添加剂甚至是药品。通过生物技术对啤酒糟进行深加工开发，可大大提高啤酒糟的利用率和深加工产品的附加值，为企业变废为宝提供新思路，提升啤酒生产企业的经济效益。为此，本申请发明人尝试以农产副产物酒糟作为发酵的培养基，以虫草菌丝体中硒含量为发酵指标，对冬虫夏草进行富硒液态发酵，生产饲料添加剂。
发明内容
为了获得营养和药用价值较高的富硒虫草菌丝体，克服发酵成本过高，造成不利于工业化生产的缺点，本发明提供一种新的培养条件易于实现、生产成本低、设备投资少，易于实现工业化的富硒虫草菌丝体的生产工艺。本发明采用的技术方案是:一种富硒冬虫夏草菌丝体的制备方法，所述方法包括:将冬虫夏草菌种(常规菌株，市购可得)接种至啤酒糟为基质的液体发酵培养基中，2(T30°C、12(T200r/min条件下培养Γ8天，于发酵液中得到所述富硒虫草菌丝体；所述液体发酵培养基按如下组成配制:啤酒糟l(T50g/L，Na2SeO3 l(T30mg/L，溶剂为水，pH 4 8。所得发酵液可进一步按常规方法进行分离获得所述富硒虫草菌丝体。将所得的虫草菌丝体粉碎，草酸铵溶液提取f 4 h，以提取物刺激小鼠脾淋巴细胞，观察细胞增值情况，结果显示50(^g/mL时细胞增值率为296.32% (为实施例8所得的数据)，可见本发明方法制得的富硒虫草菌丝体具有较强的生物活性。优选的，所述液体发酵培养基按如下组成配制:啤酒糟2(T40g/L，Na2SeO315 25mg/L，溶剂为水，pH 5 7。优选的，所述发酵在22 28°C、12(Tl80r/min条件下进行。本发明所述的菌体接种量为常规接种量，一般在5 15%(ν/ν，种子液与发酵培养基体积比)，优选为10%，种子液可按常规方法进行种子培养获得。具体的，本发明方法可按如下步骤进行:I)种子液培养:先将制备好的斜面培养基上的母种用接种铲取一块约20 mm2大小的菌苔接入种子培养基(蔗糖50g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L，溶剂为水)，装样量为100mL/250mL的三角瓶中，在25°C、160r/min恒温振荡器上发酵3天，形成微小的菌球；2)发酵培养基配制:啤酒糟l(T50g/L，Na2SeO3 l(T30mg/L，溶剂为水，pH 4 8 (用以 0.1N HCl 和 0.1N Na OH 调整)；3)发酵培养基120°C灭菌20分钟，种子液以5 15% (v/v，种子液与发酵培养基体积比)接种量接种于发酵培养基，2(T3(rC、12(T200r/min条件下培养4 8天。4)所得发酵液经60目筛过滤，并反复冲洗三次，再过滤，干燥，即得富硒虫草菌丝体。本发明可以通过控制培养条件，获得一定硒富集度的虫草菌丝体；且本发明所制得的富硒虫草菌丝体具有良好的生物学活性。与现有技术相比，本发明方法反应条件温和、生产成本低、设备投资少，易于实现工业化，获得的菌丝体具有较强的生物学活性，从而有望在动物疾病的预防和治疗上取得突破。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:实施例1:出发菌株:菌株冬虫夏草I号购自山东梁山县正大菌业科技开发中心。种子培养:制备好的斜面培养基上的母种用接种铲取一块约20 mm2大小的菌苔接入种子培养基(蔗糖50g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L，溶剂为水)，装样量为100mL/250mL的三角瓶中，在25°C、160r/min恒温振荡器上发酵3天，种子液中形成微小的菌球。优化发酵培养基中啤酒糟的浓度，分别选择10g/L，20g/L, 30g/L, 40g/L和50g/L，添加25mg/L Na2SeO3, pH值调整为6，种子液接种量为10%，在温度为22°C，摇瓶转速为160r/min条件下，培养6天，发酵液经60目筛过滤，并反复冲洗三次，再过滤，干燥，即得富硒虫草菌丝体，所得菌丝体量及菌丝体中有机硒量结果见下表。
权利要求
1.一种富硒冬虫夏草菌丝体的制备方法，所述方法包括:将冬虫夏草菌种接种至啤酒糟为基质的液体发酵培养基中，2(T30°C、12(T200r/min条件下培养Γ8天，于发酵液中得到所述富硒虫草菌丝体；所述液体发酵培养基按如下组成配制:啤酒糟 l(T50g/L，Na2SeO3 10 30mg/L，溶剂为水，pH 4 8。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于:所述液体发酵培养基按如下组成配制:啤酒糟 20 40g/L，Na2SeO3 15 25mg/L，溶剂为水，pH 5 8。
3.如权利要 求1所述的方法，其特征在于:所述发酵在2(T28°C、12(Tl80r/min条件下进行。
全文摘要
本发明提供了一种富硒冬虫夏草菌丝体的制备方法，所述方法包括将冬虫夏草菌种接种至啤酒糟为基质的液体发酵培养基中，20~30℃、120~200r/min条件下培养4~8天，于发酵液中得到所述富硒虫草菌丝体；所述液体发酵培养基按如下组成配制啤酒糟10~50g/L，Na2SeO3 10~30mg/L，溶剂为水，pH4~8。所得发酵液可进一步按常规方法进行分离获得所述富硒虫草菌丝体。与现有技术相比，本发明方法反应条件温和、生产成本低、设备投资少，易于实现工业化，获得的菌丝体具有较强的生物学活性，从而有望在动物疾病的预防和治疗上取得突破。
文档编号A23K1/00GK103070011SQ20131000571
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月7日 优先权日2013年1月7日
发明者杨胜利 申请人:浙江工业大学