一种灰树花优质菌株的初筛方法
【专利摘要】本发明公开了一种灰树花优质菌株的初筛方法，该方法包括如下步骤：（1）灰树花菌种接种于培养管/瓶中，培养8-12天后，观察菌丝吃料情况及有无杂菌污染，菌丝进入快速吃料阶段后每隔10天划线；（2）菌丝发满并后熟后可自主发生原基，观察原基形成及发生率，同时观察培养料表面黄水及霉菌的发生，鉴定每个菌株的抗杂菌能力，挑选菌丝浓白致密，长势好，原基形成率高，形成时间一致，不吐黄水，不染杂菌的，即得到初筛的菌株。
【专利说明】一种灰树花优质菌株的初筛方法
所属【技术领域】:
[0001]本发明涉及食药用菌培养领域，具体的说涉及一种灰树花优质菌株的初筛方法。【背景技术】:[0002]灰树花(学名:Grifola frondosa),又名贝叶多孔菌、云蕈、栗子蘑、栗蘑、千佛菌、莲花菌，是一种产于北美、中国、日本东北部的食用菌。它的顶端类似于波纹而没有菌伞，通常集簇长在橡树的根部，看起来像一群飞舞的蝴蝶。灰树花在日本已经实现工厂化栽培，是其第3大宗的工厂化栽培食用菌。我国浙江省庆元县的传统栽培方式也比较成熟，该栽培模式采用了菌棒式两次出菇的方式，可取得较高的产量，目前已形成了规模化生产基地。而我国的工厂化栽培近年来也开始通过引进消化吸收的方式，取得了一定的进展，目前已经有少量工厂化栽培的灰树花供应市场。在金针菇、杏鲍菇等品种产能过剩，价格低迷的情况下，灰树花的食药用价值被越来越多的人所接受和认可，未来具有广阔的市场前景，但迄今为止，我国自主选育的灰树花品种少之又少，尤其是适合我国工厂化栽培的灰树花品种几乎没有，这极大的限制了它的发展。
[0003]在工厂化条件下，灰树花是一种对通气和湿度条件极为敏感的食用菌。现有一些品种均不能很好的适应工厂化条件，出现吐黄水、污染、原基发生率低、开片不充分等严重影响生产的问题。选育灰树花新品种成为当务之需，但是新品种选育产生的后代菌株一般数量在200以上，目前主要在栽培袋中进行多轮筛选，第一轮小试初筛将菌株数量筛至40个左右，第二轮小试复筛筛至10-20个，第三轮中试筛至两三个并进行下一轮示范栽培。每轮筛选都需要制作栽培袋，特别是小试初筛，因为后代菌株数量大，良莠不齐，且一般自交/杂交后代中优良菌株比例较小，而栽培袋制作工作量大且菇房运行成本高，需要有便捷的菌种初筛方法使得优良菌株被快速筛选出。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于提供一种灰树花优质菌株的初筛方法，该方法的具体步骤如下:
[0005](I)灰树花菌种接种于培养管/瓶中，培养8-12天后，观察菌丝吃料情况及有无杂菌污染，菌丝进入快速吃料阶段后每隔10天划线；
[0006](2)菌丝发满并后熟后可自主发生原基，观察原基形成及发生率，同时观察培养料表面黄水及霉菌的发生，鉴定每个菌株的抗杂菌能力，挑选菌丝浓白致密，长势好，原基形成率高，形成时间一致，不吐黄水，不染杂菌的，即得到初筛的菌株。
[0007]用本发明的灰树花优质菌株的初筛方法，初筛得到的菌株，可以进入下一轮菌包栽培实验，进一步观察其子实体发生及稳定性。在之后的多轮栽培试验后，选育出原基发生率高、发生时间整齐、出菇率高、生物学转化效率高的优质菌株。
[0008]品种选育时育种后代的菌株一般数量在200以上，全部采用菌包筛选的方法的话工作量相当繁重，而采用本发明的初筛方法后，工作量大幅度减少，装料，接种，培养，鉴定菌株原基发生前的相关性状等都只需在实验室中完成即可，而抗逆性强、原基形成整齐一致且形成率高一般都是优良菌株的表现，后期菇房条件控制得当的话都可以发育成成熟子实体，所以本方法是筛选育种后代优良与否的便捷途径。
[0009]本发明提供的优质菌株的初筛方法，具有如下优点⑴本方法中各步骤在实验室条件下即可完成，节省了以往菌种初筛时大量菌包的制作、接种、观察等工作量，在早期筛选中大幅度剔除劣质菌种，为后期筛选缩小范围；⑵本方法在实验室条件下诱导原基形成，在达到筛选目的的前提下节省了菇房运行成本本方法筛选出的菌株原基形成率高，形成时间一致，抗逆性高，这些是优良菌株的必备优点；⑷本方法与菇房条件下筛选菌种相比，环境因素的影响较小，获得的结果更稳定可靠，提高了优良菌株的获得率。
【具体实施方式】；
[0010]本发明的一种灰树花优质菌株的筛选方法，具体包括如下步骤:
[0011]⑴培养基制备
[0012]培养基制备时原料配比为:木屑35%，棉籽壳35%，麸皮23%，玉米粉5%，红糖1%，石膏1%，棉籽壳、麸皮、玉米粉要求干燥无霉变。需要用到的材料有30_X 200mm的玻璃试管(或250ml三角瓶)，牛皮纸，透气封口膜，橡皮筋。将所有培养基原料用拌料机搅拌约30min直至均匀，红糖事先用水溶化后加入运行中的拌料机，最终培养料含水量要求为62%-65%，手动装管或装瓶，每管装湿料约55g (每瓶IIOg左右)，料面距离管口 4cm以上，在料中心位置打深度2cm孔，将试管和三角瓶内外洗干净后浙掉多余水分，管口(或瓶口)套一层牛皮纸，一层透气封口膜，用牛皮筋扎口，放置在灭菌筐中准备灭菌。
[0013]⑵高压灭菌
[0014]装料完成后立即采用自动灭菌锅进行高压灭菌，121°C维持2h，灭菌结束后将试管置于室温进行冷却。
[0015]⑶接种
[0016]试管(或三角瓶)表面温度低于25°C时即可接种，在接种前要充分做好准备工作，接种室要彻底清扫干净，将酒精灯，接种钩，酒精棉球，打火机等放入接种室后，放有料管(或三角瓶)的整个房间进行紫外消毒，进入前将试管种用酒精棉擦洗消毒，接种人员必须配戴专用工作服，口罩，帽子后方可进入接种室，进入后采用一组双人制操作，一人负责将PDA试管中的菌丝在酒精灯旁挑出，一人负责将料管(或三角瓶)的盖子打开，菌种接入后盖好盖子，扎好橡皮筋并贴好标签。每支PDA试管接种两支料管(或三角瓶)。接种时料管口暴露的时间越短越好。每个菌株接种5支以上料管(或三角瓶)。
[0017](4)培养
[0018]用于培养的房间事先经过彻底清扫以及严格的消毒，灰树花料管(或三角瓶)放入后，控制温度为23-24°C，相对湿度为60%-70%，CO2浓度为1000-2000ppm，适当的通风。培养约IOd后，料面布满白色菌丝，此时可检查一次看有无杂菌污染。待菌丝向下延伸进入快速吃料阶段后，每IOd在试管上菌丝生长的位置划一次线，待三次后后用尺子测量菌丝生长速度，求平均值。在此过程中，可观察菌丝形态，疏密度等。
[0019](5)原基形成
[0020]菌丝发满菌并后熟后可自主发生原基，原基形成期培养房条件设置为温度22°C ±1°C，湿度70%以上，CO2浓度为1000-2000ppm，适当的通风量，间或光照。仔细观察不同菌株原基形成的时间，形成率，同一菌株原基形成率，形成一致度等性状。在原基形成的后期观察黄水的发生，霉菌的发生，鉴定每个菌株的抗杂菌能力。
[0021]通过初筛获得的优良菌株需具备的特点是:菌丝浓白致密，长势好，原基形成率高，形成时间一致，不吐黄水，不染杂菌。
[0022]实施例一:
[0023]以来源于浙江庆元的灰树花主栽品种151为例，通过多孢自交的方法获得260个自交后代。将培养料装管，经灭菌冷却后，在超净台内进行接种，每个菌株接种5支料管。在温度23°C，相对湿度为70%，CO2浓度为1500ppm，适当通风量的条件下，培养IOd菌丝封好料面，之后每隔IOd划线，测量。约45d后，料面菌丝陆续扭结成为原基，每日记录各个菌株的原基形成数，黄水发生，霉菌发生，待不再形成原基时，记录每个菌株的原基发生率，发生时间一致与否，黄水发生率，霉菌发生率以及发生时间，在260个菌株中，有207个菌丝较为浓白致密，有172个可以发生原基，其中原基发生时有黄水的56个，伴有霉菌的73个，黄水和霉菌都有的38个，在可以发生原基的菌株中，5支料管中有三支以上有原基的74个，其中无黄水无杂菌的55个，从中挑选出40个菌丝生长强壮，原基形成4管以上，发生时间一致，不吐黄水，不染杂菌的菌株。
[0024]将上述初筛得到的菌株进入下一轮菌包栽培实验，17cmX33cm的聚丙烯塑料袋装湿料900g，高压灭菌后接种，温度23-24°C，相对湿度为60%-70%培养，菌丝发满后后熟10d，在菌丝浓密处割口，在温度22°C，相对湿度为98%的条件下刺激原基形成，约8d后原基形成、随后转入出菇管理，菇房条件温度18-20°C，相对湿度95%左右，C02浓度500-800ppm，通风量30%-40%，风速40%-50%，室内日光灯开。进一步观察记录其子实体发生及稳定性。在之后的多轮栽培试验后，选育出的沪灰一号菌株已保藏在农业微生物中心上海食用菌分中心，原基发生率100%，发生时间整齐，之后出菇率95%以上，生物学转化效率42%。
[0025]实施例二:
[0026]以来源于浙江庆元的灰树花菌株灰M良为例，通过多孢自交的方法获得200个自交后代。将培养料装管，经灭菌冷却后，在超净台内进行接种，每个菌株接种5支料管。在温度23°C，相对湿度为70%，CO2浓度为1500ppm，适当通风量的条件下，培养IOd菌丝封好料面，之后每隔IOd划线，测量。约48d后，料面菌丝陆续扭结成为原基，每日记录各个菌株的原基形成数，黄水发生，霉菌发生，待不再形成原基时，记录每个菌株的原基发生率，发生时间一致与否，黄水发生率，霉菌发生率以及发生时间，在200个菌株中，有164个菌丝较为浓白致密，有130个可以发生原基，其中原基发生时有黄水的39个，伴有霉菌的50个，黄水和霉菌都有的30个，在可以发生原基的菌株中，5支料管中有三支以上有原基的65个，其中无黄水无杂菌的43个，从中挑选出35个菌丝生长强壮，原基形成4管以上，发生时间一致，不吐黄水，抗杂菌能力好的菌株进入下一轮菌包栽培实验，进一步观察其子实体发生及稳定性。之后筛选出的良SC-2菌株表现良好，原基发生率98%，发生时间整齐，之后出菇率93%以上，生物学转化效率41%，已保藏在农业微生物中心上海食用菌分中心。
【权利要求】
1.一种灰树花优质菌株的初筛方法，其特征在于该方法包括如下步骤: (1)灰树花菌种接种于培养管/瓶中，培养8-12天后，观察菌丝吃料情况及有无杂菌污染，菌丝进入快速吃料阶段后每隔10天划线； (2)菌丝发满并后熟后可自主发生原基，观察原基形成及发生率，同时观察培养料表面黄水及霉菌的发生，鉴定每个菌株的抗杂菌能力，挑选菌丝浓白致密，长势好，原基形成率高，形成时间一致， 不吐黄水，不染杂菌的，即得到初筛的菌株。
【文档编号】A01G1/04GK103461006SQ201310451231
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月27日 优先权日:2013年9月27日
【发明者】张美彦, 尚晓冬, 王瑞娟, 周峰, 于海龙 申请人:上海市农业科学院