一种富硒猴头菌菌丝体液体发酵的生产方法
【专利摘要】本发明涉及一种富硒猴头菌菌丝体液体发酵的生产方法。利用本发明生产的猴头菌菌丝体在生长过程中可以有效吸收硒元素，成为富硒猴头菌菌丝体。富硒猴头菌菌丝体既含有多糖、生物碱等活性物质，同时，也含有微量的硒元素。所以，它在食品、药品、保健品的添加剂开发与应用方面，具有广阔的前景。而且，获得的富硒猴头菌菌丝体粉末具有清香的香味，因此，它是一种理想的绿色食品添加剂的候选香料物质。
【专利说明】一种富砸猴头菌菌丝体液体发酵的生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种富硒猴头菌菌丝体液体发酵的生产方法，属于微生物发酵工程【技术领域】。
【背景技术】
[0002]糖类在生物体内的功能不仅仅局限于提供能量和参与细胞、组织的结构组成，同时，它还具有多种多样的生物学活性，在生物体的生命活动中参与了细胞的各种代谢调节活动。依据分子的组成结构，糖类可以分为单糖、二糖、多糖和多糖衍生物。其中，多糖分子的生物活性已经使其成为了人们关注的一个热点，目前，从各种生物材料中提取具有一定生物活性的新的多糖成分的研究十分活跃，从而使对多糖类物质的研究有了十分快速的发展。多糖一般指聚合度超过10以上的多聚糖类分子，其分子量通常在几万至几百万之间。多糖及其糖类复合分子具有极其重要的生物学功能，它与免疫功能的调节，细胞与细胞的识别，细胞间物质的运输，癌症的诊断与治疗等都有着密切的关系。
[0003]构成生命体的最基本物质之一的多糖分子，以多种多样的结构形式存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中，并且，发挥着重要的生理功能。随着对多糖物质的生物活性的深入研究，多糖物质以其无毒、无副作用、富含营养、辅助医疗等功能保健品的有效添加成分，被广大消费者所重视。同时，随着细胞生物学和分子生物学研究的不断深入，多糖的生物活性越来越被人们所重视，尤其是它对人体免疫系统的双向调节功能，更使它成为当前药物研究的“热点”之一。目前，活性多糖的研究对象主要包括植物类、动物类、真菌类、细菌类、地衣类、藻类、花粉类多糖等等，研究方法涉及各种化学方法以及仪器分析方法，研究范围涉及多糖的分离纯化、理化性质、结构分析、免疫学、毒理学、药效学以及医学临床治疗 应用等，可以说是针对多糖物质的研究已经达到了种类繁多、研究深入、应用广泛的程度。开展多糖资源的开发、多糖分子结构的分析、多糖药理作用等方面的研究，对于进一步丰富多糖物质的物种资源、探索多糖分子的生物学活性都具有十分重要的意义，因而，多糖的研究已经成为分子生物学、药剂学等领域中的热点研究内容之一。
[0004]此外，关于富硒产品的开发，目前在食品、药品、保健品方面也是一个热点科研方向。硒元素是人体多种酶的活性中心，它也是人体必需的多种微量元素之一。多项研究结果表明，硒的氨基酸化合物在人体的生命活动中能够起到抵御疾病、对抗衰老、增强人体免疫功能的作用。例如，硒元素是谷胱甘肽过氧化物酶家族和硫氧还蛋白还原酶家族的活性中心，由谷胱甘肽过氧化物酶家族和硫氧还蛋白还原酶家族与硒元素结合之后，具有较强的清除氧自由基、防止脂膜过氧化的功能，是机体抗氧化体系的重要组成部分。此外，硒元素对于机体的细胞免疫和体液免疫能力的维持具有一定的支撑作用，硒元素具有保护胸腺、维持机体淋巴细胞的活性以及刺激抗体产生的作用，从而实现了增强机体免疫能力的功能。
[0005]猴头菌属于担子菌门、猴头菌科，是著名的药食两用真菌，其营养丰富，有“山珍猴头、海味燕窝”的美称。一般认为，猴头菌的主要活性物质为多糖、多肽和脂肪族酰类物质，其中猴头多糖一直是研究的热点。目前，研究较多的是猴头菌的子实体一猴头菇的营养价值与生物活性，对于猴头菌菌丝体的相关研究较少。因此，在具有多种生物活性的猴头菌菌丝体多糖分子中添加硒元素，既能够发挥多糖类物质的生物活性，同时也可以发挥硒的微量元素的调节功能。所以，在食品、药品、保健品方面开发与加工富硒猴头菌菌丝体相关产品，具有广阔的应用前景。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种富硒猴头菌菌丝体的液体发酵的生产方法。
[0007]上述富硒猴头菌菌丝体的液体发酵生产方法，包括如下步骤:
[0008](I)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为
5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至lOOOmL、pH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C _28°C培养箱中静置培养96小时-144小时,获得活化后的猴头菌菌种；
[0009](2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每IL猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜进行分口之后，置于25°C -28°C培养箱中静置培养15天-20天，获得猴头菌液体初级发酵产物；
[0010](3)猴头菌的液体 大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块,在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亚硒酸钠 0.25g，加蒸馏水至 1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在25°C -28°C培养箱中静置培养15天-20天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；
[0011](4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；
[0012](5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。
[0013]本发明的优点:
[0014]本发明涉及一种富硒猴头菌菌丝体的液体发酵生产方法。由该方法生产获得的富硒猴头菌菌丝体可以进行富硒猴头菌菌丝体多糖类生物活性物质的提取，这种富硒猴头菌丝体多糖即可以充分发挥猴头多糖的生物活性作用，又可以发挥硒元素的微量元素调节功能，因此，它可以成为保健品微量添加剂的主要成分。同时，获得的富硒猴头菌菌丝体粉末具有清香的香味，因此，它也是一种理想的食品添加剂的候选香料物质。
【具体实施方式】
[0015]下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的描述。
[0016]实施例1
[0017]一种富硒猴头菌菌丝体的低温、短时液体发酵的生产方法。
[0018](I)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为
5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至lOOOmL、pH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C培养箱中静置培养120小时，获得活化后的猴头菌菌种；
[0019](2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每IL猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜进行分口之后，置于25°C培养箱中静置培养15天，获得猴头菌液体初级发酵产物；
[0020](3)猴头菌的液体大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁`净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块,在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亚硒酸钠 0.25g，加蒸馏水至 1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在25°C培养箱中静置培养15天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；
[0021](4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；
[0022](5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。
[0023]在液体发酵温度为25°C、发酵时间为15天的培养条件下，每IL液体大规模发酵培养基最终可以收集到富硒猴头菌液体发酵菌丝体粉末7.8g。
[0024]实施例2 —种富硒猴头菌菌丝体的高温、短时天液体发酵的生产方法。
[0025](I)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至lOOOmL、pH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C培养箱中静置培养120小时，获得活化后的猴头菌菌种；
[0026](2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每IL猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜进行分口之后，置于28°C培养箱中静置培养15天，获得猴头菌液体初级发酵产物；
[0027](3)猴头菌的液体大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块,在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亚硒酸钠 0.25g，加蒸馏水至 1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在28°C培养箱中静置培养15天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；
[0028](4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；
[0029](5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。
[0030]在液体发酵温度为28°C、发酵时间为15天的培养条件下，每IL液体大规模发酵培养基最终可以收集到富硒猴头菌液体发酵菌丝体粉末9.lg。
[0031]实施例3 —种富硒猴头菌菌丝体的低温、长时天液体发酵的生产方法。
[0032](I)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为
5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至lOOOmL、pH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C培养箱中静置培养120小时，获得活化后的猴头菌菌种；
[0033](2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每IL猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜进行分口之后，置于25°C培养箱中静置培养20天，获得猴头菌液体初级发酵产物；
[0034](3)猴头菌的液体大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块,在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亚硒酸钠 0.25g，加蒸馏水至 1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在25°C培养箱中静置培养20天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；
[0035](4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；
[0036](5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。
[0037]在液体发酵温度为25°C、发酵时间为20天的培养条件下，每IL液体大规模发酵培养基最终可以收集到富硒猴头菌液体发酵菌丝体粉末10.2g。
[0038]实施例4 一种富 硒猴头菌菌丝体的高温、长时液体发酵的生产方法。
[0039](I)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为
5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至lOOOmL、pH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C培养箱中静置培养120小时，获得活化后的猴头菌菌种；
[0040](2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每IL猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，迅速利用封口膜进行分口之后，置于28°C培养箱中静置培养20天，获得猴头菌液体初级发酵产物；
[0041](3)猴头菌的液体大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块,在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨 0.4g、酵母膏 0.6g、KH2P042g、MgS04.7Η201.5g、亚硒酸钠 0.25g，加蒸馏水至 1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在28°C培养箱中静置培养20天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物；[0042](4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体；
[0043](5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。 [0044]在液体发酵温度为28°C、发酵时间为20天的培养条件下，每IL液体大规模发酵培养基最终可以收集到富硒猴头菌液体发酵菌丝体粉末11.5g。
【权利要求】
1.一种富硒猴头菌菌丝体液体大规模发酵的培养基，其特征在于，按质量体积比为:每升液体培养基含葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亚硒酸钠0.25g，加蒸馏水至1L，分装之后灭菌使用。
2.一种富硒猴头菌菌丝体液体发酵的生产方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)猴头菌菌种的活化:将购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心的编号为5.0058猴头菌菌种，保存在-80°C低温冰箱中，进行液体发酵生产菌丝体之前，需要进行菌种活化，主要是利用成分为去皮马铃薯200.0g、葡萄糖20g、加蒸馏水至1000mUpH值自然的PDA固体试管培养基在无菌操作台中进行接种，之后在25°C _28°C培养箱中静置培养96小时-144小时，获得活化后的猴头菌菌种； (2)猴头菌的液体初级发酵:将步骤(1)中的活化后的猴头菌菌种，在超净工作台中转接于液体初级发酵培养基中，进行猴头菌的液体初级发酵培养，其中，每升猴头菌液体初级发酵培养基含有葡萄糖20g、蛋白胨0.3g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，转接过程主要是利用接种环在无菌条件下从装有活化后的猴头菌的试管中，挑取一环猴头菌，接种于装有50mL液体初级发酵培养基的500mL三角瓶中，利用封口膜进行分口之后，置于25°C _28°C培养箱中静置培养15天-20天，获得猴头菌液体初级发酵产物； (3)猴头菌的液体大规模发酵；将步骤(2)获得的猴头菌液体初级发酵产物，在无菌条件下从三角瓶中取出，置于洁净的大型号培养皿中，利用经过灭菌处理的手术刀将其截成大约IcmX Icm的菌膜块，在无菌条件下将一个菌膜块转接于一个装有IOOmL猴头菌液体大规模发酵培养基的IL三角瓶中，其中，IL猴头菌液体大规模发酵培养基含有葡萄糖25g、蛋白胨0.4g、酵母膏0.6g、KH2P042g、MgSO4.7H201.5g、亚硒酸钠0.25g，加蒸馏水至1L，之后分装灭菌使用，三角瓶封口之后在25°C _28°C培养箱中静置培养15天-20天，获得富硒猴头菌液体大规模发酵产物； (4)猴头菌液体大规模发酵菌丝片的`收集:将步骤(3)获得的富硒猴头菌液体大规模发酵产物，在无菌条件下利用8层纱布进行过滤处理，收集发酵产物中的菌丝片，之后，利用蒸馏水清洗3-5次，最后一次清洗之后利用8层纱布过滤处理菌丝片，并且尽可能多的除掉水分，然后，将猴头菌菌丝片置于35°C _40°C干燥培养箱中进行干燥处理24小时-48小时，获得干燥处理后的猴头菌菌丝体； (5)猴头菌液体发酵菌丝体的粉碎:将步骤(4)获得的干燥处理后的猴头菌菌丝体，利用洁净的研钵进行研磨处理，研磨到成为较细的粉末状为止，获得富硒猴头菌液体发酵菌丝体的粉末。
【文档编号】C05G1/00GK103755417SQ201310732795
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2013年12月27日
【发明者】杜志强, 任大明 申请人:内蒙古科技大学