一种组织培养澳洲兰豆的方法
【专利摘要】本发明涉及一种组织培养澳洲兰豆的方法，通过无菌处理、分化增殖、不定芽壮苗、生根培养、炼苗移栽等步骤，利用芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基进行分步组织培养澳洲兰豆。与现有技术相比，本发明通过选择适合的培养基对澳洲兰豆进行分步组织培养，从而提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，另外移栽成活率可以达到85％。
【专利说明】—种组织培养澳洲兰豆的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物组织培养方法，尤其是涉及一种组织培养澳洲兰豆的方法。【背景技术】
[0002]澳洲蓝豆是豆科赝靛属多年生宿根花卉植物。原产澳洲，常生于林缘。茎直立，高约50-100cm左右，成丛状。羽状复叶，互生、总状花序生于茎顶，
[0003]花冠蝶形，蓝色。花期4-5月。果实椭圆形或长圆形；种子棕黄色，肾形。可以露天宿根越冬。开春从基部萌发强壮新枝。喜冷凉，排水良好，通风，阳光充足的地方，忌闷热潮湿环境。澳洲蓝豆比较怕阴暗湿热环境，栽培的环境一定要通风，向阳。可大面积片植做地被，也可丛植或配置于花境中，也是小庭院美化的优良材料。从国外引进的新品种，引种数量较少，其分株慢，市场需求量大，种苗供应受限制。因此需要开发组培技术以提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，但是如何选择组织培养基、组培的条件如何是需要亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种进行分步组织培养、提高成活率、保证母本性状的组织培养澳洲兰豆的方法。
[0005]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
[0006]一种组织培养澳洲兰豆的方法，采用以下步骤:
[0007](I)无菌处理
[0008]摘取澳洲蓝豆植株刚萌发的顶芽,用水冲洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用无菌水冲洗5_6次,无菌滤纸吸干表面水份,芽段切成Icm接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24_26°C,光照为70-90 μ mol/ms,进行芽诱导培养；
[0009](2)分化增殖
[0010]接种于芽诱导培养基上的芽段在培养4周后可见愈伤组织，再培养I个月后将带芽愈伤组织接种于增殖培养基上，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms,进行分化增殖培养；
[0011](3)不定芽壮苗
[0012]在增殖培养基上诱导出丛生的不定芽，将不定芽分成小丛或单芽置于壮苗培养基中，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90ymol/ms，进行壮苗培养，30天长到2_3cm ;
[0013]⑷生根培养
[0014]将壮苗培养基中的不定芽转接入生根培养基中诱导生根，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2_3em ；
[0015](5)炼苗移栽
[0016]生根培养40天根系长至l-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后即可移栽室外，给予肥水管理即可。
[0017]芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L 或 MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
[0018]作为优选的实施方式，芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
[0019]增殖培养基的营养成分为MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L,MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L 或 MS+6-BA3mg/L+NAA(X 3mg/L。
[0020]作为优选的实施方式，增殖培养基的营养成分为MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0021]壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L 或 MS+6_BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0022]作为优选的实施方式，壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
[0023]生根培养基的营养成分为MS+NAA0.05mg/L、MS+NAA0.lmg/L 或 MS+NAA0.2mg/L。
[0024]作为优选的实施方式，生根培养基的营养成分为MS+NAA0.lmg/L。
[0025]所述的芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，上述培养基的pH值控制在5.8。
[0026]与现有技术相比，本发明通过选择适合的培养基对澳洲兰豆进行分步组织培养，从而提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，另外移栽成活率可以达到 85%。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0028]实施例1
[0029]一种组织培养澳洲兰豆的方法，采用以下步骤:
[0030](1)无菌处理
[0031]摘取澳洲蓝豆植株刚萌发的顶芽,用水冲洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用无菌水冲洗5-6次,无菌滤纸吸干表面水份,芽段切成Iem接种于芽诱导培养基上，芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L,还包括鹿糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为24°C，光照为70 μ mol/ms,进行芽诱导培养；
[0032](2)分化增殖
[0033]接种于芽诱导培养基上的芽段在培养4周后可见愈伤组织，再培养I个月后将带芽愈伤组织接种于增殖培养基上，增殖培养基的营养成分为MS+6-BAlmg/L-+NAA0.1mg/L，还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为240C，光照为70 μ mol/ms，进行分化增殖培养；
[0034](3)不定芽壮苗
[0035]在增殖培养基上诱导出丛生的不定芽，将不定芽分成小丛或单芽置于壮苗培养基中，壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L，还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的PH值为5.8，控制培养温度为24°C，光照为70 μ mol/ms，进行壮苗培养，30天长到2-3cm;
[0036](4)生根培养[0037]将壮苗培养基中的不定芽转接入生根培养基中诱导生根，生根培养基的营养成分为MS+NAA0.05mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为24°C，光照为70μπιΟ1/πι8，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2-3cm ；
[0038](5)炼苗移栽
[0039]生根培养40天根系长至l-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后即可移栽室外，给予肥水管理即可。
[0040]实施例2
[0041]一种组织培养澳洲兰豆的方法，采用以下步骤:
[0042](I)无菌处理
[0043]摘取澳洲蓝豆植株刚萌发的顶芽,用水冲洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用无菌水冲洗5次,无菌滤纸吸干表面水份,芽段切成Icm接种于芽诱导培养基上，芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为25°C，光照为80 μ mol/ms,进行芽诱导培养；
[0044](2)分化增殖
[0045]接种于芽诱导培养基上的芽段在培养4周后可见愈伤组织，再培养I个月后将带芽愈伤组织接种于增殖培养基上，增殖培养基的营养成分为MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为25°C，光照为80 μ mol/ms，进行分化增殖培养；
[0046](3)不定芽壮苗
[0047]在增殖培养基上诱导出丛生的不定芽，将不定芽分成小丛或单芽置于壮苗培养基中，壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L，还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的PH值为5.8，控制培养温度为25°C，光照为80 μ mol/ms，进行壮苗培养，30天长到2-3cm;
[0048](4)生根培养
[0049]将壮苗培养基中的不定芽转接入生根培养基中诱导生根，生根培养基的营养成分为MS+NAA0.lmg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为25°C，光照为80 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2-3cm ；
[0050](5)炼苗移栽
[0051]生根培养40天根系长至l-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后即可移栽室外，给予肥水管理即可。
[0052]实施例3
[0053]一种组织培养澳洲兰豆的方法，采用以下步骤:
[0054](I)无菌处理
[0055]摘取澳洲蓝豆植株刚萌发的顶芽,用水冲洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用无菌水冲洗6次,无菌滤纸吸干表面水份,芽段切成Icm接种于芽诱导培养基上，芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L,还包括鹿糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为26°C，光照为90 μ mol/ms,进行芽诱导培养；
[0056](2)分化增殖
[0057]接种于芽诱导培养基上的芽段在培养4周后可见愈伤组织，再培养I个月后将带芽愈伤组织接种于增殖培养基上，增殖培养基的营养成分为MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为26°C，光照为90 μ mol/ms，进行分化增殖培养；
[0058](3)不定芽壮苗
[0059]在增殖培养基上诱导出丛生的不定芽，将不定芽分成小丛或单芽置于壮苗培养基中，壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的PH值为5.8，控制培养温度为26°C，光照为90 μ mol/ms，进行壮苗培养，30天长到2-3cm;
[0060](4)生根培养
[0061]将壮苗培养基中的不定芽转接入生根培养基中诱导生根，生根培养基的营养成分为MS+NAA0.2mg/L,还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，培养基的pH值为5.8，控制培养温度为26°C，光照为90 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2_3cm:
[0062](5)炼苗移栽
[0063]生根培养40天根系长至l-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后即可移栽室外，给予肥水管理即可。
【权利要求】
1.一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，该方法采用以下步骤: (1)无菌处理 摘取澳洲蓝豆植株刚萌发的顶芽，用水冲洗2h，用75v/v%的乙醇浸泡30s，lv/v% O升汞浸泡15min，再用无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，芽段切成Icm接种于芽诱导培养基上，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms，进行芽诱导培养； (2)分化增殖 接种于芽诱导培养基上的芽段在培养4周后可见愈伤组织，再培养I个月后将带芽愈伤组织接种于增殖培养基上，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms,进行分化增殖培养； (3)不定芽壮苗 在增殖培养基上诱导出丛生的不定芽，将不定芽分成小丛或单芽置于壮苗培养基中，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms，进行壮苗培养，30天长到2_3cm ； (4)生根培养 将壮苗培养基中的不定芽转接入生根培养基中诱导生根，控制培养温度为24-26°C，光照为70-90 μ mol/ms, 1 0天后幼苗基部分化出许多白色的根原基,30天后长至2_3cm ； (5)炼苗移栽 生根培养40天根系长至l-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗在室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后即可移栽室外，给予肥水管理即可。
2.根据权利要求1所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的芽诱导培养基的营养成分为 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L 或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
3.根据权利要求2所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分为 MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L、MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L 或MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
5.根据权利要求4所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分为MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
6.根据权利要求1所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L 或MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
7.根据权利要求6所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
8.根据权利要求1所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分为 MS+NAA0.05mg/L、MS+NAA0.lmg/L 或 MS+NAA0.2mg/L。
9.根据权利要求8所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分为MS+NAA0.lmg/L。
10.根据权利要求1所述的一种组织培养澳洲兰豆的方法，其特征在于，所述的芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L组成的基本成分，上 述培养基的pH值控制在5.8。
【文档编号】A01H4/00GK103749305SQ201410024961
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2014年1月20日 优先权日:2014年1月20日
【发明者】陈建华, 黄建荣, 沈勤 申请人:上海上房园艺有限公司, 上海上房园林植物研究所有限公司