一种放线菌菌株及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种放线菌菌株及其应用，属微生物农药【技术领域】。本发明的放线菌菌株为白浅灰链霉菌ND41(Streptomyces albogriseolus)。ND41菌株已于2012年7月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.6352。本发明的放线菌菌株作为制备用于防治根结线虫制剂的应用。用本发明的放线菌菌株制备的菌剂对番茄根结线虫病温室防效达到60%以上，对烟草根结线虫病温室防效达到40%以上。并能明显促进植物的生长。用本发明的放线菌菌株制备的防治根结线虫制剂，具有高效、低毒及无残留的优点。CGMCC No.63522012.07.12
【专利说明】一种放线菌菌株及其应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种放线菌菌株及其应用，属微生物农药【技术领域】。 技术背景：
[0002] 作物病原线虫引起的病害已成为农业生产中的第二大类病害，其中最重要的是孢 囊线虫和根结线虫，危害粮食、油料、蔬菜、水果等3000多种植物。全球每年因作物病原线 虫造成的直接经济损失高达1570亿美元。同时，线虫病又加重了枯萎病、根腐病等土传性 病害的发生，成为当前经济作物生产上的一大障碍。目前化学药剂土壤处理是防治寄生线 虫的主要措施。但是传统化学杀线虫剂多属高毒、高残留的有机磷和氨基甲酸酯类农药，对 环境污染严重，对人、畜也不安全，其中许多杀线虫剂已被陆续禁用。因此开发利用线虫天 敌,生物防治植物寄生线虫日益受到重视。
[0003] 放线菌作为一种独特的微生物资源，其丰富的代谢产物具有多种多样的活性。本 发明利用云南特有的生物资源，分离得到放线菌菌株，产生高效毒杀线虫活性代谢产物来 毒杀根结线虫，在线虫的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。
【发明内容】
：
[0004] 本发明的目的在于提供一种放线菌菌株及其应用。
[0005] 本发明具体是这样实现的：
[0006] 发明人在前期研究中，筛选获得了具有良好杀线虫功能的放线菌白浅灰链霉菌 (Streptomyces albogriseolus)ND41。ND41菌株已于2012年7月12日保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；保藏号为CGMCC No. 6352。
[0007] 白浅灰链霉菌（Streptomyces albogriseolus)是属于放线菌门 (Actinobacteria)链霉菌属（Streptomyces)的革兰氏阳性细菌，分离时菌落小，分散呈地 衣状、奶油状或皮革状，最初表面光滑，然后发育出一层短的菌丝体，呈颗粒状或绒毛状，能 产生多种色素，其营养菌丝体、气生菌丝体和基质因此常具有颜色。
[0008] 本发明的白浅灰链霉菌ND41菌株作为制备用于防治根结线虫制剂的应用。
[0009] 本发明将白浅灰链霉菌ND41通过常规的液体体培养，获得包括菌体和胞外分泌 物的菌液，穴施使用。
[0010] 本放线菌剂能与其他的杀线虫农药、植物生长调节剂混合使用，但必须保证所混 合药剂对本发明采用的菌剂无副作用。
[0011] 本发明的放线菌剂一般在作物播种或移栽时施用。方法是播种时与种子共同施入 土壤中，移栽时将本制剂施入作物根际周围。对线虫发生严重地区要在作物生长过程中追 施一次，方法是将本制剂施入作物根际周围。
[0012] 本发明与现有的杀植物寄生线虫药相比，具有高效、低毒以及无残留的优点。
【具体实施方式】：
[0013] 本发明菌剂的发酵生产方法(常规方法）：
[0014] 1、液体种子培养：高氏一号液体培养基分装到500ml三角瓶中，常规灭菌，再于超 净工作台上用接种针从试管斜面上挑取一些菌丝接种于其中，然后22-28°C，150-180rpm/ min于摇床上培养5-8天备用。
[0015] 2、将摇好的种子按10-20%的接种量接种到发酵罐中，控制温度在22-28°C，培养 2-3 天。
[0016] 3、将发酵好的菌液用两层滤纸过滤，上XAD-16大孔树脂柱，截留没有被吸附的部 分，备用。
[0017] 4、将上述发酵液用分子超滤系统截留分子量（MwCO)在8000?10000的部分，按 体积稀释10-100倍后使用。
[0018] 本发明制剂对根结线虫的防效试验：
[0019] 1、南方根结线虫（Meloidogyne incognita)的培养
[0020] 将温室培养的带有南方根结线虫的番茄根用无菌水洗净，解剖针挑取根结线虫的 卵囊置于0. 4M的KCl溶液中，在5ml离心管中依次用4ml无菌水(三次)、Iml无菌青-链霉 素双抗溶液、3ml0. 1%的NaClO溶液洗涤和消毒，每一步骤均通过短暂离心（8000转30秒） 除去上清液。洗涤好的虫卵置于0. 4M的ZnCl2溶液中孵化48小时，二龄幼虫用移液器收 集于I. 5ml离心管，通过短暂离心（5000转30秒）富集备用。
[0021] 2、防效试验方法
[0022] ( 1)试验所用药剂及处理
[0023] A、液体菌剂，在作物移栽时一次性施于作物根际；
[0024] B、阳性对照，0. 5%阿维菌素按37. 5kg/hm2处理；
[0025] C、空白对照，不加菌剂或药剂处理。
[0026] (2)试验方法
[0027] 在直径为15cm的盆钵加入500g 土样（病土 ：沙土：腐殖土 =1:1:1)，做以上几个 处理。每个处理5盆且3次重复，置于25 - 28°C的温室中培养。移栽后每隔3天浇水，使 其正常生长。菌剂处理后30、60天分别调查各处理组作物根部的根结数、根际的虫卵数和 作物的株高、地上部分重以及根的湿重，计算菌剂对根结线虫病的防治效果。
[0028] 实施例1 :用菌剂防治番茄根结线虫病试验
[0029] 移栽1月龄番爺（4-6叶)，番爺品种为：中杂9号，山东农业科技开发公司生产。每 盆施用IOOml菌剂，按上述试验方法进行防效试验。列表所示为防效数据。
[0030] 表1菌剂对番茄根结线虫病的防治效果（60d)
[0031]
【权利要求】
1. 一种放线菌菌株，其特征在于该放线菌菌株为白浅灰链霉菌ND41 (Streptomyces albogriseolus)，保藏号为 CGMCC No. 6352。
2. 权利要求1所述的白浅灰链霉菌ND41 (Streptomyces albogriseolus)菌株在制备 用于防治根结线虫制剂中的应用。
【文档编号】A01P5/00GK104277993SQ201410089691
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2014年3月12日
【发明者】刘亚君, 孔垂旭, 杨敏敏, 张克勤 申请人:云南大学