一种可替代抗生素的果壳提取物及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于农业饲料添加剂领域，公开了一种可替代抗生素的果壳提取物及其制备方法与应用。所述可替代抗生素的果壳提取物，由40～70wt％的核桃果外壳、20～50wt％的栗子果外壳及10～40wt％的茶果外壳混合提取后干燥制备而得。制备方法包括以下步骤：(1)将核桃果外壳、栗子果外壳及茶果外壳混合，加入水和酶的混合溶液进行第一次提取，过滤所得滤渣用乙醇水溶液进行第二次提取，过滤，合并得到果壳提取物滤液；(2)将果壳提取物滤液减压浓缩，干燥得到所述可替代抗生素的果壳提取物。所述果壳提取物可以替代抗生素添加在动物饲料或饮用水中，添加量为0.05～1％，用于提高畜禽的抗病能力和细菌感染性畜禽疾病的防治。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业饲料添加剂领域，具体涉及一种可替代抗生素的果壳提取物及其 制备方法与应用。 一种可替代抗生素的果壳提取物及其制备方法与应用
【背景技术】
[0002] 畜禽养殖中抗生素的滥用已成为普遍现象。大量抗生素的使用既污染了环境，也 诱导细菌耐药性产生，形成安全隐患。寻找抗生素替代物已成为当今研究的热点。
[0003] 微生物发酵制剂、中草药制剂、功能性寡糖、有机酸作为抗生素替代物在饲料中开 始应用。虽然长期使用有一定增强动物免疫功能的作用，但是其抗菌效果仍然较差，加上来 源受限，长期使用的成本较高。
[0004] 在农业经济作物中，果壳一般是废弃物，如核桃果外壳、栗子果外壳、茶果外壳 等。其重量一般是其内果实量的1?3倍，果壳废弃造成极大的资源浪费。因此充分开 发果壳中的有效成分，对于农业废弃物的资源利用具有重要意义。果壳中含有丰富的黄 酮等活性成分，但不同果壳黄酮组成有较大差异。姜天甲等报道了油茶籽壳中含有1. 7% 的总黄酮（姜天甲，应铁进，陈秋平.油茶籽壳总黄酮提取及抗氧化研究.中国食品学 报，2010, 10(1) :93-99)，但单一黄酮的抗菌效果欠佳。
[0005] 将果壳有效成分提取，获得抗菌组合物，作为抗生素替代物用于动物畜禽疾病的 防治。此方面研究未见报道。
【发明内容】
[0006] 为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种可替代抗生素 的果壳提取物；
[0007] 本发明的另一目的在于提供上述可替代抗生素的果壳提取物的制备方法；
[0008] 本发明的再一目的在于提供上述可替代抗生素的果壳提取物的应用。
[0009] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0010] 一种可替代抗生素的果壳提取物，由40?70wt%的核桃果外壳、20?50wt%的栗 子果外壳及10?40wt %的茶果外壳混合提取后干燥制备而得。
[0011] 上述可替代抗生素的果壳提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (1)将40?70wt%的核桃果外壳、20?50wt%的栗子果外壳及10?40wt%的茶 果外壳混合成果壳混合物，加入水和酶的混合溶液进行第一次提取，过滤，所得滤渣再用乙 醇水溶液进行第二次提取，过滤，合并滤液得到果壳提取物滤液；
[0013] 优选的，所述水和酶的混合溶液中水的质量为所述果壳混合物质量的10?20倍， 酶的质量为所述果壳混合物质量的〇. 5?1. 5% ;
[0014] 优选的，所述酶为纤维素酶、半纤维素酶或果胶酶中的一种；
[0015] 优选的，所述第一次提取的条件为：提取温度为35?55°C，提取时间为2?4h ;
[0016] 优选的，所述乙醇水溶液中乙醇的质量百分比为60?85% ;
[0017] 优选的，所述乙醇水溶液的质量为为所述果壳混合物质量的5?15倍；
[0018] 优选的，所述第二次提取的条件为：提取温度为60?80°C，提取时间为1?3h ;
[0019] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，进行干燥，得到所述可替代抗生素的果壳提 取物；
[0020] 优选的，所述干燥为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
[0021] 上述可替代抗生素的果壳提取物在畜禽饲养中作为抗生素替代物的应用，可用于 提高畜禽的抗病能力和防治细菌感染性畜禽疾病。
[0022] 上述可替代抗生素的果壳提取物在畜禽饲养中的应用，优选方案为：将所述可替 代抗生素的果壳提取物按〇. 05?1 %的质量分数添加到畜禽饲养的配合饲料或饮用水中。
[0023] 本发明的原理：
[0024] 本发明将核桃果外壳、栗子果外壳、茶果外壳按照一定质量比组合，进行酶和醇水 两步提取。由于果壳中纤维含量高，故先用酶法水解果壳细胞壁，将活性成分从植物细胞中 溶解出来，再用乙醇水提取，得到的果壳提取物富含不同种类水溶性和醇溶性黄酮成分，抗 菌活性强。
[0025] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0026] (1)本发明所述制备方法通过不同果壳组合提取，获得含有多种黄酮组合物的可 替代抗生素的果壳提取物，所述可替代抗生素的果壳提取物抗菌活性显著增强，适合替代 抗生素作为动物饲料添加剂。
[0027] (2)本发明所述制备方法通过酶法先将细胞中的黄酮等成分溶出，再用含水乙醇 将水溶性和醇溶性黄酮充分提取，所述可替代抗生素的果壳提取物中黄酮含量高。
[0028] (3)本发明所述制备方法适合工业化生产，将废弃果壳制备抗生素替代物，提升了 废弃资源的价值。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。 实施例中的％都为质量百分比。
[0030] 实施例1
[0031] 一种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0032] (1)取700g核桃果外壳、200g栗子果外壳、100g茶果外壳混合成果壳混合物，加入 20kg水、15g纤维素酶，采用溶剂提取法于35°C下提取4h，过滤，所得滤渣再加入5kg85%乙 醇水溶液，于60°C下提取2h，过滤，合并得到果壳提取物滤液；
[0033] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，真空干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 235g。
[0034] 实施例2
[0035] -种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0036] (1)取400g核桃果外壳、500g栗子果外壳、100g茶果外壳混合成果壳混合物， 加入15kg水、10g半纤维素酶，采用溶剂提取法于55°C下提取2h，过滤，所得滤渣再加入 10kg70%乙醇水溶液，于70°C下提取lh，过滤，合并得到果壳提取物滤液；
[0037] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，喷雾干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 175g。
[0038] 实施例3
[0039] -种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0040] (1)取400g核桃果外壳、200g栗子果外壳、400g茶果外壳混合成果壳混合物，力口 入10kg水、5g果胶酶，采用溶剂提取法于45°C下提取3h，过滤，滤渔再加入15kg60%乙醇 水溶液，于85°C下提取3h，过滤，合并得到果壳提取物滤液；
[0041] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，冷冻干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 250g。
[0042] 实施例4
[0043] 一种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0044] (1)取500g核桃果外壳、300g栗子果外壳、200g茶果外壳混合成果壳混合物，力口 入15kg水、12g果胶酶，采用溶剂提取法于40°C下提取2h，过滤，所得滤渣再加入8kg80% 乙醇水溶液，于65°C下提取2h，过滤，合并得到果壳提取物滤液
[0045] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，真空干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 197g。
[0046] 实施例5
[0047] -种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0048] (1)取450g核桃果外壳、250g栗子果外壳、300g茶果外壳混合成果壳混合物，加入 12kg水、6g纤维素酶，采用溶剂提取法于37°C下提取2h，过滤，所得滤渣再加入12kg75%乙 醇水溶液，于70°C下提取2h，过滤，合并得到果壳提取物滤液；
[0049] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，喷雾干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 210g。
[0050] 实施例6
[0051] 一种可替代抗生素的果壳提取物，其制备方法如下：
[0052] (1)取350g核桃果外壳、400g栗子果外壳、250g茶果外壳混合成果壳混合物，加入 18kg水、8g半纤维素酶，采用溶剂提取法于50°C下提取3h，过滤，所得滤渣再加入10kg70% 乙醇水溶液，于75°C下提取lh，过滤，合并得到果壳提取物滤液；
[0053] (2)将所述果壳提取物滤液减压浓缩，冷冻干燥得所述可替代抗生素的果壳提取 物 182g。
[0054] 实施例7
[0055] 对实施例1?6制得的可替代抗生素的果壳提取物中黄酮的含量进行测定。
[0056] 方法：称取芦丁标准品1001^，用60%乙醇溶解并定容至250 1^，摇匀后即得浓度 为0. 4mg/mL的标准液，放置于低温暗箱内备用。分别吸取标准液0、2、4、6、8、10、12mL于 50mL容量瓶中，用60 %乙醇添至20mL，加入5 % NaN02溶液2mL，摇匀，放置6min，再加入 10 % A1 (N03) 3溶液2mL，6min后加入4 % NaOH溶液20mL，混匀，再用60 %的乙醇定容至刻度， 摇勻，放置15min后在波长510nm处测定吸光度。以芦丁溶液浓度y(mg/mL)为横坐标，吸光 度X为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程：y = 0. 526x+0. 0047(相关系数r = 0. 9989)。
[0057] 分别称取500mg实施例1?6制得的可替代抗生素的果壳提取物样品，分别用 100mL60%乙醇溶解，为供试液。吸取供试液5mL，按上述标准曲线测定方法测定并计算样品 中的黄酮含量。
[0058] 结果：实施例1?6制得的可替代抗生素的果壳提取物样品的黄酮含量分别为 12. 5%、13. 2%、11. 5%、15. 3%、13. 7%、14. 6%。其含量显著高于文献报道的果壳提取物 中的黄酮含量。
[0059] 实施例8
[0060] 测定实施例1?6制备的可替代抗生素的果壳提取物对鸡感染沙门氏菌的治
[0061] 疗效果：
[0062] 方法：取1日龄清远麻鸡240只，随机分为8组，每组30只。分为对照组、实施例 1?6制备的可替代抗生素的果壳提取物1?6组、抗生素组。用鸡源沙门氏菌C79 - 1感 染1次（饲喂0. lmL，约108活菌），5h后给饮药水，各实施例可替代抗生素的果壳提取物在 饮水中添加量都为〇. 05%，抗生素为硫酸阿米卡星，在饮水中添加量为50mg/kg。连续喂养 30天。统计鸡死亡数，对未死亡的鸡处死后取出脾脏和胸腺，计算脾脏指数和胸腺指数。
[0063] 结果：结果如表1所示，从表1分析可知，实施例1?6制备的可替代抗生素的果 壳提取物对沙门氏菌所致鸡感染均有良好的控制作用，无死亡发生，其脾脏和胸腺指数较 对照有显著提高。说明本发明所述可替代抗生素的果壳提取物具有抗生素的治疗效果和提 高鸡免疫力的作用。
[0064] 表1.本发明可替代抗生素的果壳提取物对沙门氏菌感染鸡的测试结果
[0065]
【权利要求】
1. 一种可替代抗生素的果壳提取物，其特征在于：由40?70wt%的核桃果外壳、20? 50wt %的栗子果外壳及10?40wt %的茶果外壳混合提取后干燥制备而得。
2. -种根据权利要求1所述的可替代抗生素的果壳提取物的制备方法，其特征在于包 括以下步骤： (1) 将40?70wt%的核桃果外壳、20?50wt%的栗子果外壳及10?40wt%的茶果外 壳混合成果壳混合物，加入水和酶的混合溶液进行第一次提取，过滤，所得滤渣再用乙醇水 溶液进行第二次提取，过滤，合并滤液得到果壳提取物滤液； (2) 将所述果壳提取物滤液减压浓缩，进行干燥，得到所述可替代抗生素的果壳提取 物。
3. 根据权利要求2所述的可替代抗生素的果壳提取物的制备方法，其特征在于：步骤 (1) 所述水和酶的混合溶液中水的质量为所述果壳混合物质量的10?20倍，酶的质量为所 述果壳混合物质量的0. 5?1. 5% ;步骤（1)所述酶为纤维素酶、半纤维素酶或果胶酶中的 一种；步骤（1)所述第一次提取的条件为：提取温度为35?55°C，提取时间为2?4h ;步 骤（1)所述乙醇水溶液中乙醇的质量百分比为60?85% ;步骤（1)所述乙醇水溶液的质 量为为所述果壳混合物质量的5?15倍；步骤（1)所述第二次提取的条件为：提取温度为 60?80°C，提取时间为1?3h。
4. 根据权利要求2所述的可替代抗生素的果壳提取物的制备方法，其特征在于：步骤 (2) 所述干燥为真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
5. 根据权利要求1所述的可替代抗生素的果壳提取物在畜禽饲养中作为抗生素替代 物的应用。
6. 根据权利要求5所述的可替代抗生素的果壳提取物在畜禽饲养中作为抗生素替代 物的应用，其特征在于：将所述可替代抗生素的果壳提取物按〇. 05?1 %的质量分数添加 到畜禽饲养的配合饲料或饮用水中。
【文档编号】A23K1/17GK104054898SQ201410212288
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年5月19日 优先权日:2014年5月19日
【发明者】叶勇, 方菲 申请人:华南理工大学