专利名称：一种脂肽及其衍生物、及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其是涉及ー种提高宿主抗菌能力的脂肽及其衍生物、及其制备方法和应用。
背景技术：
自20 世纪三四十年代青霉素问世以来，人们又发现了头孢菌素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类等诸多抗生素。抗生素在治疗人类微生物感染中发挥了重要的作用。但目前微生物耐药菌株越来越多，很多抗生素对微生物感染不再起到良好的治疗作用。因此寻找抗生素替代物成为人类越来越迫在眉睫的任务。脂肽是由亲水的肽链和亲脂的脂肪酸链两部分組成，即由10个左右的多肽和脂肪酸链形成环形或线性的脂肽。脂肽类物质主要源于微生物的次级代谢产物，其表现出多种生物活性。1970年Bernheimer和Avigard就曾利用脂肽的抗虫特性将其作为杀虫剂使用(翟颖，吕爽· ー种新型脂肽的抗菌活性研究.中国城乡企业卫生.2006，4(114): 19-21)。目前，脂肽类抗生素的研究引起人们的广泛关注。达托霉素(商品名=Cubisin)是第一个用于临床的脂肽类抗菌素，于2003年获得美国FDA批准上市，用于治疗由革兰氏阳性菌引起的并发性皮肤感染和结构性皮肤感染，包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及对万古霉素抗性的粪肠球菌(VRE)，先后在美国、德国、英国和荷兰上市。目前越来越多的脂肽类抗生素被发现，已经成为国内外生物医药研究的热点。皮肤是人体对外界环境的第一道防线，在皮肤表面生存着各种各样的细菌。人们通常将人体皮肤表面的细菌分为4个种类，它们分别为葡萄球菌、链球菌、丙酸菌和棒状杆菌四类。金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属，是ー种有害菌，通常导致人体感染。金黄色葡萄球菌所引起的疾病，最常见的有三大类ー是人体化脓性感染；ニ是医院内感染，通过污染的器械用品造成伤ロ化脓感染，注射部位化脓感染，或支气管炎、肺炎等症；三是食物中毒，由肠毒素引起。表皮葡萄球菌虽然也属于葡萄球菌属，但是它是ー种皮肤共生菌，有文献报道表皮葡萄球菌的发酵液可以抑制金黄色葡萄球菌的感染(Lai Y, Cogen AL, RadekKAj et al. Activation of TLR2 by a small molecule produced by btaphyiococcusepidermidis increases antimicrobial defense against bacterial SKin infections.J Invest Dermatol，2010， 130(9):2211-2221)o
发明内容
本发明公开了ー种脂肽及其衍生物，以及其制备方法和应用。该脂肽是从表皮葡萄球菌发酵液中提取获得，可以大量诱导皮肤角质形成细胞中防御素的表达，具有良好的抑制金黄色葡萄球菌感染的效果。本发明的发明目的之ー是提供ー种脂肽，所述脂肽包括肽链和脂肪链，肽链和脂肪链通过肽键相连；其结构如式(I)所示，成线状，分子量为2848Da ；
权利要求
1.一种脂肽，其特征在于，所述脂肽包括肽链和脂肪链，肽链和脂肪链通过肽键相连；其结构如式(I)所示，成线状，分子量为2848Da ；
2.ー类脂肽衍生物，其特征在于，所述脂肽衍生物包括肽链和脂肪链，肽链和脂肪链通过肽键相连；其结构如式⑵、⑶、⑷、(5)、(6)所示之任何ー种；
3.如权利要求I所述的脂肽，其特征在于，所述脂肽提取自表皮葡萄球菌；所述表皮葡萄球菌包括皮肤共生菌表皮葡萄球菌1457或表皮葡萄球菌12228或表皮葡萄球菌RP62A。
4.如权利要求I所述脂肽的制备方法，其特征在于，将表皮葡萄球菌发酵，收集酸沉淀的表皮葡萄球菌发酵液的上清液，经甲醇抽提，得到脂肽提取物，再经HPLC纯化，得到所述脂肽。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括步骤 (1)表皮葡萄球菌发酵 于_80°C冰箱取出保存的表皮葡萄球菌1457或12228或RP62A活化后，转接于200mlTSB液体培养基中发酵，370C，220rpm, 16h ； (2)发酵液酸沉淀将表皮葡萄球菌发酵液离心；将发酵液的上清液用6M盐酸调节至pH=2. 0，4°C静置过夜； (3)甲醇抽提 将酸沉淀的表皮葡萄球菌发酵液上清离心；将沉淀置于甲醇中抽提；将抽提过夜的甲醇溶液离心，收集上清；将甲醇抽提液在旋转蒸发仪上蒸干，最后用油泵抽提，最終得到脂肽提取物；(4)HPLC 纯化 将脂肽提取物溶解后，利用分离型高压液相色谱仪Agilentl200和C18柱，以含O.1%TFA的水和O. 1%TFA的こ腈为流动相梯度洗脱，收集各个洗脱峰，通过ー级质谱鉴定各个洗脱峰物质的分子量，从而得到目的产物。
6.如权利要求2所述脂肽衍生物的制备方法，其特征在于，所述脂肪酸通过邻苯ニ甲酰丁辛酯和N-甲基吗啉接在所述肽链上，所述肽链是通过固相合成方法合成。
7.如权利要求I所述的脂肽，其特征在于，可以直接抑制痤疮丙酸杆菌的生长。
8.如权利要求I所述的脂肽或如权利要求2所述的脂肽衍生物在制备抗感染药物中的应用。
9.如权利要求I所述的脂肽或如权利要求2所述的脂肽衍生物在制备抗金黄色葡萄球菌感染的应用。
10.如权利要求I所述的脂肽或如权利要求2所述的脂肽衍生物在化妆用品、洗涤用品、保湿用品中作为添加剂的应用。
11.如权利要求8、9或10所述的应用，其特征在于，所述脂肽及其衍生物与TLR2受体结合，激活P38MAPK信号通路，诱导角质形成细胞表达防御素。
全文摘要
本发明提供一种脂肽，其包括肽链和脂肪链，肽链和脂肪链通过肽键相连，其分子量为2848Da，成线状，可以明显诱导防御素的表达，有效抑制金黄色葡萄球菌感染，从而预防或减少皮肤感染。本发明还公开了脂肽衍生物。本发明还公开所述脂肽及衍生物的制备方法及应用。
文档编号A61Q19/00GK102659932SQ20121013802
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月4日 优先权日2012年5月4日
发明者李冬青, 李红泉, 赖玉平, 雷虎 申请人:华东师范大学