用于递送核酸的脂肽的制作方法
【专利说明】用于递送核酸的脂化
[0001] 本申请是申请号为200880110140. 7,申请日为2008年10月2日，发明名称为"用 于递送核酸的脂肤"的中国专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及可用于向细胞递送各种分子的新型药物递送增强剂，该增强剂包括 脂质。本发明提供了多种化合物，组合物，制剂，最终引导药物递送的此试剂的方法和应 用，疗法，W及疾病或病症的诊断和治疗，其中包括对受试者基因表达或活性的调控作出 响应的那些疾病或病症。更具体地，本发明涉及化合物、脂质体、复层脂质体（lamellar vesicles)、乳液、胶束、息液、颗粒、溶液和其它形式的递送增强组合物和制剂，W及该些递 送物质的治疗方法和应用。
【背景技术】
[0003] 化合物到达目标细胞或组织的能力有限W及化合物在细胞内的进入或运输受限 可阻止治疗性化合物向受试者的递送。治疗性物质的递送通常受到细胞膜的制约。该些递 送障碍和制约可导致需要使用的化合物浓度远高于获得治疗结果的理想浓度，而该样会带 来毒性作用和副作用的风险。
[0004] -个递送策略是利用脂质或聚合载体分子提高化合物向细胞内的运输。该些物质 可W利用用于选择性进入细胞，并同时还排除外源分子（例如核酸和蛋白）的机制。例如， 阳离子脂质可W与药物试剂相互作用，并提供与细胞膜的接触。脂质分子也可W被组装成 脂质体或颗粒，作为药物试剂的载体。脂质药物载体可W保护药物分子免于降解，并同时提 高细胞对药物的摄取。另外，脂质药物载体还可W通过静电或其它相互作用而封装或结合 某些化合物，并且与带负电荷的细胞膜相互作用，从而启动跨膜运输。
[0005] 对调控RNA的了解W及RNA干扰（RNAi)、RNAi治疗、基于RNA的药物、反义治疗和 基因治疗等的发展提高了对向细胞内引入活性核酸试剂的有效方式的需求。通常，核酸在 细胞或血浆内仅稳定存在有限的时间。然而，可W使基于核酸的试剂在组合物和制剂中获 得稳定，然后分散W用于细胞递送。
[0006] 需要的是保持细胞保护作用和较低毒性的组合物和制剂，是它们用于细胞内和体 内递送最终用作治疗剂的核酸试剂。另外，还需要向细胞递送双链RNA的组合物和方法，从 而产生RNA干扰应答。另外，还需要向所选择的细胞、组织或腔室递送干扰RNA的组合物和 方法，从而W改变表型或疾病状态的方式调苄基因表达。
【发明内容】
[0007] 通过提供利用干扰核酸或其前体与包括脂肤、脂质和天然或合成聚合物在内的多 种组分所组合的大量新型化合物、组合物、制剂和方法，本发明可W满足该些需要并实现了 其它目的和优点。
[0008] 在一些实施方式中，本发明包括具有2-100个氨基酸残基的肤和与所述肤的至少 一个末端或至少一个氨基酸残基相连的亲脂基团，其盐及其应用。所述亲脂基团可w与所 述肤的N-末端、C-末端或两端相连。所述亲脂基团可W与至少一个内部氨基酸残基（即， 既不是所述肤的N-末端，也不是C-末端氨基酸残基的氨基酸残基）相连。所述亲脂基团 可W与任一末端或两端W及至少一个内部氨基酸残基相连。
[0009] W上简述与本发明的详述W及所附实施例和权利要求书作为一个整体，包含了本 发明的内容。
【具体实施方式】
[0010] 本发明主要涉及RNA干扰、RNA治疗剂的递送W及脂质化学的领域。更具体地，本 发明涉及用于核糖核酸的组合物和制剂，W及其作为治疗剂用于药物和用于递送的应用。 本发明主要涉及利用核糖核酸进行RNA干扰，从而基因特异性地抑制哺乳动物基因表达的 方法。
[0011] 本发明提供了包含干扰核酸或其前体与多种组分所组合的多种组合物、制剂和方 法，其中，所述多种组分包括脂肤、脂质、类脂部分和天然或合成聚合物。
[0012] 在一些方面，本发明提供了促进向细胞、组织、器官和活体动物（例如哺乳动物和 人）递送包括RNAi诱导试剂、反义RNA试剂或DNA在内的核酸的新型组合物。
[001引皿
[0014] 本发明提供了用于递送和施用干扰-RNA试剂或反义RNA的多种脂肤。所述脂肤 可W为阳离子或非阳离子。本文使用的非阳离子包括中性和阴离子。阳离子脂肤可W具有 一个或多个阳离子位点。
[0015] 可W通过在肤的N-末端或C-末端或所述肤的两端取代核酸递送增强基团或类脂 基团，形成本发明的脂肤。在一些方面，所述核酸递送基团或类脂基团可W连接到所述肤 的一个或多个氨基酸残基的a -碳，或者连接到分别与所述肤的氨基酸残基a-碳相邻的 一个或多个氨基基团，或者是连接到所述肤的N-末端、C-末端、一个或多个氨基酸残基的 a -碳的该些连接方式的组合，或者连接到分别与所述肤的氨基酸残基a -碳相邻的一个 或多个氨基基团。在一些实施方式中，所述核也结构肤可W包含两个或更多个连续氨基酸， 或有 2-100 个氨基酸残基（或者 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、 46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、 96、97、98、99或100个氨基酸残基）的肤。
[0016] 在一些方面，本发明提供了式I所示的一系列脂肤结构：
[0017] R3-J- {NRN-CR1r2- (C = 0)} n-Z-R4 式 I [001引其中
[0019] 各个Ri每次出现独立地为氨基酸的非氨侧链；
[0020] (nrn-cr1r2- (C = 0)} n 为核也结构肤；
[0021] R2和RW彼此独立地为氨，或由碳、氧、氮、硫和氨原子组成且具有1-20个碳原子 的有机基团，或者为CQ-22)烷基、化-12)环烷基、化-12)环烷基烷基、C(3-18)帰基、 C(3-18)快基、Ca-5)焼醜基、Ca-5)焼醜氧基、Ca-5)烷氧基、Ca-5)烷氧基-C(l-5) 烷基、ca-5)烷氧基-CQ-5)烷氧基、ca-5)烷基-氨基-CQ-5)烷基-、ca-5)二焼 基-氨基-C(1-5)烷基-、硝基-C(1-5)烷基、氛基-C(1-5)烷基、芳基-C(1-5)烷基、4-联 苯基-C (1-5)烷基、駿基或羟基；
[0022] R3和R4彼此独立地为亲脂性尾部，其源自天然存在的或合成的脂质、磯脂、糖 月旨、H醜基甘油、甘油磯脂、銷脂、神经醜胺、銷磯脂、脑巧醋或神经节巧脂，其中所述尾部 可W包含类固醇或由碳、氧、氮、硫和氨原子组成并且具有1-20个碳原子的有机基团，或 者为取代或未取代的CQ-22)烷基、"6-12)环烷基、"6-12)环烷基-烷基、C(3-18)帰 基、C(3-18)快基、CQ-5)烷氧基-CQ-5)烷基，或者为二氨神经銷氨醇（S地inganine)、 (2R，3R) -2-氨基-1，3-十八焼二醇、2-氨基-1，3-二十焼二醇（icosasphinganine)、銷氨 醇、植物銷氨醇、顺式-4-銷氨醇（cis-4-sphingenine)或者神经醜胺；
[0023] Z为NH，0,或包含马来醜亚胺基、硫離、醜胺、半脫胺（cysteamide)、半脫氨酸、硫 醇或二硫基的连接子，或包含1-400个原子的聚氧己帰或聚氧丙帰基，或者包含选自C、H、 F、C1、Br、N、0、S、Si和P的组的1-200个原子的连接子；
[0024] J为（C = 0)，0,或包含马来醜亚胺基、硫離、醜胺、半脫胺、半脫氨酸、硫醇或二硫 基的连接子，或包含1-400个原子的聚氧己帰或聚氧丙帰基，或者包含选自C、H、F、C1、Br、 N、0、S、Si和P的组的1-200个原子的连接子；
[00巧]并且，n为2-100。
[0026] 可W制备本发明的脂肤，其中，例如所述肤能够结合核酸。
[0027] 可W制备本发明的脂肤，其中，例如所述肤可W为两性氨基酸序列。例如，所述肤 可W具有形成疏水序列域或基序的多个非极性或疏水氨基酸残基，所述疏水序列域或基序 可W与形成带电序列域或基序的多个带电氨基酸残基相连，从而形成两性肤。
[002引可W制备本发明的脂化其中，例如所述肤可W为聚-Lys-T巧(4:1， M，20, 000-50, 000)，聚-Orn-Trp (4:1，M，20, 000-50, 000)，蜂毒肤（mellitin)蛋白的片段或 变体，W及组蛋白（例如组蛋白H1、组蛋白肥A、组蛋白肥B、组蛋白H3或组蛋白H4)的片段 或变体。
[0029] 可W制备本发明的脂肤，其中，例如所述肤可W具有多个阳离子位点或多个带正 电荷的残基。
[0030] 所述肤可W包含约2-约45个带正电荷的残基，约3-约45个带正电荷的残基，约 4-约45个带正电荷的残基，约5-约45个带正电荷的残基，约10-约45个带正电荷的残 基，约15-约45个带正电荷的残基，约20-约45个带正电荷的残基，约25-约45个带正电 荷的残基，约30-约45个带正电荷的残基，约35-约45个带正电荷的残基，约40-约45个 带正电荷的残基。
[0031] 所述肤可W是被充分硫醇化（thiolylated)的聚赖氨酸肤。它们可W包含至少约 3、4、5、6、7或8个硫醇基团等，或者可W仅具有两个硫醇基团。
[0032] 可W制备本发明的脂肤，其中，例如所述核也结构肤为精氨酸（Arg)"(SEQ ID NO: 341)、高精氨酸化omoArg)。（侧链-(Og 4畑(C = NH)畑2)、降精氨酸（norArg)。（侧 链-(邸2) 2畑(C = NH)畑2)、降-降精氨酸（nornorArg) n (侧链-(邸2) NH (C = NH)畑2)、鸟氨 酸（〇111)。、赖氨酸江75)。佛9 10^):342)、组氨酸化3)。佛9