一种矮生沿阶草的组培快繁方法
【专利摘要】本发明公开了一种矮生沿阶草的组培快繁方法，包括以下步骤：（1）外植体的选取；（2）外植体消毒处理；（3）愈伤组织诱导；（4）分化培养；（5）壮苗培养；（6）生根培养。本发明所述的方法具有繁殖系数、成活率高、繁殖速度快、生长旺盛等优势，且能够有效保证矮生沿阶草种苗的优良性能，具有重要的实践和推广意义，可有效满足市场对矮生沿阶草的日益需求。
【专利说明】一种矮生沿阶草的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种组培快繁方法，尤其是涉及一种矮生沿阶草的组培快繁方法，属 于苗木的繁育【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 矮生沿阶草（Dwarf Ophiopogon japonicus)是近年来从日本引进的草坪草新品 种，为百合科（Liliaceae)沿阶草属（Ophiopogon)多年生常绿草本植物，具耐荫、耐热、耐 寒、常绿等特点，并具有较强的观赏性，可作为四季常绿的草坪地被植物进行开发利用。近 年来矮生沿阶草在国内外绿化产业中需求旺盛，其种苗工厂化繁殖日益受到重视。矮生沿 阶草繁殖方法有种子繁殖、分株繁殖、组织培养等，种子繁殖速度较慢，分株繁殖易造成繁 殖的种苗质量不高，而组织培养可以加快矮生沿阶草的繁殖速度，种苗质量较高。我国对矮 生沿阶草的组培快繁研究的较少。
【发明内容】
[0003] 为了解决上述技术问题，本发明的发明目的在于提供一种可以加快矮生沿阶草的 繁殖速度、同时种苗质量较高的矮生沿阶草的组培快繁方法。
[0004] 本发明采取的技术方案为：
[0005] -种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0006] (1)外植体的选取：选取1年生矮生沿阶草的健壮植株，从植株的基部将萌发的高 度为5cm的子株剥落，然后将子株上的叶片全部剥离、根部剪掉，留取子株高度为2-3mm的 茎基部作为外植体；
[0007] (2)外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗lh，再放入洗涤剂中浸泡 〇.5h，浸泡的同时震荡，然后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理完成后用 灭菌水水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时间大于5min，最后将外植体用灭菌纸 将表面的水分吸干；
[0008] (3)愈伤组织诱导：将步骤（2)消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，在 温度为25±2°C的无菌室中黑暗培养1个月，得到愈伤组织；
[0009] (4)分化培养：将步骤（3)所述的愈伤组织切成2-3_的小块，然后将所述的小块 接种到分化培养基中进行分化培养形成小芽，且分化培养的倍数为6-7倍，而培养条件则 为：温度25±2°C、光照强度位1500?20001x、光照时间为10?12h/d、培养地点为无菌培 养室；
[0010] (5)壮苗培养：将步骤（4)分化培养后形成的小芽切下后接种到壮苗培养基中 进行壮苗培养至幼苗高度为2-3cm，且培养条件为：温度25±2°C、光照强度位1500? 20001x、光照时间为12?15h/d、培养地点为无菌培养室；
[0011] (6)生根培养：将步骤（5)壮苗培养后得到的幼苗接种到生根培养基中进行生根 培养，且培养条件为：温度25±2°C、光照强度位1500?20001x、光照时间为10?12h/d、 培养地点为无菌培养室。
[0012] 进一步，步骤（2)所述的消毒处理的具体步骤为：首先用体积浓度为75%的酒精 消毒15s,然后再用质量浓度为0. 1 %的HgC12溶液消毒5?8min。
[0013] 且所述的愈伤组织诱导培养基包括MS+0. lmg/L ΒΑ+0. lmg/L KT+1. Omg/ LNAA+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂，pH 值为 5· 7-6. 0。
[0014] 所述的分化培养基的包括 MS+2. 5mg/L ΒΑ+0· 5mg/L ΚΤ+0· 2mg/LNAA+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂，pH 值为 5.7-6.0。
[0015] 所述的壮苗培养基包括 MS+2. 5mg/L BA+ (0· 1 ?0· 2) mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂，pH值为5.7-6. 0。
[0016] 所述的生根培养基包括1/4MS+0. 2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为 5· 7-6· 0。
[0017] 本发明的有益效果为：通过本发明所述的矮生沿阶草的组培快繁方法，具有繁殖 系数、成活率高、繁殖速度快、生长旺盛等优势，且能够有效保证矮生沿阶草种苗的优良性 能，具有重要的实践和推广意义，可有效满足市场对矮生沿阶草的日益需求。
【具体实施方式】
[0018] 现在参考具体实施例对本发明进行详细的说明。
[0019] 供试材料：供试的矮生沿阶草材料由江苏绿苑园林建设有限公司苗木基地提供。
[0020] 矮生沿阶草的组培快繁具体步骤如下：
[0021] (1)外植体的选取：选取1年生矮生沿阶草的健壮植株，从植株的基部将萌发的高 度为5cm的子株剥落，然后将子株上的叶片全部剥离、根部剪掉，留取子株高度为2-3mm的 茎基部作为外植体；
[0022] (2)外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗lh，再放入洗涤剂中浸泡 〇.5h，浸泡的同时震荡，冲洗干净后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理用 的具体药液和处理时间如表1所示，其中，举例说明表1中每个实施例的消毒处理的具体步 骤的文字含义，如：75%酒精lOs+O. 1% HgC125min，表示先用体积浓度75%的酒精消毒10 秒钟，之后用质量浓度〇. 1 %的升汞（HgC12)消毒5分钟，同理，其他消毒处理具有类似的处 理过程。每种消毒液使用完毕后均用灭菌水水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时 间大于5min，最后完全消毒好用无菌水冲洗干净后将外植体用灭菌纸将表面的水分吸干， 接种到MS培养基上，每个消毒处理接种10瓶，每瓶接种3个外植体，7d后观察外植体外观， 记录污染率。
[0023] 表1 :不同的消毒处理结果
[0024]
【权利要求】
1. 一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 外植体的选取：选取1年生矮生沿阶草的健壮植株，从植株的基部将萌发的高度为 5cm的子株剥落，然后将子株上的叶片全部剥离、根部剪掉，留取子株高度为2-3mm的茎基 部作为外植体； (2) 外植体消毒处理：首先将外植体用流水反复冲洗lh，再放入洗涤剂中浸泡0. 5h，浸 泡的同时震荡，然后将外植体移至超净工作台上进行消毒处理，消毒处理完成后用灭菌水 水反复冲洗振荡外植体至少5次，每次冲洗时间大于5min，最后将外植体用灭菌纸将表面 的水分吸干； (3) 愈伤组织诱导：将步骤（2)消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基中，在温度 为25±2°C的无菌室中黑暗培养1个月，得到愈伤组织； (4) 分化培养：将步骤（3)所述的愈伤组织切成2-3mm的小块，然后将所述的小块接种 到分化培养基中进行分化培养形成小芽，且分化培养的倍数为6-7倍，培养条件则为：温度 25±2°C、光照强度为150(Γ20001χ、光照时间为l(Tl2h/d、培养地点为无菌培养室； (5) 壮苗培养：将步骤（4)分化培养后形成的小芽切下后接种到壮苗培养基中进行壮 苗培养至幼苗高度为2-3cm，且培养条件为：温度25±2°C、光照强度为150(Γ20001 Χ、光照 时间为12~15h/d、培养地点为无菌培养室； (6) 生根培养：将步骤（5)壮苗培养后得到的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养， 且培养条件为：温度25±2°C、光照强度为150(Γ20001χ、光照时间为l(Tl2h/d、培养地点为 无菌培养室。
2. 根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，步骤（2)所 述的消毒处理的具体步骤为：首先用体积浓度为75%的酒精消毒15s，然后再用质量浓度为 0· 1%的HgCl2溶液消毒5?8min。
3. 根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的愈伤 组织诱导培养基包括 MS+0.1mg/L BA+0.1mg/L KT+l.Omg/L NAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂， pH 值为 5· 7-6. 0。
4. 根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的分化 培养基的包括 MS+2. 5mg/L ΒΑ+0. 5mg/L ΚΤ+0. 2mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂，pH 值为 5· 7-6· 0。
5. 根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的壮 苗培养基包括 MS+2.5mg/L BA + (0.f0.2)mg/L NAA+30g/L 蔗糖+7g/L 琼脂，pH 值为 5· 7-6· 0。
6. 根据权利要求1所述的一种矮生沿阶草的组培快繁方法，其特征在于，所述的生根 培养基包括 1/4MS+0. 2mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂，pH 值为 5. 7-6. 0。
【文档编号】A01H4/00GK104186312SQ201410380222
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月4日 优先权日:2014年8月4日
【发明者】丁久玲, 郑凯, 王海珍, 俞禄生 申请人:江苏农林职业技术学院