一种珍稀幌菊组培快繁的方法
【专利摘要】本发明公开了一种珍稀幌菊组培快繁的方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择与消毒处理，(2)发芽培养，(3)继代培养，(4)生根培养，(5)驯化、移栽等步骤。选择了合适的培养基和培养条件，利用枝条作为外植体快速繁殖成功。本发明首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由1年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
【专利说明】一种珍稀幌菊组培快繁的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养【技术领域】，尤其涉及一种珍稀幌菊组培快繁的方法。
【背景技术】
[0002]幌菊(Ellis1phyllumpinnatum(Wal1.)Makino)为田基麻科,幌菊属，原产北美。该植物喜凉爽干燥，不耐湿热、寒冷，要求光照充足，宜肥沃疏松的土壤。可秋播也可春播，秋播9月上旬进行，均行盆播，入低温温室越冬，供春季和夏初开花使用。春播于4月份进行，供秋季观花使用。
[0003]幌菊是一种极具观赏价值的花木，半肉质，枝一般三叉。叶对生，矩圆状倒卵形，羽状深裂。花单生于叶腋，合办花，先端5裂，呈线盘状，花有底为亮蓝色，中央呈白色，或白色底，中央黑色，或蓝色，上有紫色脉纹等，花瓣先端有一滴紫色，花期4-6月。蒴果球形。每两个月剪掉一次带有老叶和黄叶的枝条，只要温度适宜，能四季开花。供花境、花丛、花群栽植，也可盆栽观赏。
[0004]种子繁殖、扦插繁殖和嫁接繁殖是花卉苗木常用的常规繁殖方法。到目前为止，幌菊最常用的繁殖方法是种子繁殖。然而，一方面由于幌菊种子极易散落，采集较困难，且种子较小，后熟期长，萌发率较低；另一方面采用幌菊枝条扦插繁殖成活率低；而嫁接繁殖则需要先通过种子繁殖或扦插培育砧木苗。
[0005]组培快繁的方法可以在短时间内快速繁殖获得一定数量的苗木。目前，国内外关于幌菊属植物组织培养快速繁殖方面的报道较少，缺乏全面系统的研究，没有建立起组织培养快速繁殖技术体系。因此，我们以幌菊枝条为外植体，探索建立组织培养快速繁殖技术体系，为幌菊大面积育苗提供技术支撑，满足生产需要，具有重要的理论和实践意义。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种珍稀幌菊组培快繁的方法，为幌菊大面积育苗提供技术支撑，满足生产需要，具有重要的理论和实践意义。
[0007]为了解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案来实现。
[0008]一种珍稀幌菊组培快繁的方法，包括以下步骤:
[0009]I)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2 - 3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡lOmin，再在自来水下冲洗Ih ;在超净工作台上用吸水纸吸去水分后,用75%乙醇溶液浸泡30s后,用无菌水荡洗一次；加入5.6%次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠,再加入0.1 %升萊浸泡8 -1Omin,每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4 - 5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用。
[0010]2)将灭菌后外植体伤口处切掉1- 2mm,将末端向下垂直插入Pl培养基中，培养5 - 7d后转入到新的Pl培养基中，并继续培养10 - 15d长出新芽。
[0011]3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养,20d后新芽伸长大于2.5cm。
[0012]4)将伸长生长后的新芽切成Icm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25 - 30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代。
[0013]5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根。
[0014]6)生根培养25 -30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
[0015]其中，所述各培养基的组份为:
[0016]Pl培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6 -苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.05mg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0017]P2培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6 -苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0018]P3培养基:1/2MS基本培养基(大量元素减半)、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.lmg/L 吲哚丁酸(IAA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0019]步骤2)、3)的培养条件为温度24 - 26°C，光周期为14h光照/1h黑暗，光强为1500Lx ；
[0020]步骤4)的培养条件为温度为23± 1°C，12h/d的光周期，光照强度2000Lx ；
[0021]步骤5)的培养条件培养温度为23 土 1°C，14 - 18h/d的光周期，光照强度100Lx ；
[0022]所述驯化移栽方法为组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长
3- 5d ;移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800?1000倍百菌清溶液浸泡根部3 - 5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800?1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
[0023]本发明有益效果是:针对幌菊常规繁殖效率低的问题，首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由I年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
【具体实施方式】
[0024]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0025]实施例
[0026]一种珍稀幌菊组培快繁的方法，具体如下:
[0027]I)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2 - 3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡lOmin，再在自来水下冲洗Ih ;在超净工作台上用吸水纸吸去水分后,用75%乙醇溶液浸泡30s后,用无菌水荡洗一次；加入5.6%次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠,再加入0.1 %升萊浸泡8 -1Omin,每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4 - 5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用。
[0028]2)将灭菌后外植体伤口处切掉1- 2mm,将末端向下垂直插入Pl培养基中，培养5 - 7d后转入到新的Pl培养基中，并继续培养10 - 15d长出新芽。
[0029]3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养,20d后新芽伸长大于2.5cm。
[0030]4)将伸长生长后的新芽切成Icm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25 - 30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代。
[0031]5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根。
[0032]6)生根培养25 -30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
[0033]其中，所述各培养基的组份为:
[0034]Pl培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6 -苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.05mg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0035]P2培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6 -苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0036]P3培养基:1/2MS基本培养基(大量元素减半)、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、
0.lmg/L 吲哚丁酸(IAA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ;
[0037]其中的含量(g/L或mg/L)均为各组分占总培养基的重量体积比。
[0038]所述MS基本培养基含有大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四类。P1、P2培养基中，MS 基本培养基，以 IL 计，组成为:NH4N031650mg，KN031900mg, CaCl2.2H20 440mg,KH2P04170mg，MgSO4.7H20 370mg，FeSO4.7H20 27.8mg，Na2EDTA 37.3mg，H3B036.2mg，MnSO4.H2O 16.9mg，ZnSO4.7H20 8.6mg，Na2MoO4.2H20 0.25mg，CuSO4.5H20 0.025mg，CoCl2.6H20 0.025mg, KI 0.83mg,肌醇 10mg,甘氨酸 2mg,烟酸 0.5mg,维生素 B1.lmg,维生素B60.5mg和余量的无菌水。
[0039]P3 培养基中的大量元素减半，即 NH4N03、KN03、CaCl2.2H20、KH2P04、MgSO4.7H20 的含量减半，其它成分的含量不变。
[0040]步骤2)、3)的培养条件为温度24 - 26°C，光周期为14h光照/1h黑暗，光强为1500Lx ；
[0041]步骤4)的培养条件为温度为23±1°C，12h/d的光周期，光照强度2000Lx ；
[0042]步骤5)的培养条件培养温度为23 土 1°C，14 - 18h/d的光周期，光照强度100Lx ；
[0043]所述驯化移栽方法为组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长
3- 5d ;移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800?1000倍百菌清溶液浸泡根部3 - 5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800?1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
[0044]本发明针对幌菊常规繁殖效率低的问题，首次建立起该植物的组织培养快速繁殖技术体系，使其种苗繁殖不受时间、季节等限制，从而极大地缩短了育苗周期，提高了育苗效率，育苗周期由I年缩短到4至5个月，每年育苗批数由2批提高到5至10批，为其大面积推广应用提供了一条有效途径。
【权利要求】
1.一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于包括以下步骤: 1)以当年生半木质化的幌菊枝条为外植体，将枝条剪成2- 3cm的带腋芽茎段，剪去叶片，用自来水洗去灰尘，用洗洁精溶液浸泡lOmin，再在自来水下冲洗Ih ;在超净工作台上用吸水纸吸去水分后，用75%乙醇溶液浸泡30s后,用无菌水荡洗一次；加入5.6%次氯酸钠溶液浸泡并不断摇动，15min后倒去次氯酸钠,再加入0.1 %升萊浸泡8 -1Omin,每隔2min剧烈摇动一次，最后用无菌水冲洗4 - 5次，将其放在无菌纸上吸干水分待用； 2)将灭菌后外植体伤口处切掉1- 2mm,将末端向下垂直插入Pl培养基中，培养5 - 7d后转入到新的Pl培养基中，并继续培养10 - 15d长出新芽； 3)将长出的新芽茎段基部发黑部分切除后转移至P2培养基中进行新芽伸长培养，20d后新芽伸长大于2.5cm ； 4)将伸长生长后的新芽切成Icm左右的小段，将其转入P2培养基中进行继代培养，25 - 30d后增殖新芽萌发并伸长到2cm以上，继代增殖培养代数不超过3代； 5)将步骤4)长至2cm以上的新芽剪下，去掉靠近培养基基部的叶片并转入至P3培养基，培养15d后陆续长出新根； 6)生根培养25- 30d后，将根系生长健壮的组培苗移出培养室，经驯化后移栽入大田。
2.根据权利要求1所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述各培养基的组份为: Pl培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.2mg/L 6 -苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.05mg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ; P2培养基:MS基本培养基、35g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、2mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6 - BA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9 ; P3培养基:1/2MS基本培养基、25g/L白砂糖、7.3g/L琼脂粉、0.lmg/L吲哚丁酸(IAA)、0.lmg/L 萘乙酸(NAA)，pH 为 5.9。
3.根据权利要求1或2所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述步骤2)、3)的培养条件为温度24 - 26°C，光周期为14h光照/1h黑暗，光强为1500Lx ;步骤4)的培养条件为温度为23± 1°C，12h/d的光周期，光照强度2000Lx ;步骤5)的培养条件培养温度为23±1°C，14 - 18h/d的光周期，光照强度100Lx。
4.根据权利要求1或2所述的一种珍稀幌菊组培快繁的方法，其特征在于所述驯化是指组培苗从培养室运出，松开组培瓶盖，在室内环境中生长3 -5d ;移栽时，先用自来水洗净组培苗根部培养基，再用800?1000倍百菌清溶液浸泡根部3 _5min，后栽入到装有育苗基质的穴盘中；全部移栽后，用塑料薄膜外罩黑色遮阳网覆盖遮阳、保湿，3d后逐渐打开塑料薄膜和遮阳网；每隔3d喷施一次800?1000倍百菌清溶液；待植株生长健壮后栽入到大田。
【文档编号】A01H4/00GK104221863SQ201410467194
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】张振超, 戴忠良, 潘跃平, 毛忠良, 姚悦梅, 秦文斌, 潘永飞, 肖燕, 王建华, 马志虎, 孙春青, 孙国胜 申请人:镇江瑞繁农艺有限公司