组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种组合物，由质量比为1.21～2.34∶97.76～98.79的核黄素与枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉构成；及该组合物在防治烟草的黑胫病和赤星病方面的应用。本发明组合物与单独施用枯草芽孢杆菌Tpb55菌株相比，能显著提高对烟草黑胫病、赤星病等真菌病害的防治效果，与生产主用化学药剂的防治效果相当。两组分相容性好、并能增加防治效果的诱导植物抗病性物质，并利用其与生防微生物复配，兼做杀菌剂和诱抗剂来用于烟草赤星病、黑胫病等真菌病害的防治，并将其作为新型杀菌剂原料进行开发应用。
【专利说明】组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物药剂【技术领域】，尤其是一种组合物，及其应用。
【背景技术】
[0002] 目前烟草黑胫病、赤星病等是烟草上重要的真菌病害，每年造成巨额经济损失，上 述病害防治严重依赖化学药剂，由于药剂品种单一、使用年限较长，病原菌抗药性增加，防 治效果明显下降，且随着人们对环境与健康的日益重视，化学农药的使用越来越受到严格 限制，因此亟需寻找替代化学防治的技术。生物防治被认为非常有希望替代化学药剂的防 治技术，成为人们研究的热点。然而，大量实践表明，单纯依赖生防微生物，往往存在效果 慢、防效差、受环境影响大等不利因素，难以替代化学农药，在生产上难以推广。
[0003] 种植抗病品种、加强栽培管理以及化学防治是我国目前防治烟草赤星病的主要措 施。但是，优良的抗性品种难以获得，且容易丧失，而且生产上的主栽品种均抗性较差。利 用地膜覆盖，合理轮作，适时早移栽以及适宜的种植密度等措施，在一定程度上可以减轻病 害的发生程度，但在病害选择压力大时往往效果并不明显，只能发挥辅助作用。因此，化学 药剂的使用仍是主要手段，其中，菌核净是使用最广泛的药剂。黑胫病的防治同样以化学防 治为主，常用药剂主要有甲霜灵系列、乙磷铝及乙磷铝锰锌、敌克松、恶霜灵锰锌、代森锌、 福美双、代森锰锌等。这些化学药剂多为苯基酰胺类及乙磷铝等同一种或作用机制相同的 几种内吸性杀菌剂，很容易产生耐药性，从而引起药效下降。烟草黑胫病和赤星病的防治严 重依赖化学防治，存在诸多弊端。一是，造成环境污染和农药残留。二是产生抗药性，防治 效果下降，防治成本增加。袁宗胜等检测了山东、湖南等9个主要烟区的烟草黑胫病菌对甲 霜灵的敏感性，发现所测菌株菌丝生长对甲霜灵都存在不同程度的敏感性，EC50值相差15 倍左右，通过甲霜灵对烟草黑胫病菌继代培养物的测定，也证明了烟草黑胫病菌对甲霜灵 的耐药性。三是药剂的使用受环境影响大，防治效果不理想。如高温多雨天气利于烟草赤 星病的爆发，化学药剂难以使用。
[0004] 另外，新的化学农药研发不仅成本高，而且难度大，且有时使用效果不理想，而生 物防治不仅环境友好，而且有时效果较为理想，成为近年来研究热点，针对烟草赤星病和黑 胫病等真菌病害生物防治，国内研究者作了大量研究，特别是在拮抗菌的筛选上作了大量 努力，获得了大量优良生防微生物。经过长期努力，我国烟草真菌病害生物防治取得了较大 进展，但是还存在诸多问题，突出表现在：（1)研究多限于低水平的重复，突破少。目前大量 研究仅限于低水平重复性的室内研究上，特别是菌株的筛选上。虽然高效菌株的获得是非 常重要的，但仅仅停留在这个水平上，造成了大量的资源浪费；（2)多不具备产业化基础， 技术走不出实验室，离生产应用距离尚远，生产上缺乏能推广应用的生防产品；（3)普遍单 一依赖生防微生物，防治效果有限，且易受环境影响，防治效果不稳定，与化学药剂防治效 果相比相差太远，无法替代化学农药施用。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术的不足，提出一种组合物，能诱导烟草抗病性，对烟草黑胫 病、赤星病等真菌病害防治效果能达到生产主用化学药剂的防治效果，具有较大应用价值， 可以用于烟草真菌病害的绿色防控。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种组合物，由质量比为 1. 21?2. 34 : 97. 76?98. 79的核黄素与枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉构成。
[0007] 优选的，核黄素与枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉的质量比为1. 88 : 98. 12。
[0008] 优选的，该枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉的芽孢含量4X 101(lCfu/g。
[0009] 如上所述的组合物在防治烟草的黑胫病和赤星病方面的应用。
[0010] 优选的，防治赤星病时，在烟草赤星病发病初期施用组合物，稀释400倍液，叶片 均勻喷雾，连续施药2?3次，每次间隔7?10天。
[0011] 优选的，防治烟草黑胫病时，在烟草移栽后7天施用组合物1次，稀释为400倍液， 灌根，黑胫病发病初期连续施药2?3次，每次间隔7?10天。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有以下优点：本发明组合物与单独施用枯草芽孢杆菌 Tpb55菌株相比，能显著提高对烟草黑胫病、赤星病等真菌病害的防治效果，与生产主用化 学药剂的防治效果相当。两组分相容性好、并能增加防治效果的诱导植物抗病性物质，并利 用其与生防微生物复配，兼做杀菌剂和诱抗剂来用于烟草赤星病、黑胫病等真菌病害的防 治，并将其作为新型杀菌剂原料进行开发应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图1为诱导抗性物质对Tpb55菌株生长的影响；
[0014] 图2为诱导抗性物质与Tpb55菌株复配对黑胫病防治效果；
[0015] 图3为枯草芽孢杆菌Tpb55与核黄素组合物对POD酶活性影响；
[0016] 图4为枯草芽孢杆菌Tpb55与核黄素组合物对CAT酶活性影响；
[0017] 图5为枯草芽孢杆菌Tpb55与核黄素组合物对SOD酶活性影响。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例和附图对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释 性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。
[0019] 一种由核黄素与枯草芽孢杆菌Tpb55菌株按照质量比1.21?2.34 : 97. 76? 98. 79构成的组合物；将两种组分混匀即可。其中，枯草芽孢杆菌Tpb55菌株的制备，可参 照专利ZL201110093415. 4方法发酵完成后，喷雾干燥即得枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉，芽孢 含量 4X101(lcfu/g。
[0020] 上述组合物在防治烟草的黑胫病和赤星病方面，有显著地效果；可以通过以下措 施达到：
[0021] 1、防治烟草赤星病时，在烟草赤星病发病初期开始施用枯草芽孢杆菌与核黄素的 组合物，施用倍数为稀释为400倍液，施用方法为叶片均匀喷雾，连续施药2?3次，每次间 隔7?10天。
[0022] 2、防治烟草黑胫病时，在烟草移栽后7天施用枯草芽孢杆菌与核黄素的组合物1 次，黑胫病发病初期连续施药2?3次，每次间隔7?10天，施用倍数为稀释为400倍液， 施用方法为灌根。
[0023] 为更好的说明本发明，特列举以下实施例，但不限于这些实施例。
[0024] 实施例1 :抗烟草黑胫病诱导抗性物质筛选
[0025] I. 1 材料
[0026] 供试烟草红花大金元，种子由本实验室保存。将种子播种在装有沃土的育苗盘内， 置于28°C左右的温室里生长，至1-2片真叶时移至营养钵中单株培养，待烟苗生长至5-6片 真叶时进行试验。
[0027] 供试病原菌烟草黑胚病菌（PhytophthoraParasiticaVarnicotianae) 0号生理小 钟，由本实验室保存。病原菌在燕麦培养基上培养，参照杨建卿的方法刺激游动抱子囊产 生，制备游动抱子悬浮液，接种浓度为6 X IO3个游动抱子/mL悬浮液。
[0028] 供试药剂如表1所示。
[0029] 表1供试诱导抗性物质
[0030]
【权利要求】
1. 一种组合物，由质量比为1. 21?2. 34 : 97. 76?98. 79的核黄素与枯草芽孢杆菌 Tpb55菌粉构成。
2. 如权利要求1所述组合物，其特征在于：核黄素与枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉的质量 比为 1. 88 : 98. 12。
3. 如权利要求1或2所述组合物，其特征在于：该枯草芽孢杆菌Tpb55菌粉的芽孢含 量 4X101Qcfu/g。
4. 如权利要求1所述组合物在防治烟草的黑胫病和赤星病方面的应用。
5. 如权利要求4所述应用，其特征在于：防治赤星病时，在烟草赤星病发病初期施用组 合物，稀释400倍液，叶片均匀喷雾，连续施药2?3次，每次间隔7?10天。
6. 如权利要求4所述应用，其特征在于：防治烟草黑胫病时，在烟草移栽后7天施用组 合物1次，稀释为400倍液，灌根，黑胫病发病初期连续施药2?3次，每次间隔7?10天。
【文档编号】A01P3/00GK104381303SQ201410585160
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】张成省, 孔凡玉, 黄树立, 张立猛, 计思贵, 李青诚, 祖秉桥, 高加明, 李锡宏, 郭利, 杨海凌, 焦永鸽, 王静, 冯超 申请人:中国农业科学院烟草研究所, 中国烟草总公司湖北省公司