一种微生态制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种微生态制剂，所述微生态制剂为β-环糊精包合物，并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的一种微生态制剂及其制备方法，由于β-环糊精具有独特的内疏水外亲水的结构而与许多尺寸适宜的客体分子形成包合物，通过β-环糊精对益生菌包合可形成较为稳定的包合物，包合物的形成能够有效保护化合物免于氧化或水解等反应，同时也增加药物的稳定性，增强水溶性,控制微生态制剂释放提高生物利用率。
【专利说明】-种微生态制剂及其制备方法
[0001]
【技术领域】
[0002] 本发明涉及兽药领域，具体涉及一种微生态制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0003] 抗生素的使用对畜牧业的发展起到了极大的推动作用，随着科学与生活水平的 提高，人们逐渐认识到，抗生素长期添加于饲料中，使动物病原菌产生抗药性，导致抗生 素用量增加，引起畜禽内源性感染和二重感染，造成动物机体免疫力的下降、动物胃肠道 菌群的失调等不良的后果，也通过食物链对人类的健康造成危害。目前，美国及西欧一些 国家相继禁止或限制饲用抗生素，因此，开发研制抗生素的替代品已经成为动物养殖业中 的一个急待解决的问题。
[0004] 微生态制剂作为一种无公害、无残留的绿色饲料添加剂并具有促进动物的生长， 提高动物的免疫力，降低动物生产对环境的污染程度等优点而成为研究和应用的热点，我 国微生态制剂的研究开始于上世纪70年代，80年代后期才开始重视微生物饲料添加剂的 研究与开发。由于环糊精具有独特的内疏水外亲水的结构而与许多尺寸适宜的客体分子形 成包合物，通过环糊精对头孢噻呋包合可形成液态包合物。包合物的形成能够有效保护化 合物免于氧化或水解等反应，同时也增加药物的水溶性，增强稳定性，降低毒副作用，控制 药物释放提高生物利用率。近来，环糊精用来改善药物的物理化学及生物学性质方面的研 究应用越来越受到人们的关注。特别是用来提高疏水药物的稳定性和生物利用度，有一些 溶液中包合作用的报道，而环糊精包合微生态制剂的制备及其性质的研究未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种微生态制剂及其制备 方法。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种微生态制剂，所述微生态制剂 为β-环糊精包合物。
[0007] 进一步的，上述的一种微生态制剂，所述环糊精包合物是将乳酸菌、芽孢杆菌 和酵母菌分别培养后再混合培养，最后加入β-环糊精包合得到的。
[0008] 本发明的第二个目的是提供了上述一种微生态制剂的制备方法，包括以下步骤： 1) 首先将三种菌粉配成质量体积百分比（W/V)为5%的液体，将0. Iml乳酸菌、0. Iml芽 孢杆菌和〇. Iml酵母菌分别接种于MRS液体培养基、肉汤液体培养基和马铃薯葡萄糖液体 培养基中，置于37°C培养箱中培养24小时后取出，得到乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和 酵母菌培养液； 2) 将步骤1)得到的乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液按照体积比2 :1 : 2的比例与灭菌后的酒糟、麸皮混合均匀，再置于31. 8°C培养箱中培养24小时后得到微生 物培养剂，酒糟和麸皮的加入量均为为三种菌培养液总质量的200倍量； 3)将步骤2)得到的微生物培养剂中加入β-环糊精进行包合，包合温度 为-20°C -65°C，搅拌时间为2-5小时，β -环糊精的加入比例按照重量比计微生物培养剂： β-环糊精为10 :(1-3)，干燥即得到微生态制剂。
[0009] 进一步的，上述的一种微生态制剂的制备方法，所述步骤3)中，包合温度为20°C， 搅拌时间为4小时。
[0010] 本发明的有益效果为：本发明提供的一种微生态制剂及其制备方法，由于β_环 糊精具有独特的内疏水外亲水的结构而与许多尺寸适宜的客体分子形成包合物，通过 β -环糊精对头孢噻呋包合可形成较为稳定的包合物，包合物的形成能够有效保护化合物 免于氧化或水解等反应，同时也增加药物的稳定性，增强水溶性，降低毒副作用，控制微生 态制剂释放提1?生物利用率。
【具体实施方式】
[0011] 本发明技术方案中所用到的试剂来源： 乳酸菌：沧州旺发生物技术研究所有限公司（RS20140122-3); 芽孢杆菌(解淀芽孢杆菌）：保定瑞谷生物科技有限公司（20140308YB); 酵母菌：沧州旺发生物技术研究所有限公司（XM20140220-7); MRS液体培养基：上海泸峰化工有限公司（60541609-2216e); 肉汤液体培养基：上海泸峰化工有限公司（60541609-2200a); 马铃薯葡萄糖液体培养基：上海鼓臣生物技术有限公司（P0185); β -环糊精：河南省孟州市鸿基生物有限公司（20131222)。
[0012] 实施例1 : 一种微生态制剂的制备方法，包括以下步骤： 1) 首先将三种菌粉配成5% (W/V)的液体，将0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢杆菌和0. Iml 酵母菌分别接种于MRS液体培养基、肉汤液体培养基和马铃薯葡萄糖液体培养基中，置于 37°C培养箱中培养24小时后取出，得到乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液； 2) 将步骤1)得到的乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液按照体积比2 :1 : 2的比例与灭菌后的酒糟、麸皮混合均匀，再置于31. 8°C培养箱中培养24小时后得到微生 物培养剂，酒糟和麸皮的加入量均为为三种菌培养液总质量的200倍量； 3) 将步骤2)得到的微生物培养剂中加入β -环糊精进行包合，包合温度为-20°C°C， 搅拌时间为2小时，β -环糊精的加入比例按照重量比计微生物培养剂：β -环糊精为10 : 1，干燥即得到微生态制剂。
[0013] 实施例2: 一种微生态制剂的制备方法，包括以下步骤： 1) 首先将三种菌粉配成5% (W/V)的液体，将0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢杆菌和0. Iml 酵母菌分别接种于MRS液体培养基、肉汤液体培养基和马铃薯葡萄糖液体培养基中，置于 37°C培养箱中培养24小时后取出，得到乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液； 2) 将步骤1)得到的乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液按照体积比2 :1 : 2的比例与灭菌后的酒糟、麸皮混合均匀，再置于31. 8°C培养箱中培养24小时后得到微生 物培养剂，酒糟和麸皮的加入量均为为三种菌培养液总质量的200倍量； 3)将步骤2)得到的微生物培养剂中加入β -环糊精进行包合，包合温度为65°C，搅拌 时间为5小时，β -环糊精的加入比例按照重量比计微生物培养剂：β -环糊精为10 :3,干 燥即得到微生态制剂。
[0014] 实施例3 : 一种微生态制剂的制备方法，包括以下步骤： 1) 首先将三种菌粉配成5% (W/V)的液体，将0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢杆菌和0. Iml 酵母菌分别接种于MRS液体培养基、肉汤液体培养基和马铃薯葡萄糖液体培养基中，置于 37°C培养箱中培养24小时后取出，得到乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液； 2) 将步骤1)得到的乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液按照体积比2 :1 : 2的比例与灭菌后的酒糟、麸皮混合均匀，再置于31. 8°C培养箱中培养24小时后得到微生 物培养剂，酒糟和麸皮的加入量均为为三种菌培养液总质量的200倍量； 3) 将步骤2)得到的微生物培养剂中加入β -环糊精进行包合，包合温度为20°C，搅拌 时间为4小时，β -环糊精的加入比例按照重量比计微生物培养剂：β -环糊精为10 :2,干 燥即得到微生态制剂。
[0015] 实施例4: 一、微生态制剂中活菌数量的测定： 1、材料准备：首先将三种菌粉配成5% (W/V)的液体，用微量取液器吸取KT6-KT8倍液 体各0. Iml涂布接种于MRS固体培养基平皿中（各稀释度设两个重复），置于37°C培养箱 中培养24h后取出，进行乳酸菌菌落计数，用微量取液器吸取KT 6-KT8倍液体各0. Iml涂 布接种于马铃薯葡萄糖固体培养基平皿中（各稀释度设两个重复），置于37°C培养箱中培 养24h后取出，进行酵母菌菌落计数，用微量取液器吸取KT 6-KT8倍液体各0. Iml涂布接 种于肉汤固体培养基平皿中（各稀释度设两个重复），置于37°C培养箱中培养24h后取出， 进行芽胞杆菌菌落计数。
[0016] 2、微生态制剂的干燥：先通过预备试验测得微生态制剂在冷冻干燥、阴凉处风干、 25°C烘箱烘干、45°C烘箱烘干，65°C烘箱烘干干燥后水分含量在12%-13%之间所用的时间 分别为811、1211、1011、811和611，将微生态制剂分为五个处理组，每组三个重复，每个重复 5〇〇g分别采用冷冻干燥、阴凉处风干、25°C烘干、45°C烘干和65°C烘干五种不同的干燥方 式，对五个组的微生态制剂进行干燥、检测干燥后各组中的乳酸菌、酵母菌和芽胞杆菌的 含量。
[0017] 3、结果： 不同干燥方式对微生态制剂中活菌数量的影响（lgeFU/g)，结果如表1所示。
[0018] 表 1
【权利要求】
1. 一种微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂为3 -环糊精包合物。
2. 根据权利要求1所述的一种微生态制剂，其特征在于，所述3 -环糊精包合物是将乳 酸菌、芽孢杆菌和酵母菌分别培养后再混合培养，最后加入3 -环糊精包合得到的。
3. 如权利要求1或2所述的一种微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 将三种菌粉配成质量体积百分比为5%的液体，再将0. lml乳酸菌、0. lml芽孢杆菌 和0. lml酵母菌分别接种于MRS液体培养基、肉汤液体培养基和马铃薯葡萄糖液体培养基 中，置于37°C培养箱中培养24小时后取出，得到乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌 培养液； 2) 将步骤1)得到的乳酸菌培养液、芽孢杆菌培养液和酵母菌培养液按照体积比2 :1 :2的比例与灭菌后的酒糟、麸皮混合均匀，再置于31. 8°C培养箱中培养24小时后得到微生 物培养剂，酒糟和麸皮的加入量均为为三种菌培养液总质量的200倍量； 3) 将步骤2)得到的微生物培养剂中加入￠-环糊精进行包合，包合温度 为-20°C -65°C，搅拌时间为2-5小时，0 -环糊精的加入比例按照重量比计微生物培养剂： 环糊精为10 :(1-3)，干燥即得到微生态制剂。
4. 根据权利要求3所述的一种微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，包 合温度为20°C，搅拌时间为4小时。
【文档编号】A23K1/16GK104489268SQ201410744122
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】梁剑平, 陶蕾, 刘宇, 赵凤舞, 王学红, 尚若锋, 郝宝成, 杨珍, 郭志廷, 郭文柱, 贾忠 申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所