白蜡树组织培养快速繁育的方法
【专利摘要】本发明公开了一种白蜡树组织培养快速繁育的方法，该方法通过材料消毒、启动培养、增殖分化培养、生根培养、移栽、壮苗培养等几个步骤，将白蜡树的腋芽或茎尖繁育为苗圃苗，试管苗移栽的成活率在90％以上。该方法繁育速度快，可以周年进行，能显著加快白蜡树的繁育进程，有效解决我国盐碱地大面积绿化所需绿植苗源的问题，同时还可以大幅降低绿化的成本，节约公共资源。
【专利说明】白蜡树组织培养快速繁育的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种树木繁育的方法，具体涉及一种培养繁育白蜡树的方法。
【背景技术】
[000引白蜡树（Fraxinus chinensis),另1怡青柳木、白荆树，为木犀科白蜡树属落叶乔 木，全世界总共约有70种，我国有20多种，多为用材树种和园林绿化树种，主要分布在温 带地区。白蜡树枝叶繁茂，根系发达，生长迅速，干形通直，树形美观，适应性强，具有良好的 抗盐性，能够在盐碱地中种植，是用于盐碱地绿化的重要树种。
[0003] 长期W来，白蜡树W种子繁殖为主，由于其幼龄期长，具有明显的结实间隔期，因 此繁殖周期较长，不仅如此，种子繁殖还存在种源遗传变异等诸多弊病。
[0004] 我国沿海等地区存在大面积的盐碱地，绿化所需苗木数量巨大，而作为优良抗盐 植物的白蜡树目前的繁殖方法却周期长、效率低，无法满足绿化进程的需求，此问题亟待解 决。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种白蜡树的快速繁育方法，该方法采用白蜡树的胶芽或茎 尖组织进行培养繁育，能够显著加速白蜡树的繁育进程，且繁育苗的成活率在90% W上。
[0006] 为了实现本发明的目的，发明人提供了 W下技术方案。
[0007] 白蜡树组织培养快速繁育的方法，包括W下操作步骤：
[0008] A、材料消毒；取白蜡树胶芽或茎尖，用流动水冲洗2-4小时，随后用滤纸吸除表面 附着的水，用75%的酒精进行表面消毒20-30砂，然后采用5%的次氯酸轴消毒20-25分 钟，再用无菌水冲洗5-6次；
[0009] B、启动培养；用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后对材料进行 截取，接种到启动培养基中，置于22-28C的接种室中，光照培养20-25天，得到试管苗，启 动培养基为在38000毫克/升MS固体培养基中添加喔苯隆制备而成；
[0010] C、增殖分化培养；将步骤B培养的试管苗剪切成0. 3-0. 5厘米的茎段、茎尖，接种 至增殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30-40天，得到丛生增殖试管苗，增殖 培养基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添加水解乳蛋白、喔苯隆、剛巧己酸制备而 成；
[0011] D、生根培养；剪取2. 5-3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养基中进行 生根培养，培养周期为20-30天，得到生根苗，生根培养基为在19000毫克/升的MS培养基 中添加琼脂、剛巧下酸、蔡己酸后制备而成；
[0012] E、移栽；选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养基，移栽至湿润的 幢石中，喷水至幢石饱和，置于温度22-25 C、光照500-600LX条件下进行培养，培养周 期为20-25天，得移栽苗，培养过程中1-9天控制湿度为> 90 %，第10天后控制湿度为 75% -85% ；
[0013] F、壮苗培养；将移栽苗放置于室温条件下，每周德一次营养液，浓度为1/2MS营养 液或0. 2%尿素，进行壮苗培养为50-60天，移栽至苗圃即可。
[0014] 上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤A中所述胶芽或茎尖为当年生长的胶 芽或茎尖。树龄和培养成功率成反比，既树龄越长培养成功率越小，树龄短的容易培养，成 活率高，所W优选当年生长的新芽进行培养。
[0015] 上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤B中所述截取的长度为0. 3-0. 5厘米。 所选的区域相对细菌较少，植物细胞生长活跃，易于培养和后期生长。
[0016] 上述白蜡树组织培养快速育的方法，步骤B中所述添加喔苯隆的浓度为2毫克/ 升。添加喔苯隆的目的是促进芽分化，经过多次试验证明，该浓度条件下芽分化数量多，丛 生苗质量好、粗壮，为优选浓度。
[0017] 上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤C中所述添加水解乳蛋白的浓度为 300-500毫克/升，喔苯隆的浓度为1. 5毫克/升，剛巧己酸0. 5毫克/升。添加水解乳蛋 白可W促进试管苗更健壮。
[0018] 上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤D中所述添加琼脂的浓度为5-6克/ 升、剛巧下酸1-1. 5毫克/升、蔡己酸0. 5-1毫克/升。
[0019] 上述白蜡树组织培养快速繁育的方法，步骤E中所述湿润的幢石的含水量 >90%。
[0020] 步骤D中所述健壮单芽指生长有2-4片叶，且叶片浓绿、平展的单芽。
[0021] 步骤E中所述完整根是指根长0. 2-0. 6厘米、单株生根数3条W上的根系。
[0022] 步骤D中选择剪取2. 5-3厘米高的单芽增殖试管苗，是考虑到低于此范围值时不 易于试管苗移栽，影响成活率，高于此范围之不利于培养阶段试管苗生长，容易出现苗子弯 曲。经过多次试验得出，该范围较适宜生根培养。
[0023] 步骤E中所述移栽过程中控制湿度可选用覆盖的方法，覆盖时可选用专口用于植 物移栽苗的透明塑料苗盘盖，利于移栽苗环境保湿和透光。试管苗从完全封闭和无菌的环 境中取出来，移栽到基质中，是从自养到异养的关键过度过程，移栽后覆盖湿度在90% W 上，当移栽苗生长出新叶片后，一般在7-10天，掲开覆盖，湿度控制在75% -85%即可。
[0024] 步骤C中所述增殖分化培养基在已经剪取增殖试管苗后可再重复使用1次，具体 方法为向已使用过的增殖分化培养基中注入15-20毫升的液体培养液，W保证试管苗继续 进行有效分化。该液体培养液成分W MS为基础，向其中添加10000毫克/升的藏糖、1. 5 毫克/升的喔苯隆、0. 5毫克/升的6-予基氨基嘿岭、300-500毫克/升的水解乳蛋白，进 行有效分化培养，培养周期30-40天，可得到增殖试管苗。
[0025] 本发明所述方法在人为的培养环境中进行，给予了植物所需充分的营养、光照、温 度。不受自然环境干扰，周年可W进行繁殖，且繁殖速度快，苗木质量好，能够实现对白蜡树 优良种质资源的保存及标准化繁殖。
[0026] 本发明W白蜡树胶芽或茎尖外植体为材料，建立白蜡树组织培养快速繁殖体 系，，所培养的试管苗移栽成活率达90% W上，繁育周期短，加速了白蜡树繁育的进程，促 进了生物技术的应用，有效解决我国盐碱地大面积绿化所需绿植苗源的问题。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例对本发明所述内容做进一步详细的说明。
[002引 实施例
[0029] 用于繁育取材的白蜡树可W为野外生长健康的植株，例如生长于河北省沧州市海 兴县重盐碱地中生长的白蜡树，W树龄8年的白蜡树为例，选取当年生长的新芽，去掉多余 叶片和不合适的部分。
[0030] A、材料消毒；取白蜡树胶芽或茎尖带有生长点的部分，长度可选取2-3cm，用洁净 的流动水冲洗2-4小时，随后用滤纸吸除表面附着的水，用75%的酒精进行表面消毒20-30 砂，然后采用5%的次氯酸轴消毒20-25分钟，再用无菌水冲洗5-6次；
[0031] B、启动培养；用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后采用手术刀 (12厘米长，可W更换刀片）切取进胶芽或茎尖，接种到启动培养基中，置于22-28C的接种 室中，光照培养20-25天，得到试管苗，启动培养基为在38000毫克/升MS固体培养基中添 加喔苯隆2毫克/升制备而成；
[0032] C、增殖分化培养；将步骤B培养的试管苗剪切成0. 3-0. 5厘米的茎段、茎尖，接种 至增殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30-40天，得到增殖试管苗，增殖培养 基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添加水解乳蛋白300-500毫克/升、喔苯隆1. 5 毫克/升、剛巧己酸0. 5毫克/升制备而成；
[0033] D、生根培养；剪取2. 5-3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养基中进行 生根培养，培养周期为20-30天，得到生根苗，生根培养基为在19000毫克/升的MS培养基 中添加琼脂5-6克/L、剛巧下酸1-1. 5毫克/升、蔡己酸0. 5-1毫克/升制备而成；
[0034] E、移栽；将新幢石装入35个穴的苗盘中，然后用自来水湿润幢石达含水量90% W上，从培养容器中轻轻取出生根苗，选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养 基，移栽至湿润的幢石中，喷水至幢石饱和，用专用塑料透明盖覆盖，置于温度22-25C、光 照500-600LX条件下进行培养，7-10天掲盖塑料盖，控制湿度为75% -85%，培养周期为 20-25天，得移栽苗；
[00巧]F、壮苗培养；将移栽苗放置于室温条件下，每周德一次营养液，营养液为1/2MS营 养液或0. 2%尿素，进行壮苗培养50-60天，移栽苗生长健壮、叶片浓绿，即可移栽至苗圃。
[0036] 共取材H批，每批取材100例，移栽时所得H批试管苗的移栽成活率分别为90%、 94%、95%。
[0037] 本发明所述MS培养基配方如表1所示。
[0038] 表 1
[003引成分（mg/L)
[0040]
【权利要求】
1. 白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，包括以下操作步骤： A、 材料消毒：取白蜡树腋芽或茎尖，用流动水冲洗2-4小时，随后用滤纸吸除表面附着 的水，用75 %的酒精进行表面消毒20-30秒，然后采用5 %的次氯酸钠消毒20-25分钟，再 用无菌水冲洗5-6次； B、 启动培养：用消毒滤纸吸除步骤A已消毒材料表面附着的水，随后对材料进行截取， 接种到启动培养基中，置于22-28°C的接种室中，光照培养20-25天，得到试管苗，启动培养 基为在38000毫克/升MS固体培养基中添加噻苯隆制备而成； C、 增殖分化培养：将步骤B培养的试管苗剪切成0. 3-0. 5厘米的茎段、茎尖，接种至增 殖分化培养基中进行增殖分化培养，培养周期为30-40天，得到丛生增殖试管苗，增殖培养 基为在38000毫克/升的MS固体培养基中添加水解乳蛋白、噻苯隆、吲哚乙酸制备而成； D、 生根培养：剪取2. 5-3厘米健壮的单芽增殖试管苗，接种到生根培养基中进行生根 培养，培养周期为20-30天，得到生根苗，生根培养基为在19000毫克/升的MS培养基中添 加琼脂、吲哚丁酸、萘乙酸后制备而成； E、 移栽：选取带有完整根的生根苗，用清水洗去根基部的培养基，移栽至湿润的蛭 石中，喷水至蛭石饱和，置于温度22-25°C、光照500-600LX条件下进行培养，培养周期 为20-25天，得移栽苗，培养过程中1-9天控制湿度为> 90%，第10天后控制湿度为 75% -85% ； F、 壮苗培养：将移栽苗放置于室温条件下，每周烧一次营养液，浓度为1/2MS营养液或 0. 2%尿素，进行壮苗培养为50-60天，移栽至苗圃即可。
2. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤A中所述 腋芽或茎尖为当年生长的腋芽或茎尖。
3. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤B中所述 截取的长度为〇. 3-0. 5厘米。
4. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤B中所述 添加噻苯隆的浓度为2毫克/升。
5. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤C中所述 添加水解乳蛋白的浓度为300-500毫克/升，噻苯隆的浓度为1. 5毫克/升，吲哚乙酸0. 5 晕克/升°
6. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤D中所述 添加琼脂的浓度为5-6克/升、吲哚丁酸1-1. 5毫克/升、萘乙酸0. 5-1毫克/升。
7. 根据权利要求1所述的白蜡树组织培养快速繁育的方法，其特征在于，步骤E中所述 湿润的蛭石的含水量彡90 %。
【文档编号】A01H4/00GK104396759SQ201410764750
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月10日 优先权日:2014年12月10日
【发明者】王玉珍, 刘小京, 张秀梅, 封晓辉, 谢志霞 申请人:中国科学院遗传与发育生物学研究所