一种快速繁殖苹果砧木SH6的方法与流程

本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种快速繁殖苹果砧木SH6的方法。
背景技术：
：苹果矮砧栽培方式长期以来受到国际上高度重视，欧美等大多数国家90％以上苹果栽培采用矮砧栽培方式，矮砧栽培也是今后我国苹果生产的发展方向。SH6是我国培育出的苹果矮化砧木，具有抗逆性强、结果早、产量高和品质优等特点，由于它自生根难等问题，在包括北京在内的我国主要苹果产区仍以矮化中间砧方式种植。采用植物组织培养技术可以在短时间内获得大量的组培苗，目前在花卉等物种已获得较多的实际应用成功案例，由于其具有不受时间和外界环境条件控制、节约土地、快捷高效的优点，已成为广泛应用的一种育苗手段，有助于实现规模化生产。但现有技术中，苹果矮化砧木品种SH6组培苗继代培养增殖系数低，不定根发生困难，大田移栽成活率较低，限制了其在组培工厂化育苗中的应用。技术实现要素：针对苹果矮化砧木品种SH6组培中存在的增殖系数低、不定根发生困难、大田移栽成活率低的现状，本发明提供一种快速繁殖苹果砧木SH6的方法，包括如下步骤：1)初代和继代培养：将苹果砧木SH6经灭菌消毒的含单个的叶芽茎段以初代培养基和继代培养基先后进行初代培养和扩繁继代培养；2)生根培养：切取步骤1)培养后的含单芽的茎段，接种到生根培养基上进行生根培养；3)炼苗和大田移栽：生根培养的组培苗根长达到2～3厘米时，进行炼苗和大田移栽；所述初代培养基是以MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的浓度为0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮浓度为200～400mg/L、蔗糖的浓度为25～30g/L、琼脂糖的浓度为5～7g/L的培养基；所述继代培养基是以MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的浓度为0.1～0.6mg/L、蔗糖的浓度为25～30g/L、琼脂糖的浓度为5～7g/L的培养基；所述生根培养基是以1/2MS固体培养基为基本培养基，含有吲哚丁酸的浓度为0.1～1.2mg/L、蔗糖的浓度为15～25g/L、琼脂糖的浓度为5～7g/L的培养基。其中，所述初代培养基，聚乙烯吡咯烷酮浓度优选为400mg/L。其中，所述生根培养基，吲哚丁酸的浓度优选为0.5～1.0mg/L，更优选为0.7～0.9mg/L，进一步优选为0.7～0.8mg/L，最优选为0.8mg/L。其中，步骤1)所述灭菌消毒，具体方法为：以水冲洗30分钟，体积百分浓度70％的酒精消毒10～60秒，无菌水冲洗2～4次，质量百分浓度0.1％的升汞消毒3～10分钟，无菌水冲洗2～4次。其中，所述初代培养和扩繁继代培养，培养条件为，温度20-28℃，湿度55-75％，光照14～18小时/天，光照强度1800-2200Lx。其中，所述生根培养，分为两个阶段：暗培养阶段：6～12天，温度18-26℃，湿度55-75％；光培养阶段：6～10天，温度18-26℃，湿度55-75％，光照16～20小时/天，光照强度1800-2200Lx。其中，所述炼苗，为在温室大棚内闭瓶炼苗3天，开瓶炼苗3天。其中，所述大田移栽，为洗去生根组培苗的培养基，采用质量百 分浓度0.2％的多菌灵进行根部消毒，移栽入泥炭：珍珠岩：蛭石体积比为1：1：1的基质中，待根系发育完全后移栽到大田。本发明还提供所述的快速繁殖苹果砧木SH6的方法，在苹果繁育中的应用。本发明的有益效果在于：本发明可以实现苹果矮化砧木SH6的组培快速繁殖，继代培养周期25天时，增值系数达到8～10倍，生根时间不长于15天，生根率达到90％以上，炼苗驯化后大田移栽成活率大于85％，为苹果矮化砧木品种SH6组培工厂化繁育提供简单快捷高效的技术方法。附图说明图1是实施例1中苹果矮化砧木SH6继代培养照片；图2是实施例1中苹果矮化砧木SH6生根培养瓶底照片；图3是实施例1中苹果矮化砧木SH6生根苗照片；图4是实施例1中苹果矮化砧木SH6组培生根苗穴盘生长照片。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1在北京市顺义区杨镇苹果组织培养实验室试验了本发明的方法，建立苹果矮化砧木无菌系，进行继代培养和生根培养，生根组培苗经驯化后进行了大田移栽，具体如下：1)苹果矮化砧木SH6无菌系的建立选择苹果矮化砧木SH6的单株营养枝，剪取带顶芽或侧芽的茎段，外植体消毒用自来水冲洗30分钟，70％酒精消毒10～60s，无菌 水冲洗2～4次，0.1％升汞消毒3～10分钟，无菌水冲洗2～4次。进行初代培养，培养条件为：温度20-28℃，湿度55-75％，光照14～18小时/天，光照强度1800-2200Lx。筛选聚乙烯吡咯烷酮浓度(PVP-40)浓度，在MS+6-BA0.4mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖25g/L+琼脂糖5g/L的培养基上设置PVP-40的浓度为0mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L，结果如表1所示：表1PVP-40浓度对褐化率的抑制作用PVP-40浓度(mg/L)污染率(％)褐化率(％)成活率(％)032.65±1.3691.03±1.9426.87±1.5620035.32±2.6536.37±2.8433.18±2.4140034.41±2.0721.68±1.8341.36±2.0460036.85±1.6741.83±2.3730.25±1.9880037.16±1.8363.85±3.0429.41±2.31100033.82±2.1789.73±2.5727.21±2.09由表1可以看到褐化率在PVP-40200～400mg/L时能得到很好的抑制，尤其是PVP-40400mg/L时，褐化率仅为(21.68±1.83)％最终根据筛选结果，初代培养采用的培养基为MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+PVP-40200～400mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂糖5～7g/L的培养基(即以MS固体培养基为基本培养基，含有6-苄氨基嘌呤的浓度为0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的浓度为0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮浓度为200～400mg/L、蔗糖的浓度为25～30g/L、琼脂糖的浓度为5～7g/L的培养基)2)苹果矮化砧木SH6的扩繁继代培养初代培养后30天进行继代培养，苹果矮化砧木SH6的初代培养试验材料，采用培养基为MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂糖5～7g/L的培养基进行继代培养(见图1)，培养条件为：温度20-28℃，湿度55-75％，光照14～18小时/天，光照强度1800-2200Lx，进行快速增殖；继代培养30～35天后就可以进行 生根培养；3)苹果矮化砧木SH6的生根培养筛选吲哚丁酸(IBA)浓度，在1/2MS固体培养基上分别添加0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L……1.2mg/L的吲哚丁酸，其对生根率的影响如表2所示。表2IBA浓度对生根培养的影响结果表明，在培养基上添加0.1～1.2mg/L的吲哚丁酸相比不添加能提高生根率，尤其是吲哚丁酸的浓度为0.5～1.0mg/L时生根率能达到55％以上，吲哚丁酸的浓度为0.7～0.9mg/L时生根率达到80％以上，吲哚丁酸的浓度为0.7～0.8mg/L时生根率高达85％以上，当吲哚丁酸的浓度为0.8mg/L时生根率最高。因此，苹果矮化砧木SH6的生根培养的具体步骤为将苹果矮化砧木SH6的继代培养材料切分为单芽，采用培养基为1/2MS+IBA0.1～1.2mg/L+蔗糖15～25g/L+琼脂糖5～7g/L的培养基(即以1/2MS固体培养基为基本培养基，含有吲哚丁酸的浓度为0.1～1.2mg/L、蔗糖的浓度为15～25g/L、琼脂糖的浓度为5～7g/L的培养基)进行生根 培养(见图2、图3)，分为两个阶段，暗培养阶段：6～12天，温度18-26℃，湿度55-75％，光培养阶段：6～10天，温度18-26℃，湿度55-75％，光照16～20小时/天，光照强度1800-2200Lx。4)苹果矮化砧木SH6生根苗的炼苗和大田移栽生根培养的苹果矮化砧木SH6组培苗根长达到2～3厘米时，移至温室大棚闭瓶炼苗3天，开瓶炼苗3天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，采用0.2％多菌灵进行根部消毒处理，移栽入穴盘中(见图4)，穴盘填充基质为泥炭：珍珠岩：蛭石(1：1：1)混合物，待根系发育完全后移栽到大田。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页1 2 3