本发明属于农业
技术领域：
，具体地说，本发明涉及一种高效快速繁殖牡丹的方法。
背景技术：
：牡丹属于芍药科(原毛莨科)芍药属牡丹组(Sect.MoutanDC.)植物，原产我国，是我国传统名花。自然条件下适宜移栽期在每年的九月下旬到十月上旬。由于牡丹的适宜移栽期短，移栽后生根困难，常常造成牡丹移栽后成活率低，缓苗期长，植株生活力弱，限制了牡丹的广泛栽培和观赏价值的提高。牡丹用于群体绿化美丽中国和油料生产亟需大量优质种苗。目前生产上繁殖牡丹种苗的方法主要有播种、嫁接、分株和吊包等方法，播种繁殖的实生苗存在两个严重问题，繁殖后代群体变异大，苗木质量难以保证；田间播种繁殖的植株大多数带有根结线虫病，容易导致病疫传播，严重制约产业发展和国内外交流。牡丹无性繁殖方式主要有嫁接、分株、吊包等，这些繁殖方式受到母株品质和繁殖材料数量和质量限制，主要用于观赏牡丹品种繁殖，且种苗大小、长势等参差不齐，难以标准化或量化生产。牡丹无性繁殖存在的主要问题是：(1)外植体(鳞芽)表面消毒困难，需要用剧毒消毒剂氯化汞，其残留对环境、操作者和培养材料等会有影响；(2)不定芽在培养基上容易褐化以至死亡；(3)试管苗生根困难，移栽驯化难以成活。小植株(生根试管苗)从实验室环境过渡到适应田间环境的过程中容易死亡。本领域技术人员致力于开发牡丹生根剂，能够促进牡丹移栽后新根形成和生长，延长牡丹移栽的适宜期，满足人们对栽种牡丹花的迫切需求。技术实现要素：本发明的目的在于一种高效快速繁殖牡丹的方法。本发明第一方面，提供了一种高效快速繁殖牡丹的方法，包括步骤：(1)制备插穗：选取牡丹的一年生枝条，修剪成长度为5-15cm的插穗，将所述插穗的下端用55℃～65℃水浸泡30min～90min；(2)制备生根基质：取以下组分：以重量份数计，枯草芽孢杆菌菌剂5～15、尿素3～5、四硼酸钠0.2～0.4、磷酸二氢钾0.5～1、硫酸锰0.03～0.05、钼酸铵0.1～0.2、多效唑0.3～0.5、萘乙酸(NAA)0.02～0.04、吲哚丁酸(IBA)0.01～0.03，加入等重的水中，混合均匀得生根营养液；然后将生根营养液和棉籽粉以重量比为1:1～2比例混合，充分搅拌，使棉籽粉完全吸收生根营养液，制得所述生根基质；(3)扦插：将步骤(1)经浸泡处理的插穗，扦插于所述生根基质中；和(4)培养：在环境温度不低于20℃的条件下，培养20-30天后，获得扦插成活的牡丹植株。优选地，所述步骤(1)中，插穗的下端用58℃～60℃水浸泡40min～60min。优选地，所述步骤(2)中，以重量份数计，枯草芽孢杆菌菌剂10、尿素4、四硼酸钠0.3、磷酸二氢钾0.8、硫酸锰0.04、钼酸铵0.15、多效唑0.4、萘乙酸(NAA)0.03、吲哚丁酸(IBA)0.02，加入等重的水中，混合均匀得生根营养液。优选地，所述步骤(2)中，将生根营养液和棉籽粉以重量比为1:1比例混合。优选地，所述步骤(4)中，维持环境温度为25-28℃，维持相对湿度为80-99％。优选地，所述插穗的直径为0.4-1.0cm，较佳地为0.5-0.8cm。优选地，所述插穗的的长度为7-10cm。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。本发明采用的菌种如下：枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。按照说明书上的常规方式培养。种子培养基配方为：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏、1L水；发酵培养基配方为：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆饼粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。所述菌株特性是产耐高温α-淀粉酶的酶活力高，耐热、耐酸性强。所述菌株特点如下：所述菌株在固体平板上菌落颜色为乳白色，表面干燥不透明，边缘整齐，为具有运动性的好氧菌。镜检为长杆状，革兰氏染色呈阳性。该菌可利用柠檬酸盐，硝酸还原、V-P实验成阳性。实施例1制备枯草芽孢杆菌菌剂：将枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926的保藏菌种划线转接到活化斜面37℃恒温静置培养48h。接1环生长良好的活化斜面种子至种子培养基中，种子培养基为：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化钠、0.5g牛肉膏、1L水。于37℃、120r/min条件下培养24h。将活化后的种子接入液体发酵培养基中，接种量为5％，液体发酵培养基为：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆饼粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。发酵枯草芽孢杆菌48h后，发酵液经过板框过滤后进行干燥处理，干燥后的培养物即为枯草芽孢杆菌菌剂。牡丹(品种：洛阳红)繁殖：(1)制备插穗：选取牡丹的一年生枝条，修剪成长度为10cm的插穗，插穗的直径为0.8cm，将所述插穗的下端用60℃水浸泡60min；(2)制备生根基质：取以下组分：枯草芽孢杆菌菌剂100kg、尿素40kg、四硼酸钠3kg、磷酸二氢钾8kg、硫酸锰0.4kg、钼酸铵1.5kg、多效唑4kg、萘乙酸(NAA)0.3kg、吲哚丁酸(IBA)0.2kg混合，加入等重(157.4kg)的水中，混合均匀得生根营养液；然后将生根营养液和棉籽粉以重量比为1:1比例混合，充分搅拌，使棉籽粉完全吸收生根营养液，制得所述生根基质；(3)扦插：将步骤(1)经浸泡处理的插穗，扦插于所述生根基质中；和(4)培养：在环境温度不低于20℃、相对湿度为80-99％的条件下，培养25天后，获得扦插成活的牡丹植株。优选地，所述步骤(4)中，维持环境温度为25-28℃，维持相对湿度为80-99％。对比例1同实施例1，不同之处在于，步骤(1)的插穗不用热水浸泡。对比例2同实施例1，不同之处在于，不使用生根基质扦插，使用大田土壤扦插。牡丹扦插繁殖结果如表1所示。表1组别插穗生根率平均不定根条数平均根长实施例192％38.66.2cm对比例163％14.83.8cm对比例246％26.45.7cm实验结果表明，使用本发明的方法进行牡丹繁殖，插穗成活率极高，可以快速高效地繁殖牡丹。在插穗处理上，采用热水浸泡的方式，不仅可以消毒消除病菌污染，有效的减少烂根现象的发生，还能促进生根(生根率较使用杀菌剂浸泡时提高了约20％)，配合本发明的生根基质，插穗生根率可以达到90％以上，显著提高了插穗成活率。使用棉籽粉制备的生根基质，不仅能够极好的保持营养，起到缓释的作用，同时棉籽粉中的含有的棉籽酚能够显著提高扦插植株对病菌和害虫的抵抗能力，提高扦插成功率。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。当前第1页1 2 3